浅谈猪瘟的实验室诊断方法

本文对20多年来有关猪瘟的实验室诊断技术和方法所取得的进展予以回顾。 (一)荧光抗体组织切片试验(FATST) 1963年Scair等首次用FATST诊断猪瘟取得了可喜结果。后来许多研究者对其可靠性作了证实。采取猪瘟早期病猪的扁桃体和淋巴结或晚期病猪的脾脏和肾脏等组织,作冰冻切片或组织印片,丙酮固定后用猪瘟荧光体染色检查,感染猪组织细胞呈现特异性的胞浆荧光。用这种方法对病猪的检出率为90％以上,实验感染猪瘟病毒(HCV)后2天,即可查到病毒荧光。其优点是准确、简便、快速,一般在2小时内即可得出结果。但有人报道,猪接种猪瘟弱毒活疫苗后短时间内,苗毒荧光干扰对野毒的诊断。     

非洲猪瘟的实验室诊断

非洲猪瘟(ASF)是猪的一种病毒病,表现为急性和超急性出血性疾病和高度死亡率,发生于东部和南部非洲。疣猪和其他野猪是感染的贮存宿主,它们表现无症状的感染。家猪常因和这些动物接触后而发病。 近廿年来,ASF已成为世界养猪业的主要威胁。1957～1960传到葡萄牙和西班牙,迄今仍然是地方流行性疫病,招致严重     

广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测

对广西 16个养猪场的 2 2份断奶仔猪病料用PCR技术检测猪圆环病毒 2型 (PCV 2 ) ,对阳性病料进一步检测猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及细菌性病原。结果 ,从南宁市郊某猪场表现衰弱症状的病猪病料中检测出PCV 2 ,而这些病料没有检出猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及可疑细菌 ,证实广西存在PCV 2引起的断奶仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)。     

非洲猪瘟病毒免提取核酸荧光定量PCR检测方法的建立

根据非洲猪瘟病毒(ASFV)保守的VP72基因序列,设计特异性引物和探针,经过优化反应体系中各组分及反应条件,建立了直接检测样品中ASFV的荧光定量PCR方法,并分析该方法的特异性和敏感性。结果显示,该直扩荧光定量PCR方法只对ASFV有特异性扩增,对其他几种相似疾病病原的灭活抗原,如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、口蹄疫病毒、印第安纳型水泡性口炎病毒、新泽西型水泡性口炎病毒、猪流行性腹泻病毒等检测均呈阴性。敏感性试验结果显示,对10倍梯度稀释的非洲猪瘟病毒灭活抗原的检测敏感性可达1×10~(-6),与OIE推荐的传统的荧光PCR的检测敏感性相当。3个ASFV稀释度样品的组内和组间重复的变异系数均小于5%。该方法无须提取核酸,可在60 min内完成对样品的检测,检测快速、灵敏,结果准确,结合便携式荧光PCR仪,为野外或现场的非洲猪瘟病毒快速检测提供了一种切实可行的方法。     

非洲猪瘟病毒实时荧光RAA检测方法的建立

为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)简捷、高效的基层临床检测方法,本研究选取非洲猪瘟病毒保守基因B646L (P72)序列,设计特异性引物和探针,建立非洲猪瘟病毒实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。结果显示,所建立方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法灵敏度相当,低至10 copies,μL,检测时长仅需10 min,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均无交叉反应。对100份临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR结果一致,但相较于荧光定量PCR检测时间的2h,检测时间大大缩短。结果表明,本研究建立的方法灵敏度较高、特异性较好,为ASFV早期临床诊断提供了技术支持。     

猪高热病病原小新虫的探讨

高热病和小新虫 猪遭遇小新虫感染,可发作高热病,或小新虫肠炎。这种疫病流行于我国广阔地区已有多年,但尚未见有人阐发和报道。很早以前有人描述的猪的火症很可能就是此病,而病原一直是个谜。对此,近年来盛行两种论点,一说是猪瘟(慢性猪瘟、温和性猪瘟、兔毒回归猪瘟),另说是弓形体病,均难令人信服。弓形体发现至今已有七十二年的历史,近十年在我国有人遇到青链霉素无效的高烧病猪,只要一发现弓形,即定为弓形体病,此中很可能有错判之例。据我们两年来在猪高热病疫区调查,弓形体销声匿迹,却无例外地在所有病猪身上     

