浅谈光照与松果体及动物生殖、生长相互关系(续)

(五)松果体的显微及超微结构 松果体由间脑背面凸出而形成。大多数脊椎动物都有松果体,但八目鳗、鳄鱼以及至少两种软骨鱼类(电鳐及石纹电鳐)和数种哺乳动物(包括鲸)都没有松果体,象和犀牛的松果体则很小。 1.哺乳动物松果体的显微及超微结构:松果体的外面包有一薄层结缔组织被膜,被膜中的结缔组织伸入实质内,将实质分为若干不规则的小叶,小叶间隔内含有血管和无髓神经纤维。间隔结缔组织的含量随年龄的增长而增加。在间隔结缔组织中可见有成纤维细胞、组织细胞、浆细胞和肥大细胞,偶可见有黑色素细胞及横纹肌纤维。松果体实质主要由松果体细胞(约占细胞总数的90％)和神经胶质细胞构成。在某些动物,偶而还可见有神经细胞。     

信号肽对O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中表达及分泌的影响

构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5′端相连,分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western-blot检测CHO培养基中重组表位蛋白累积量,研究结果表明,O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中成功分泌表达,不同的分泌型信号肽明显改变O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO培养基中的累积SCGB1D1 isoform信号肽介导的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白表达量最高。综上所述,合适的分泌型信号肽促进O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中的分泌。     

冬春季莱芜黑山羊松果体功能状态的免疫组织化学比较

应用5-HT免疫组织化学染色法,对冬春两季的莱芜黑山羊松果体进行了观察比较,以探讨松果体与下丘脑垂体-性腺轴的关系。结果显示,莱芜黑山羊松果体内存在大量5-HT阳性的松果体细胞及5-HT纤维;冬季松果体阳性细胞面积及阳性面积比都明显大于春季(P<0.01),平均光密度在冬、春季间无明显差异(P>0.05)。表明莱芜黑山羊松果体的功能活动呈现季节性变化,与羊的繁殖活动关系密切。     

土耳其斯坦东毕吸虫结节变种尾蚴头腺的超微结构观察

经对土耳其斯坦东毕吸虫结节变种（Ｏｒｉｅｎｔｏｂｉｌｈａｒｚｉａｔｕｒｋｅａｆａｎｉｃａｕａｒ，ｔｕｂｅｒｃｕｌａ－ｔａ）尾蚴头腺的超微结构观察，发现其头腺为一单细胞腺体，位于头器中央的后部。腺细胞内含有电子密度较高的分泌颗粒，部分分泌颗粒中含有一个约占其直径１／３的电子空白区。腺细胞基底部发出数个分泌导管通向虫体前端。     

鹅瘟的研究

从10日龄鹅胚自62日龄急剧下痢的病死鹅脑、心、肝、脾、肾、腔上囊、空肠内容物中分离出鹅瘟病毒(细小病毒)。病死鹅肝细胞核丝状分裂、变性,核内嗜碱性包涵体;心肌细胞核内嗜酸性(嗜伊红)包涵体;腺胃腺细胞变性、脱落、核内嗜伊红包涵体;胰 腺 腺 细胞变性、脱落、核内嗜伊红包涵体;淋巴细胞变性、脱落、核内嗜碱性包涵体,腔上囊内纵平滑肌纤维、外环平滑肌纤维细胞核嗜碱性包涵体;空肠内形成干酪样凝固栓子,肠腺细胞核内嗜伊红包涵体。该株鹅瘟病毒在本地鹅胚中适应性强、繁殖稳定、致死鹅胚迅速、胎儿病变典型。经标准抗小鹅瘟高免卵黄处理后失去感染力。用感染的鹅胚尿囊液攻击60日龄鹅,试验鹅全部下痢急性死亡。     

比格犬肾上腺髓质嗜铬细胞的电镜观察

应用透射电镜观察 ,发现比格犬肾上腺髓质中含有 3种嗜铬细胞 ,即肾上腺素细胞、去甲肾上腺素细胞和小颗粒嗜铬细胞。它们均含较丰富的细胞器和大量的分泌颗粒 ,颗粒表面有膜包裹 ,内含核芯。其主要区别 :肾上腺素细胞呈多边形或圆形 ,去甲肾上腺素细胞为多边形或柱状 ,小颗粒嗜铬细胞为细长锥状 ;肾上腺素细胞的分泌颗粒 ,其核芯多位于中央 ,核芯与界膜之间有一狭窄的空晕 ;去甲肾上腺素细胞的分泌颗粒 ,其核芯偏于颗粒一侧并贴于界膜上 ,而使颗粒的另一侧留下一个较大的腔隙 ;小颗粒嗜铬细胞的分泌颗粒较小 ,内部结构与肾上腺素细胞的相似。     

