大鼠急性早期心肌梗死细胞膜PNA受体表达

探测急性心肌缺血早期细胞膜PNA受体的表达特点。应用免疫组化法(S-P法)对32只SD大鼠急性心肌缺血早期不同时间心肌细胞膜凝集素受体的表达进行研究。结果发现:心肌缺血15min时,心肌局部可出现PNA染色阳性,且随着缺血时间的延长,其阳性表达面积明显增加;缺血2h;其表达水平达到高峰,呈弥漫性染色阳性,明显高于对照组;2h后,心肌缺血区域PNA受体的表达开始出现下降趋势。实验结果稳定,敏感性强,可为心肌缺血早期诊断提供客观的依据。     

大鼠心肌急性缺血再灌注NF-кB P65和caspase-3的表达

目的观察大鼠急性心肌缺血再灌注后NF-кBP65和caspase-3在心肌中表达的规律,为心肌急性缺血早期死亡的法医学鉴定提供科学证据。方法运用免疫组化和图像分析技术观察66只SD大鼠心肌缺血再灌注后NF-кBP65和caspase-3蛋白在不同实验组中的表达规律。结果心肌缺血组缺血区域心肌组织缺血5min就可见NF-кBP65和caspase-3蛋白表达,并随缺血时间延长表达逐渐增强;而非缺血区域心肌组织仅见低水平表达或不表达;但两种蛋白(两者)并非在缺血区域心肌同一部位表达,也不是在心肌细胞内的同一部位表达;caspase-3主要在心肌细胞浆表达,而кBP65既在心肌细胞浆表达,也在心肌细胞核中表达。心肌缺血再灌注组(在)心肌缺血5min~1h内,再灌注与否并不影响这两种蛋白的表达。正常对照组未见这两种蛋白表达。结论心肌缺血再灌注时,心肌组织中有NF-кBP65和caspase-3蛋白的表达,这两种蛋白在心肌中的表达可视作诊断早期心肌缺血的参考指标。     

实验性早期心肌缺血补体C5的免疫组织化学研究

建立大鼠急性心肌缺血模型。应用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对急性心肌缺血早期不同缺血时间心肌细胞内补体C5的变化进行研究。结果发现 :C5在心肌缺血 15min即可出现阳性反应 ,并随缺血时间的延长 ,其反应面积逐步增大。心肌细胞内C5阳性是早期心肌缺血的敏感指标 ,免疫组织化学染色法检测心肌细胞内C5的变化可望成为早期心肌缺血死后诊断的一种有意义的手段     

大鼠心肌缺血后SERCA和PLB基因表达变化的观察

目的观察大鼠心肌缺血后，肌浆网钙调节蛋白SERCA和PLB基因表达水平变化，探讨其在早期心肌缺血诊断上的应用价值。方法25只大鼠随机分为正常对照组、缺血5、10、15min及缺血性猝死组，建立大鼠急性心肌缺血模型；利用荧光标记逆转录聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测不同时间大鼠心肌缺血后，SERCA和PLB的基因表达变化，并与缺血性猝死组相比较。结果心肌缺血5min即可检测到SERCA和PLBmRNA表达相对下降，且随着缺血时间的延长，呈逐渐下降趋势，心肌缺血组与缺血性猝死组表达存在显著性差异。结论大鼠心肌缺血后SERCA和PLB基因表达变化呈一定规律性。对早期心肌缺血的诊断具有法医学意义。     

An immunohistochemical study of basic fibroblast growth factor in early acute myocardial ischemia

With the use of immunohistochemistry, the expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) in early acute myocardial ischemia of rats was studied. It was observed that there was an initial (30 min) rise in bFGF expression in limited ischemic myocardium areas and perimyocardial ischemia areas. The grade of expression of bFGF increased with the continuation of ischemia. The results of image analysis and statistical process suggested that the expression of bFGF reach a high level in ischemic myocardial areas after three hour's of ischemia, significantly higher than in control group and in group B1, but no significant difference in pericardial ischemia areas and normal areas of the same group. In summary, early acute myocardial ischemia is accompanied by rapid and prolonged increase in expression of bFGF with characteristic spatial and temporal kinetic. This finding suggests that the immunohistochemical staining of bFGF provide objective morphologic evidence for the diagnosis of early myocardial ischemia.     