非洲猪瘟病毒感染免疫反应的研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种危害全球养猪业的灾难性疾病,临床上以急性、热性、出血性、高发病率和高死亡率为特征。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,也是我国必须上报的一类动物疫病。自上世纪二十年代出现以来,有关非洲猪瘟病毒的病原特性、流行特点以及免疫应答等多个方面的研究虽然已经开展,但是我们对其仍然知之甚少。本文概括总结了非洲猪瘟病毒感染后机体的免疫应答反应,以期为非洲猪瘟病毒的后续研究和疫苗研制提供理论依据。     

非洲猪瘟病毒环介导等温扩增诊断方法的建立

通过对GenBank中登录的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白基因序列进行分析,根据p72保守区序列设计合成了内(FIP,BIP)、外(F3,B3)2对引物,其中外引物扩增片段的大小为184bp。通过对反应条件进行优化,建立了非洲猪瘟LAMP检测方法。结果显示,该方法在62℃保温60min即可完成,最低可检测到1×101 copies/μL的病毒DNA,与常规PCR方法相比灵敏度高100倍。对ASFV、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒基因组DNA同时检测,结果仅有ASFV出现条带,而其他均未出现目的条带。表明,建立的ASFV-LAMP诊断方法具有较好的特异性和敏感性。     

古巴扑灭一次非洲猪瘟的侵袭

古巴从未发生过非洲猪瘟。1971年5月,哈瓦那省一个饲有一万多头猪的肥育猪场第一次发生非洲猪瘟疫情。继之传到另外三个猪场,至6月底,发病点达33个。根据临床症状、流行病学调查和试验室诊断(包括血球吸附试验、免疫扩散反应试验、萤光抗体检查及动物交互免疫试验)肯定是非洲猪瘟。但病毒是如何侵入古巴的,尚未查清。     

基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种危害性极强的病毒性疾病,该病的发生和流行对全球养猪业、猪肉食品供应及经济发展造成了巨大影响.ASFV基因组较大、编码蛋白众多,但目前很多病毒蛋白的功能尚不清楚.由于缺乏有效...     

非洲猪瘟病毒CD2v基因实时荧光PCR检测方法的建立

为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒(ASFV)实时荧光PCR检测方法,本研究根据ASFV CD2v基因序列,设计了TaqMan荧光PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针的比例,建立了ASFV的TaqMan实时荧光PCR检测方法。结果表明,本研究所建立的荧光PCR方法具有良好的特异性和敏感性,以重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.988,斜率为-3.025 4,最低检测限可达到10 copies/μL,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等多种猪病病毒不存在交叉反应。该方法重复性良好,批内和批间变异系数均小于2%。综上,本研究建立的非洲猪瘟CD2v基因实时荧光定量PCR方法为ASFV的检测提供了一种新的敏感、特异的分子检测技术。     

非典型猪瘟的诊断报告

1980年7月下旬至9月上旬,我市郊区黎明公社主要在未经猪瘟免疫猪中流行一种热性接触性传染病。病猪经抗菌素、磺胺类等多种药物治疗无效,死亡率很高。当时怀疑为猪瘟或弓形体病,但病理解剖未见典型猪瘟病变,最后通过实验室鉴别诊断,判定为非典型猪瘟。现报告如下。 发病情况     

特异性猪转移因子治疗猪瘟试验

1985年4月间,我们应用已用猪瘟疫苗免疫过的健康成年猪脾脏中提取的转移因子(Transfer Fac-ter,简称TF)治疗23例猪瘟病猪,现将情况报告如下: 材料 1.特异性猪TF,系由金湖县人民医院检验科和金湖县畜牧兽医站从用猪瘟疫苗免疫的健康成年猪脾脏中提取的转移因子。批号:兽TF-840514,制备工艺从略。 2.病猪:来源某农场1985年4月流行猪瘟的架子猪,体重15～25公斤。经流行病学调查,临床症状,病理剖检,猪瘟酶标记法试验等诊断,为猪瘟病猪23头,供本试验用。     