纤细背孔吸虫的卵黄细胞发育和虫卵超微结构观察

应用透射电镜和扫描电镜观察纤细背孔吸虫 (Notocotylusattenuatus)的卵黄细胞发育和虫卵超微结构。结果显示 ,纤细背孔吸虫卵黄细胞的发育过程分为 3个时期 :Ⅰ期为未发育的卵黄细胞期 ,细胞外形不规则 ,核大 ;Ⅱ期为发育中的卵黄细胞期 ,细胞增大 ,胞质内出现大量粗面内质网 ,卵黄颗粒明显增加 ;Ⅲ期为成熟卵黄细胞期 ,胞质内可见单个类脂滴并充满卵黄球 ,卵黄球内含卵黄颗粒 9～ 3 7个 (X =2 0 .45 ,n =2 0 )。虫卵两端具有卵丝 ,一端具有卵盖 ,卵盖与卵壳交接处有 2条环状隆起 ,卵内含有胚细胞和脂滴。胚细胞的胞质内含有核仁样的细胞质体和线粒体     

猪伪狂犬病病毒变异株感染绵羊胚胎鼻甲上皮细胞的病毒形态发生和细胞超微结构观察

应用超薄切片和透射电子显微镜技术,研究猪伪狂犬病病毒(PRV)MQ18变异株感染绵羊胚胎鼻甲上皮细胞(OFTu)的病毒形态发生和超微结构变化。结果显示:病毒在细胞核内复制、增殖,形成核内包涵体,装配好的病毒通过核内膜获得初始囊膜,以出芽方式出核进入细胞质,在高尔基体区域进行加工修饰、二次获得囊膜后形成完整病毒粒子,以包裹有病毒粒子的空泡与细胞膜相互融合方式,将病毒释放到细胞外;细胞超微结构主要表现为细胞质内空泡增多,线粒体增生、肿大,空泡样变,粗面内质网扩张,高尔基体形态异常,细胞核染色质浓缩、边集,最后细胞破坏、裂解,可见细胞早期凋亡及自噬小体结构。本研究结果为阐明PRV的感染和致病机制提供了理论依据。     

比格犬甲状腺显微与超微结构的观察

应用光镜和透射电镜技术,观察了3~6月龄比格犬甲状腺的显微和超微结构。结果表明,比格犬甲状腺实质由滤泡和滤泡旁细胞构成。滤泡呈圆形或椭圆形,直径20.22~220.00μm,平均90.80μm;由单层立方上皮细胞围成,细胞高度3.04~7.11μm,平均5.18μm,电镜下可见功能状态不同的两型滤泡上皮细胞;滤泡旁细胞很多,直径4.40~8.82μm,平均6.23μm,位于滤泡之间或镶嵌于滤泡上皮细胞之间,也可聚集在一起形成滤泡样结构,胞质内含有大量的分泌颗粒,电镜下也可见两种类型的滤泡旁细胞。     

人工感染鸡包涵体肝炎病毒的鸡胚病理学观察

用３２只１１日龄ＳＰＦ鸡胚，随机分组，分别接种禽腺病毒（ＡＡＶ）２、３、４、５、８型种毒和野毒ａ、ｂ株悬液０．２ｍｌ／只。对接种后２４小时以后死亡的胚和１８日龄时扑杀的全部鸡胚进行大体病理变化、病理组织学变化和超微结构病理变化观察。试验结果表明，试验各组的鸡胚均发育不良，表现为胚体瘦小，羽毛稀少，ＡＡＶ－２、３、４、５、８型和野毒ａ、ｂ株均能对鸡胚致病，主要病变均为坏死性肝炎，在肝细胞核内和胞浆中形成嗜碱性或嗜酸性包涵体；透射电镜观察，试验各组肝细胞中均可见到病毒颗粒，核内可见电子密度致密的病毒前体物质，病毒直径６０～７０ｎｍ，无囊膜。ＡＡＶ－３型和野毒ｂ株在细胞核、胞浆、线粒体病毒颗粒排列为晶格状，其它各型多为散在分布。肝细胞超微结构变化主要表现为线粒体、内质网、高尔基复合体扩张甚至破裂，核糖体脱失，核染色质边集、浓缩和溶解，核膜破裂而核崩解。     

