云南省红河州猪衣原体性流产的病原分离鉴定

从母猪流产胎儿病料中分离到3株衣原体,将分离株鸡胚卵黄囊膜悬液接种7日龄鸡胚能致鸡胚规律性死亡;碘染色阴性;补体结合试验阳性;对鸡胚致死毒价为10-9ELD50/0.4 mL;该毒株能使小白鼠在3 d内全部死亡.结果表明,该分离株为鹦鹉热衣原体;采用该场分离毒株制备的灭活苗免疫注射,母猪流产率由免疫前的37.21%下降到4.42%,降低了32.79个百分点.     

奶牛衣原体性流产的病原分离和鉴定

1989、1990年我们对西安市部分奶牛场所进行血清学调查,结果布氏杆菌病、牛白血病、牛蓝舌病均为阴性,而衣原体补体结合试验阳性率高达28.31％,在这些牛场中常有流产、犊牛关节炎、犊牛肠炎等病例发生。采集流产病料,接种鸡胚卵黄囊培养,分离出2株衣原体(CCS_(10)株和CCS_(15)株),未分离出相关致病菌。分离株接种鸡胚卵黄囊能致鸡胚规律死亡,剖检死亡鸡胚可见明显病变,卵黄囊膜涂片镜检能观察到大量原生小体。代表株CCS_(15)     

红河州鸡衣原体病的研究——病原分离鉴定和人工感染试验

从采自发病或死亡小鸡的肝、脾、肺和腹水等病料中分离到４株衣原体。将分离物接种７日龄鸡胚卵黄囊，能致鸡胚规律性死亡；该分离株对磺胺嘧啶（ＳＤ）具有抵抗力，碘染色不着色，鉴定为鹦鹉热衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔａｃｉ）；毒力测定对鸡胚致死毒价为１０－１０ＥＬＤ５０／０．４ｍｌ。用该分离株对健康小雏做人工感染试验，可发生与自然病例相同的症状和病理变化。同时对分离毒株形态特征进行了电镜观察     

不明原因小鸡死亡和产蛋鸡输卵管囊肿病原诊断的研究

自发病或死亡小鸡采取心、肝、脾、肺等脏器;对呈现腹部膨大或呈现企鹅姿势的病鸡采取腹水、输卵管囊肿液和心、肝、脾等脏器。将采集的病料直接涂片,以姬姆萨染色镜检,观察到多量衣原体原生小体,接种鸡胚卵黄囊培养出衣原体。用分得的衣原体代表株,人工感染试验证明,受感染小鸡可发生与自然病例相似的临床症状。分离株经鉴定为鹦鹉衣原体。     

羊衣原体性流产的研究——免疫试验初报

为了预防羊衣原体性流产,McEwen、Stamp等曾用含有多量原生小体的胎衣或者将流产衣原体接种鸡胚卵黄囊制成的各种衣原体苗,接种羊只后可产生高滴度的补体结合抗体。在福尔马林灭能苗中加入矿物油佐剂,一次皮下注射所产生的免疫力能持续3年。 Mitscherlich(1965)、Schoop等(1968)和Nevjestic等(1970)报道了通过鸡胚致弱的活苗免疫成功的经验。据说这种活苗的免疫原性与福尔马林灭能苗相等。这种活苗的优点是注射羊只后在血液中不出现补体结合抗体,有利于在流行病学调查时区分健康羊和受感染的羊,为制定预防措施提供依据。     

猪流产衣原体灭活苗免疫效力试验

青海省海西州德令哈农场,于1980年家畜布氏杆菌病得到控制以来,在猪群中仍不断发生流产。该一中队生产母猪流产率高达56.1％,三中队流产场率为31.3％。为了查清其流产原因,于1986年对流产母猪群进行了衣原体病血清学调查。采集被检血清333份,经补体结合试验检验,阳性101份,阳性率为33.3％。所采病料,经鸡胚卵黄囊培养,分离到鹦鹉衣原体。人工接种怀孕母猪可引起流产。为控制本病流行,按《羊流产衣原体甲醛灭活油佐剂     