早期心肌缺血心肌细胞凋亡的实验研究

探讨早期心肌缺血心肌细胞凋亡的意义。采用DNA缺口末端标记法 (TUNEL)对大鼠实验性心肌缺血早期 (6h内 )不同时间缺血损伤区心肌细胞凋亡的情况进行观察。结果 :缺血 1h在缺血区域发现少数散在的凋亡阳性细胞 ,3h达高峰 ,随后下降。正常区域未发现凋亡细胞。缺血边缘区域也在缺血 1h局部开始出现心肌细胞凋亡 ,并随缺血时间延长心肌细胞凋亡指数增加 ,缺血 5h达高峰。表明凋亡是早期缺血性心肌细胞损伤的主要方式 ,心肌凋亡检测可望为早期心肌梗死的死后诊断提供一个灵敏客观的新方法。     

大鼠急性心肌缺血后心肌NF-kB的检测及其法医学意义

目的检测大鼠急性心肌缺血后核因子-kB(NF-kB)在心肌组织内的变化,探讨其在心肌早期缺血死后诊断中的法医学意义。方法30只大鼠随机分为正常对照,缺血0.5h,1h,2h,4h,8h共6组,每组5只建立大鼠急性心肌缺血模型,用免疫组化染色技术(S-P法),观察不同时间缺血心肌中NF-kB阳性着色,并应用图像分析系统进行定量分析。结果大鼠心肌缺血30m in,心肌细胞核出现散在NF-kB阳性染色;缺血60m in,心肌阳性染色细胞核增多;4h达高峰;8h组开始下降;免疫组化染色定量检则的阳性单位:缺血2h、4h、8h分别为20.042±1.084、22.028±3.452和20.524±1.595;正常对照组未见核阳性反应。结论大鼠心肌缺血8h内,心肌细胞核NF-kB阳性染色呈现一定规律性变化,对早期急性心肌缺血的死后诊断具有法医学意义。     

急性心肌缺血早期血管内皮生长因子的免疫组织化学实验

对大鼠急性心肌缺血早期的不同时间、心脏不同部位的血管内皮生长因子（VEGF）的表达，运用免疫组织化学方法进行了研究。结果发现：缺血30min后在缺血心肌局部开始出现VEGF阳性表达，而缺血边缘区域和正常区域心肌在缺血1h后也开始出现VEGF阳性表达，并随着缺血时间的延长，VEGF的表达强度也越来越强。对照组未发现有阳性表达结果.表明运用免疫组化方法检测心肌缺血后心肌局部VEGF的表达，可望作为因心肌缺血导致心脏性猝死案例的诊断标准之一。     

心肌肌钙蛋白T在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性

目的 探寻心肌肌钙蛋白T（cTnT）在家免缺血心肌中的表达规律及其死后稳定性．并对其在法医学实践中诊断早期心肌缺血的应用价值进行评价。方法用冠状动脉结扎法建立家兔急性心肌缺血模型．应用免疫组织化学法、图像分析和统计学处理系统,检测死后cTnT表达情况,并对实验组和对照组cTnT的表达进行比较。结果缺血区心肌组织可见明显不规则灶状、片状cTnT缺失区,间质呈阴性表达。在4℃放置．随放置时间延长,正常和缺血心肌组织cTnT阳性表达均有减弱趋势,至14d时均完全缺失。但仅在4℃放置1～7d内,缺血心肌和正常心肌标本之间cTnT阳性反应具有显著性差异。结论cTnT的免疫组化表达用于认定死后4℃放置的尸体是否有死前心肌缺血时．宜在7d以内进行。     

急性心肌缺血早期碱性成纤维细胞生长因子的免疫组化研究

采用免疫组织化学方法，对大鼠急性心肌缺血早期不同时间心脏不同区域碱性成纤维细胞生长因子basicFibroblastGrowthFactor：bFGF）的变化进行了研究。结果发现心肌缺血30min心肌局部即可出现bFGF阳性表达，并且随着缺血时间的延长其阳性表达的强度也有所增加。图像分析处理结果表明，缺血3h其表达水平达到高峰（55.26±14．75），明显高于对照组（7．27±2．49），而与缺血边缘区域（53．08±14．26）和正常区域(53．79±15．71）相当。3h后，心肌缺血区域bFGF的表达开始出现下降趋势，而缺血边缘区域和正常区域则开始呈现上升趋势。可为心肌缺血的早期诊断提供客观的形态学依据。     

早期心肌缺血猝死心肌Ⅰ型胶原的表达

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白在心肌早期缺血死后诊断中的法医学价值。方法将收集的案例心肌蜡块分为3组：正常对照组、早期心肌缺血组、心肌梗死组,用免疫组织化学技术（S-P法）,观察猝死心肌内Ⅰ型胶原的表达情况,对其结果进行半定量分析。结果早期心肌缺血组和心肌梗死组心肌细胞质以及细胞核染色阳性,且早期心肌缺血组与心肌梗死组表达强度相近,说明早期心肌缺血组在胶原网结构方面已经发生与心肌梗死相同的改变。结论Ⅰ型胶原可以作为早期心肌缺血的一个诊断指标。     