细胞周期及其调控研究进展

细胞周期 (ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ)是单个真核细胞生长和分裂成子细胞的过程 ,是自酵母至人类普遍存在的模式。细胞周期大致可分 4期 :Ｇ1期细胞开始生长 ;Ｓ期ＤＮＡ开始合成 ,染色体开始复制 ;Ｇ2期为第二生长期 ;Ｍ期为细胞有丝分裂期。是什么在推动着细胞周期的运行 ,只是近几年才从分子生物学找到了答案。过去一致认为细胞周期是受核控制的 ,细胞浆是被动跟随。但荷兰学者Ｈａｒａ及Ｔｙｄｅ ｍａｎ发现 ,即使去掉核 ,细胞仍会周期性的收缩 ,表明细胞分裂不完全受控于细胞核 ,在胞浆中有调节细胞周期的因子存在 ,这种因子称为Ｍ期促发因子…     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及对应抗原表位区的分析

以鹅细小病毒非结构蛋白NS1(GPV-NS1)的重组质粒pcDNA3.1-GPV-NS1及纯化的重组蛋白GPV-NS1为抗原,分组免疫4～6周龄的BALB/c鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并研究其部分生物学特性.结果共获得6株能稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株.单克隆抗体亚型鉴定结果显示,2株为IgG2a型,4株为IgM型,轻链均为κ链.用制备的单克隆抗体对分段表达的NS1蛋白进行免疫印迹分析,结果鉴定出3个抗原表位区,分别位于NS1蛋白的第453～514 aa、485～542 aa、533～598 aa区段.证实,6株杂交瘤细胞在体外长期培养能稳定地分泌抗GPV-NS1单克隆抗体.     

牛羊蜱传性血液原虫超微结构研究——大巴贝斯虫的超微结构观察

电镜观察显示，人工感染大巴贝斯虫的黄牛红细胞有一层绒毛外衣。虫体有双梨子形、单梨子形和形状多变的滋养体。细胞质内有前、后极地环及微丝体、棒状体、线粒体和内质网。除核外还观察到一个球形体。典型的双梨子虫体可见有双生的子细胞在末端相连，维持一段时间后分离，形成单梨子形虫体。滋养体的形态是多变的。大巴贝斯虫红内期的超微结构与双芽巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫相似。     

抗O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以高浓缩的O型口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以重组表达的O型重组VP1蛋白(O-r VP1)为筛选抗原,利用杂交瘤技术获得1株可稳定分泌抗O型FMDV VP1蛋白抗体的杂交瘤细胞株1C7,染色体数高于任一亲本细胞的染色体数目;腹水的抗体效价为1︰105,质量浓度为4.7 mg/m L。1C7单克隆抗体为IgG2b亚型,相对亲和力常数为1.5 mol/L,能够与O型FMDV特异性地结合,且仅与结构蛋白VP1反应。稳定性鉴定结果表明1C7株能稳定分泌抗体。阻断ELISA试验表明1C7单克隆抗体能够被O型FMDV免疫阳性血清特异性地阻断。本研究为进一步建立O型FMDV抗体的阻断ELISA及胶体金免疫层析快速检测方法奠定了基础。     

家禽疑核向脊髓的直接投射及细胞构筑——HRP微电泳法研究

采用微电泳技术，将３０％辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）分别引入北京鸭、麻鸭、鹅、鸡、鸽和鹌鹑的脊髓颈中部、颈膨大部和腰膨大部的一侧灰质中，灌流固定，冰冻连续切片，ＢＤＨＣ法显色，中性红复染，明视野显微镜下观察并摄影。研究结果：家禽的疑核位于延髓的近腹外侧网状结构中，纵贯延髓的全长，尾端与副神经的脊髓核相连续，细胞呈弥散性分布，多数为大型神经元。在延髓的尾端，闩以后的部分，双侧疑核内出现了许多标记细胞。这些酶标细胞与副神经的脊髓核神经元混杂在一起，标记细胞的胞体直径为２１～４０μｍ，突起很明显，为典型的星形多极运动神经元。胞体和突起内聚积了大量的深蓝色酶标反应产物。在颈中部引入ＨＲＰ后，出现的标记细胞数量最多，在颈膨大和腰膨大引入ＨＲＰ后依次减少。６种家禽的种间差异不显著。研究结果表明，家禽疑核的传出纤维可以直接下行投射到脊髓各段，这一直接传导通路呈双侧性投射而以向对侧脊髓投射为主     