化学诱导的鹦鹉热衣原体羊亚种的温度敏感突变株

在控制羊衣原体性流产中,由于死疫苗无效,而在鸡胚卵黄囊和细胞培养中传代减毒制备活疫苗没有成功,因此作者试图分离温度敏感突变株(Ts株)以制备活疫苗。 用鹦鹉热衣原体AB_7株作为亲本株。该株是从流产羊羔分离的,然后在鸡胚传至第二代,它对小鼠也有致病力。用AB_7株感染McC_0y细胞单层,孵育24小时后移去培养液,加入含有10微克/毫升N—甲基-N’—硝基-N-亚硝基胍(N—methyl—N’-nitro—N-nitrasoguanidine, NTG)的PBS,35℃孵育0.5小时,     

鸭肿头出血症病毒强毒的致病性及感染组织细胞的超微病理变化

将鸭肿头出血症病毒(DSHDV)强毒株以不同途径接种10日龄鸭胚,研究了病毒在鸭胚中的繁殖规律,并用透射电镜观察了感染鸭胚各组织器官的超微结构变化,同时用DSHDV人工感染不同日龄雏鸭,比较了不同感染途径对雏鸭的致病性和对不同日龄雏鸭的致病性。结果显示,尿囊腔和卵黄囊2种途径均能使病毒在鸭胚上繁殖并传代,对鸭胚的半数致死量分别为10-7.24/0.2 mL和10-6.4/0.2 mL。病毒感染鸭胚后,电镜下可观察到肝和尿囊膜中的病毒粒子,病毒粒子呈球形或椭圆形,大小为60~80 nm,无囊膜;病毒在细胞浆内复制,可形成特征性包涵体;病毒侵害的主要靶器官为尿囊膜与肝,细胞器的变化主要表现为粗面内质网扩张以及线粒体肿胀和嵴断裂、消失。病毒经肌肉注射、口服和滴鼻均能使28日龄鸭感染发病,致死率分别为86%、89%和97%。研究表明,DSHDV能很好地在鸭胚上生长并致鸭胚各组织器官超微结构发生变化,不同感染途径均能使雏鸭感染发病且致病性强。     

鸡新城疫中等毒力毒株的分离鉴定

从山东省某种鸡场分离到 1株病毒 ,经血凝 (HA)和血凝抑制 (HI)试验证实为新城疫病毒。经用SPF鸡胚和SPF鸡测定 ,该毒株的鸡胚平均致死时间 (MDT)为 5 5 .2h ,1日龄鸡脑内致病指数 (ICPI)为 0 .8,6周龄鸡静脉接种致病指数 (IVPI)为 0 .3 1,属于中等毒力的毒株。该毒株点眼、滴鼻不引起 6周龄SPF雏鸡发病 ,将其做成灭活油佐剂疫苗 ,对鸡的保护率为 95 %。该新城疫毒株可用作疫苗毒株     

腺胃型鸡传染性支气管炎病毒Hu98株的分离鉴定

1998年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到IBV-Hu98毒株.将该病毒株接种SPF鸡胚并传至5代(F5),结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征,EID50为10-6.40/0.2 mL.IBV-Hu 98 F5感染SPF鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为80～120 nm、有囊膜和纤突的冠状病毒粒子.用IBV-Hu98 F5毒株人工感染1日龄SPF鸡能引起与自然病例相似的病理组织学变化,死亡率为80%(4/5),用IBV-Hu 98J1人工感染1日龄SPF鸡死亡率为100%(5/5),并可从死亡鸡中分离到冠状病毒.     