Heart fatty acid binding protein as a marker for postmortem detection of early myocardial damage

Depletion of heart fatty acid binding protein (H-FABP) from cardiomyocytes with varying post-ischemia intervals was studied in acute myocardial infarction (AMI) model of rat, and 22 human autopsy cases were studied with streptavidin-peroxidase conjugated method (S-P). It was observed that as early as 15 min after ischemia, the depletion of H-FABP could be detected in model rats. With the ischemic time prolonged, the depletion of H-FABP was more and more evident. In all human cases with myocardial infarction, absent H-FABP staining could be found in infarcted area. And in some suspected early myocardial infarction cases, depletion of H-FABP staining could be demonstrated in areas that showed normal hematoxylin-eosin (HE) staining. The blood samples from model rats before ligation, at varying post-ischemia intervals and various postmortem time were measured for plasma concentration of H-FABP with enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA) method. At 15 min after myocardial ischemia, the concentration of H-FABP was 4 times higher (546.0+/-85.3 microg/l) than that of the baseline level (103.7+/-94.1 microg/l). With the continuation of ischemic time, the concentration of H-FABP increased and peaked at 4 h (1953.5+/-405.3 microg/l), then decreased. The plasma concentration of H-FABP decreased slightly with postmortem time, but was still significant higher at any postmortem intervals than that of baseline level within 48 h after death. The results suggest that H-FABP staining can detect very early ischemic damages in human myocardium and the elevated plasma concentration of H-FABP in rat was an indicator of AMI, which was not affected by autolysis.     

实验性早期心肌缺血结蛋白的免疫组织化学研究

目的　探讨急性心肌缺血早期不同缺血时间心肌细胞内结蛋白的变化 ,为早期心肌梗死死后诊断提供新的方法。方法　建立大鼠急性心肌缺血模型 ,用免疫组织化学S -P法研究心肌细胞内结蛋白的缺失情况。结果　正常心肌细胞结蛋白呈棕褐色阳性反应 ,急性心肌缺血 15min ,结蛋白即可在缺血区心肌呈小灶性缺染 ,随缺血时间延长 ,其缺染范围逐步扩大。结论　心肌细胞结蛋白的缺失是早期心肌缺血的极为敏感的指标 ,免疫组织化学染色法检测心肌细胞结蛋白的变化可望成为早期心肌缺血死后诊断的一种有意义的手段。     

Sudden cardiac death and myocardial ischemia indicators: a comparative study of four immunohistochemical markers

The postmortem diagnosis of acute myocardial infarction represents a current challenge for forensic pathologists, particularly when death occurs within minutes to a few hours after the ischemic insult. Among the adult population the single most important cause of sudden cardiac death (SCD) is the well-known atherosclerotic coronary artery disease, commonly asymptomatic or unrecognized. The recognition of early myocardial damage using routine hematoxylin and eosin (H&E) staining is possible only if death has occurred at least 6 hours after the onset of the ischemic injury. The usefulness of immunohistochemical markers to the diagnosis of early myocardial damage has been recently suggested because most of them can be visible even serologically as early as few minutes after the beginning of the symptoms. To evaluate the usefulness of plasma and cellular antigens, their distribution patterns have been studied among a group of 18 SCD cases in which a myocardial ischemia was strongly suspected. For the present study, 4 markers have been selected on the basis of their different diagnostic potential as follows: among the plasma markers the C5b-9 and fibronectin, among the cellular markers the myoglobin and cardiac troponin. The results show that only the study of multiple markers such as those selected can provide enough evidence of myocardial ischemia and/or necrosis, supporting the final diagnosis of SCD. No single immunohistochemical staining is ideal for diagnosing early myocardial ischemia but a set of markers can improve the ability of forensic pathologists to detect ischemic areas when no macroscopic or microscopic evidence of necrosis is available. However, the interpretation of data obtained in each individual cannot be isolated from the overall assessment of the factors (cardiopulmonary resuscitation and/or agonal artifacts) that can affect the expression of each marker.     