高铜对雏鸡器官组织病理损害的研究

将420只1日龄艾维茵健雏,随机分为7组,分别饲以含铜量11 mg/kg的基础日粮和含铜量分别为100、200、300、400、500和600 mg/kg的6种高铜日粮6周,研究高铜对雏鸡的病理损害。结果显示,日粮含铜100和200 mg/kg对雏鸡有促生长作用。日粮铜水平达300 mg/kg以上时,对雏鸡器官组织造成不同程度的病理损伤,表现为肌胃角质层增厚呈黄褐色；肝呈浅黄色或深褐色,肝细胞脂肪变性；消化道上皮细胞变性坏死；免疫器官和肾、心脏、胰腺、大脑等器官的实质细胞肿胀；淋巴免疫器官体积缩小,淋巴细胞数量减少。超微结构观察发现,肝细胞胞浆和胞核内见有数量不等、大小不一的高电子密度的沉积物；凋亡的淋巴细胞染色质呈花瓣样、半月形或环形,聚集在核膜下。表明,肝、消化道和免疫器官是高铜损害的主要靶器官。     

双峰驼胃腺囊区有腺部的组织学与组织化学研究

采用组织学与组织化学方法对骆驼前胃特有的三个腺囊区有腺部黏膜研究表明 ,其黏膜的组织结构和糖共轭物呈色反应基本相同 ,并和骆驼及其他动物的贲门腺区结构相似。所含腺体为黏液性腺体 ,呈短而直的单管状 ,直接开口于浅而密集的胃小凹。黏膜表面上皮、胃小凹上皮和腺上皮均呈柱状 ,但从黏膜表面到腺体盲端逐渐变矮 ,腺底部上皮核上细胞质呈弱嗜碱性 ,有嗜碱性颗粒。所有上皮的细胞质均可分泌中性糖和酸性糖共轭物 ,但呈色反应从黏膜表面上皮到腺体盲端逐渐减弱 ,黏膜表面上皮以分泌中性糖共轭物为主 ,而腺底部细胞以分泌酸性糖共轭物为主。在黏膜表面还附有一层很厚的混合糖共轭物。三个腺囊区的主要差异表现在第二室腺囊区面积最小 ,腺囊容积也最小 ,但腺囊数目最多 ,囊底黏膜褶丰富 ,黏膜层厚 ,腺体密集 ,深而密布的胃沟将黏膜分成无数小区 ,腺体中的亲银细胞丰富 ,明显多于前、后腺囊区 ,提示此区尚有分泌大量 5 羟色胺的功能     

抗小鹅瘟血清的制备及应用

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）引起雏鹅的一种高度接触性致死性传染病，１０日龄以内的雏鹅尤其易发，发病率和死亡率可达１００％，给养鹅业造成严重的经济损失。近年来，我们利用成年鹅制备抗小鹅瘟血清（ＧＰＳ）共接种雏鹅３０余万只，取得了较好的防治效果。１　材料与方法１．１　材料１．１．１　标准阳性血清　购自江苏农学院微生物教研室。１．１．２　鹅胚和雏鹅来源　鹅胚、雏鹅均由非免疫的易感鹅种蛋孵育而成；自然病例选自安徽省怀远县某乡镇的养鹅户；成鹅为出栏前３０ｄ、体重２ｋｇ以上的健康鹅群。１．２　方法１．２．…     

鹅IL-18基因的克隆和原核表达及其多克隆抗体的制备

参考GenBank中鸡、火鸡和鸭IL-18基因序列,设计了1对特异引物,以提取的鹅脾细胞总RNA为模板,应用RT-PCR扩增、克隆鹅IL-18基因中间的333bp序列。序列分析结果表明,其与鸭IL-18基因对应序列相似性最高,达99%。参考鸭IL-18全基因序列设计上、下游引物各3条,以梯度PCR探索扩增、克隆鹅IL-18全基因。以上述策略成功扩增、克隆了3个广东地方杂交品种鹅的IL-18基因。序列分析表明,这3个杂交品种鹅的IL-18基因序列一致,长642bp,含一个603bp的ORF,编码200个氨基酸,分子质量为23.2ku。ORFN端的30个氨基酸为前导序列,其余170个氨基酸为功能蛋白序列。在GenBank中注册了第一条鹅的IL-18基因序列,登录号为EF159728。随后,构建了鹅IL-18基因ORF的重组原核表达质粒pET-GIL-18,经诱导表达、纯化获得重组鹅IL-18融合蛋白,并以其制备了兔抗重组鹅IL-18多克隆抗体。