兰州地区猪瘟的流行情况及防制措施

猪瘟是一种急性、热性传染病。急性型病例呈败血病变化;病期较长的在发病后期常有猪霍乱沙门氏菌或巴氏杆菌等继发性感染,使病猪肠道（主要是大肠部分）和肺发生剧烈炎症及坏死。本病一年四季发生,不分猪种、年龄、性别都可感染。１流行情况近２ａ来,猪瘟在兰州地区常...     

非洲猪瘟的疫情分布和传播及其控制

概述了非洲猪瘟在世界范围内的分布、流行和控制情况.认为非洲猪瘟是猪的重大传染病,该病主要流行分布于非洲大陆,并逐步向欧洲、亚洲等世界其他国家蔓延.其传播方式以软蜱、野猪、污染物等媒介以直接和间接方式传播.该病缺乏有效的疫苗预防,有必要在病毒和易感宿主之间采用严格的生物安全措施防止非洲猪瘟疫情蔓延.     

多聚酶链反应技术检测非洲猪瘟

多聚酶链反应技术检测非洲猪瘟孙书华，孙淑芳，蒋正军，吴时友（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒（Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＡＳＦＶ）引起的一种传染病，目前已危及到世界许多国家养猪业的发展。该病毒呈二十面体结...     

日本家畜的法定传染病

、淤竺1病名\1牛 瘟牛 肺 疫口 蹄 疫流行性感冒流行性脑炎狂 犬 病炭 疽气 肿 疽出血性败血症布氏杆菌病猪 瘟非洲猪瘟猪水泡病猪 丹 毒马 绵ffl 羊 ;为该家畜的法定传染病日本家畜的法定传染病@文希震$兰州军区后勒部卫生部     

非洲猪瘟病毒CD2v基因实时荧光PCR检测方法的建立

为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒（ASFV）实时荧光PCR检测方法，本研究根据ASFV CD2v基因序列，设计了TaqMan荧光PCR引物及探针，通过优化退火温度、引物及探针的比例，建立了ASFV的TaqMan实时荧光PCR检测方法。结果表明，本研究所建立的荧光PCR方法具有良好的特异性和敏感性，以重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系，相关系数为0.988，斜率为 －3.025 4，最低检测限可达到10 copies/μL，且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等多种猪病病毒不存在交叉反应。该方法重复性良好，批内和批间变异系数均小于2%。综上，本研究建立的非洲猪瘟CD2v基因实时荧光定量PCR方法为ASFV的检测提供了一种新的敏感、特异的分子检测技术。     

应用萤光抗体法诊断猪瘟

目前许多国家,已应用萤光抗体法诊断猪瘟。这是一种特异性较高、并具有实用价值的诊断方法。日本应用的萤光抗体法分为两种:一种是从病猪脏器采取组织(最好是扁桃腺)涂抹标本或在冻结切片标本上进行萤光抗体染色;另一种是采取病猪的脾和扁桃组织作成乳剂接种子猪肾细胞,在1～2天内进行细胞染色。这两种方法,被广泛应用的是第二种,一般被称做组织培养萤光抗体法,主要是用培养细胞进行诊断。这种方法易于鉴别,准确性高,     

猪瘟病毒荧光RT-PCR快速检测方法的建立

以猪瘟病毒5′端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针,建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株,未能检测出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、PK-15细胞和牛睾丸原代细胞;对猪瘟病毒T株的扩增反应产物进行了测序分析,与预期序列相符。荧光RT-PCR的检测极限可达到1 TCID50/mL,整个试验流程只需2 h。采用荧光RT-PCR和抗原捕获ELISA同时检测临床病料、猪副产品共207份样本,两种方法的检出率分别为17.4%和13.5%,两者符合率为95.7%(198/207);荧光RT-PCR的检出率高于ELISA,两者差异显著。结果表明,建立的荧光RT-PCR可用于猪产品、临床病料中猪瘟病毒的快速检测。