急性心肌缺血再灌注HSP70及c-Fos的免疫组织化学研究

运用免疫组织化学方法 ,观察心肌缺血后不同时间再灌注HSP70及Fos蛋白在心肌组织不同区域表达的规律 ,为心肌缺血 /再灌注损伤所致心性猝死的法医学诊断提供形态学依据。结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血 /再灌注模型 ,取缺血区域 (左冠脉前降支供血区 )及非缺血区 (右心室 )心肌组织。结果显示 :对照组正常心肌组织无Fos蛋白及HSP70表达。Fos蛋白在心肌缺血 15min再灌注 0 5h后即在缺血区域表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域 1h始有表达 ,缺血区域表达明显强于非缺血区域。HSP70在心肌缺血区域再灌注 1h后始有表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域心肌 2h始有表达 ,且明显弱于缺血区域。同时发现再灌注早期HSP70及Fos均先于心肌内层表达 ,随着时间延长其表达向心肌外层扩展。Fos在再灌注 0 5h时主要在心肌内层表达 ,1h时已扩展到心肌全层 ,4h时其心肌外层表达明显强于心肌内层。HSP70在再灌注 1、 2h时主要在心肌内层表达 ,4、 6h时表达扩展至全层心肌。心肌缺血 /再灌注早期不同时间HSP70及Fos表达有不同的区域性及强度 ,此可为心肌缺血 /再灌注的早期诊断提供一项新的辅助诊断依据     

Primary study of vascular endothelial growth factor immunohistochemical staining in the diagnosis of early acute myocardial ischemia

The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the model of rat early acute myocardial ischemia was studied by Strept-Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (SABC) immunohistochemical staining. After ligating the anterior descending branch of the left coronary artery, an initial rapid (30min) positive expression of VEGF in myocardial ischemic areas was observed, the intensity of positive expression of VEGF increased with the continuation of myocardial ischemia. After 5h infarction, the strongly positive myocytes of SABC-VEGF staining were predominantly limited to perimyocardial infarction areas. No positive expression of VEGF was found in the control group. These findings suggested that SABC-VEGF method could give a sensitive, specific, simple and objective morphologic evidence to the diagnosis of sudden cardiac death caused by acute early myocardial ischemia.     

早期心肌缺血猝死心肌NF-κB p65的表达研究

目的探讨核因子NF-κBp65（NF-κB p65）在心肌早期缺血猝死后诊断中的法医学价值。方法将收集的案例心肌蜡块分为3组：正常对照组（3例）、早期心肌缺血组（14例）、心肌梗死组（8例）,采用免疫组织化学技术（SP法）,观察猝死心肌内NF-κBp65的表达情况,并对其结果进行半定量分析。结果早期心肌缺血组和心肌梗死组的心肌细胞胞浆内及细胞核内均出现NF-κBp65的表达,且早期心肌缺血组与心肌梗死组表达强度无差异。结论NF-κBp65可以作为早期心肌缺血猝死的一个辅助诊断指标。     

VEGF在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性研究

目的观察心肌中VEGF在死后一定时间的稳定性及表达的变化规律，评价其对死后诊断机体早期心肌缺血的作用。方法用冠状动脉结扎法建立家兔急性心肌缺血模型，应用SP法染色、图像分析和统计学处理系统，检测缺血心肌细胞内VEGF阳性表达面积和强度，并对VEGF在死后不同时间的稳定性进行比较。结果VEGF在缺血心肌组织中，见灶性或成片心肌细胞强阳性表达，部分细胞呈阴性或弱阳性表达，血管内皮及平滑肌细胞表达弱阳性，间质表达阴性；在4℃放置，随时间延长，缺血心肌组织VEGF阳性表达有减弱趋势，至10d时缺血心肌组织仍可见VEGF在少许心肌细胞胞浆内呈弱阳性表达。在4℃放置10d以内，缺血心肌和正常心肌标本之间VEGF阳性表达具有极显著性差异。结论VEGF能耐受一定程度自溶及腐败的影响，其免疫组化检测对于判断死后4℃放置10d以内的尸体是否出现过心肌缺血具有一定意义。     

大鼠早期心肌缺血纤维蛋白原与肌红蛋白的免疫组织化学对比性研究

按Selye法结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支，复制早期心肌缺血（EMI）模型。根据心肌缺血不同时间（15min、30min、1h、2h、3h）分5个实验组，另设1个对照组；每组取心尖部及其邻近的心肌组织制成石蜡切片，进行HE、链霉系合素生物素过氧化物酶（SAB）染色。结果表明：早期心肌缺血30min组，缺血区心肌即出现肌红蛋白（Mb）缺失和纤维蛋白原（Fg）染色增强。随着缺血时间延长，Mb缺失或Fg染色增强范围扩大，程度加重，从心内膜下向外层心肌发展呈“波浪式推进现象”，二者在心肌缺血过程中的变化规律相同，灵敏度相似，但Fg易受血液污染而致其可靠性较Mb差。在注意血液污染的前提下，SABC－Fg技术为诊断EMI提供了新的途径。