武汉地区群养鸡传染性法氏囊病的调查

对武汉地区5个养鸡场1990年3月至1990年9月份鸡传染性法氏囊病(IBD)发病情况进行调查,共调查7～60日龄易感鸡21800羽,发病10900羽,发病率为50％;死亡3300羽,发病死亡率为30.28 ％。各鸡场IBD的流行特点各有不同。通过病原分离,获得4株IBDV地方株,其中2株来自免疫IBD的鸡群,证明本省有IBDV强毒流行。用分离的IBDV1∶4囊毒液,接种10日龄鸡胚绒毛尿囊膜(0.2ml/胚),48小时可使48％～80％鸡胚死亡。     

鸡包涵体肝炎电子显微镜观察

包涵体肝炎(IBH)首先见于美国(1963),以后世界各地的一些学者曾先后报道过此病。Wells等曾从现地IBH病例中分离出禽腺病毒,在马来西亚Opitl(1978)曾报道一例IBH是根据病理组织学所 确诊的,未能建立起病原学诊断。K.Vasndxa Devi等(1983)报道过自然发生的IBH禽腺病毒的分离和鉴定,并证实该分离物对仔鸡的致病性。从患有以前未曾确定病原学的病鸡中分离出某些腺病毒,其中有些腺病毒的致病力已经通过鸡的人工感染而得到确认。 在建立鸡包涵体肝炎的研究中,进行了鸡包涵体肝炎病鸡中禽腺病毒的分离和鉴定。首先将病鸡的肝、脾乳剂上清分别经卵黄囊和尿囊腔接种于鸡胚,并将病鸡的肝脏和致死的鸡胚肝、尿囊液以及第4、5代感     

禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验

从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒,在电镜下观察到病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,外衣壳直径约75 nm,内核约50 nm;分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力,对乙醚不敏感;病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE;爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状,并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化;血清中和交叉试验表明,该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒(YH和YB)分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验,可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。     

猪流感病毒广东株的分离鉴定及其特性

对广东省 2 5个猪场有呼吸道症状的 30～ 6 0日龄仔猪 ,用棉拭子采样 ,接种鸡胚分离病毒。经鉴定 ,7株为H1N1亚型毒株。对其中 3株分离株的形态学、部分理化特性和生物学特性的研究结果表明 ,病毒粒子在透射电镜下为杆状、丝状、椭圆形及圆形 ,大小为 80～ 12 0nm ;血凝素(HA)均为热不稳定型 ;均不耐热且对乙醚、氯仿敏感 ;均能凝集公鸡、豚鼠、兔、大白鼠、山羊等动物红细胞 ,对小白鼠红细胞的凝集性有所不同 ,均不凝集牛和猪红细胞 ;经绒毛尿囊腔接种 9日龄鸡胚 ,不能导致鸡胚死亡 ,EID50 分别为 10 — 6 .17/ 0 .2mL、10 - 5.83/ 0 .2mL、10 - 4.4 3/ 0 .2mL ;经鼻腔途径感染小白鼠 ,均未导致小鼠出现症状和死亡 ,接种后第 14d在部分存活的小鼠血清中可检出病毒抗体。     

鸡传染性腔上囊病病毒三价活疫苗的安全性和免疫原性试验

用IBD Ⅰ型标准毒株(B87株)接种易感鸡胚,收获感染鸡胚,用IBD Ⅰ型亚型M-98株和Ⅰ型变异株MB株接种鸡胚成纤维细胞(CEF),收获感染的细胞培养液,制备抗原液,加适宜保护剂,经冷冻真空干燥制备三价活疫苗3批.3批疫苗对9日龄无IBD母源抗体的雏鸡以10倍使用剂量点眼、滴鼻和口服,安全性良好;对9日龄易感雏鸡以1/5使用剂量疫苗点眼、滴鼻和口服,20 d后用IBDV强毒攻击,3批疫苗对雏鸡的保护率分别为100%、90%和90%.     

鸡传染性腺胃炎病原的分离鉴定

河北省某个体户蛋用种鸡场连续孵化出的7批海赛商品雏鸡共6万余只,在30～80日龄时发生一种以极度消瘦、腺胃肿大为特征的疾病.采集发病鸡的腺胃进行病原分离鉴定,从中分离出传染性支气管炎病毒(IBV).将发病鸡的腺胃匀浆乳剂及第5代鸡胚分离物接种SPF鸡,结果用鸡腺胃匀浆乳剂接种的鸡出现了与自然病鸡相同的临床症状,而用第5代鸡胚分离物接种的鸡未能复制出腺胃肿大病例.取各接种组鸡血清进行17种相关病原抗体检测,结果接种病鸡腺胃匀浆乳剂的鸡检出了网状内皮组织增生病病毒(REV)抗体.初步试验结果表明,此次发生的以腺胃肿大为特征的疫病可能与REV感染有关,而所分离到的IBV本身并不能引起腺胃肿大.     

乌鸡新城疫病毒中发型毒株的分离与鉴定

从发病的 43日龄乌鸡群中分离到 1株病毒 ,经鸡胚传代培养后 ,测定其F3 代尿囊液血凝 (HA)效价为 2 8,HI试验中能被鸡ND阳性血清中和 ,鸡胚平均死亡时间 (MDT)为 60 .8h ,1日龄雏鸡脑内接种指数 (ICPI)为 0 .8,血凝解脱时间小于 10min ,血凝素热稳定性差。表明该分离株为新城疫病毒中发型毒株。     

12株肉仔鸡包涵体肝炎病毒的分离和PCR鉴定

从临床疑似肉仔鸡包涵体肝炎病例的肝组织中,通过SPF鸡胚连续传代和鸡胚肾细胞培养,分离到12株疑似肉仔鸡包涵体肝炎病毒毒株。通过形态学、致细胞病变和PCR检测等对12株疑似肉仔鸡包涵体肝炎病毒分离物进行了鉴定。结果显示,该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称,直径70～80nm;接种鸡胚后鸡胚肝在不同时期表现不同程度的病变;在鸡胚肾细胞(CEK)上可致细胞病变。根据Ⅰ群禽腺病毒CELO株的Hexon保守区基因序列,设计合成了1对引物。用这对引物对12株病毒的核酸模板进行了PCR扩增,结果均特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的508bp片段,序列分析表明,分离株确为Ⅰ群禽腺病毒。从病毒形态,鸡胚及细胞病变以及PCR检测结果,证明12株分离物确为肉仔鸡包涵体肝炎病毒。建立的鸡包涵体肝炎快速PCR诊断方法可用于鸡包涵体肝炎的临床快速诊断。     

鹦鹉副黏病毒的分离与鉴定

采集疑似自然感染新城疫病毒(NDV)的病死鹦鹉的肝、脾和胰腺,应用SPF鸡胚分离到1株病毒(YW-PMV),根据F基因片段测序结果,该病毒属于Ⅶh类,含有强毒株特征的蛋白酶识别序列RRRKRF,能凝集鸽红细胞,并能被新城疫阳性血清抑制,而不能被减蛋综合征(EDS)、禽流感H5、H7、H9血清抑制;电镜观察见到形态不规则、囊膜表面具有密集纤突的病毒粒子,直径100~200 nm。部分生物学特性表明,分离毒能致死鸡胚和番鸭胚,最小致死量和平均致死时间(MDT)分别为46.8 h和53 h;病毒接种鸡胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞均能引起细胞病变,并能被抗ND阳性血清中和;应用NDV荧光RT-PCR检测,该分离毒核酸为NDV阳性。上述结果初步表明该分离毒为鹦鹉副黏病毒强毒株。     

鸡毒霉形体弱毒疫苗的研究——鸡毒霉形体弱毒F株对鸡的致病性测定

用鸡毒霉形体F株新鲜培养物经点眼途径分别感染1、3和20日龄北京白鸡,以测定其对鸡的致病性。其中有部分鸡在感染F株的同时,感染前或感染后接种新城疫Ⅱ系苗或LaSota株疫苗以及鸡传染性支气管炎H_(120)株疫苗。试验结果表明:F株对各日龄鸡感染都不引起气囊病理损伤,不影响体增重;从感染鸡至少在感染后30日仍能分离到霉形体;接种新城疫疫苗和鸡传染性支气管炎疫苗不增强F株的致病作用。而感染鸡毒霉形体NB_(72)株的部分鸡出现气囊损伤。结果显示F株对鸡不致病。