雌激素对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

采用免疫组织化学超敏SP法检测摘除卵巢及用外源性17β-雌二醇治疗后SD大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果显示,摘除双侧卵巢后,SD大鼠小脑皮质及深层核团中Bcl-2的表达有不同程度的降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的比例基本恢复正常。表明,雌激素能够下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,对小脑神经元具有保护作用。     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢的影响

为了研究镉对大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢的影响,以原代大鼠大脑皮质神经细胞为模型,用不同浓度的醋酸镉(0、5、10、20μmol/L)处理原代大鼠大脑皮质神经细胞24h后,流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平,试剂盒测定线粒体中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性和丙二醛(MDA)含量,Western-blot法检测SDHA蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,10或20μmol/L醋酸镉组中ROS水平、MDA含量极显著升高(P0.01),SOD、CAT、GSH-Px、SDH活性极显著下降(P0.01),SDHA蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01)。结果表明,镉能引起大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢障碍,并且与镉的浓度呈明显的剂量-效应关系。     

NAC在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中的保护效应

为研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中的保护作用,本试验用10mol/L醋酸镉和100 mol/L NAC单独或联合处理PC12细胞24 h后,用MTT法检测细胞存活率;用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测细胞色素C(cytochrome c,Cyt C)的释放以及Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达量。结果,NAC能显著或极显著抑制镉引起的细胞存活率下降,凋亡率上升,Cyt C从线粒体释放进入胞浆中,Bcl-2/Bax比值下降,Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达量提高(P0.05或P0.01)。上述结果说明,NAC在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中具有保护作用。     

α-硫辛酸对亚慢性镉暴露致大鼠大脑皮质超微结构损伤的保护效应

为探讨α-硫辛酸(α-LA)在亚慢性镉暴露引起大鼠大脑皮质超微结构损伤中的保护作用,24只21日龄雌性SD大鼠被随机分为4组,分别为对照组、α-LA组、镉组和镉与α-LA共处理组,镉组采用50 mg/L醋酸镉溶液以自由饮水方式进行染毒,共处理组在镉暴露的基础上同时用α-LA溶液按50 mg/(kg·d)进行灌胃。12周后用原子吸收分光光度法测定大鼠大脑皮质中镉的质量分数,透射电镜观察大脑皮质组织超微结构的变化,Western-blot检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果表明,α-LA能够显著降低镉引起的大鼠大脑皮质镉质量分数的升高(P0.05),缓解镉引起的超微结构损伤,抑制镉导致的Bcl-2/Bax比值下降和Cleaved caspase-9,-3表达量的升高(P0.05或P0.01)。这说明α-LA对亚慢性镉暴露致大鼠大脑皮质超微结构的损伤具有保护作用。     

钼致小鼠睾丸组织氧化损伤及对PI3K/AKT信号通路的影响

为探索钼致雄性小鼠的睾丸组织的氧化损伤及其对PI3K/AKT信号通路的影响,本试验选取4周龄清洁级雄性健康昆明系小鼠60只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,分别在饮水中添加0、100、200、400 mg/L的钼,基础日粮相同,自由饮水,试验周期90 d。试验结束后剖杀并采集睾丸。比色法检测睾丸组织SOD、T-AOC、MDA、LDH活性或含量;RT-PCR和Western-blotting测定PI3K/AKT信号通路上PI3K、PTEN、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax和Bad的m RNA和蛋白的表达情况。结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组SOD和T-AOC活性极显著下降(P0.01),Ⅱ组LDH活性显著下降(P0.05),Ⅲ、Ⅳ组LDH活性极显著上升(P0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组MDA含量极显著升高(P0.01)。与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、Bcl-2、Bad和Bax的m RNA表达量显著升高(P0.05),Ⅱ组PTEN、Caspase-9的m RNA表达量显著下降(P0.05),Ⅲ组Caspase-9的m RNA表达量显著升高(P0.05);Ⅳ组PI3K、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bad和Bax的m RNA表达量显著下降(P0.05),PTEN的m RNA表达量显著升高(P0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、P-AKT、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),Ⅱ组PTEN蛋白表达量显著下降(P0.05);Ⅳ组PI3K、PTEN、AKT和Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),Bcl-2和Bad蛋白表达量显著下降(P0.05)。本试验所设剂量钼均能导致小鼠睾丸组织氧化损伤,同时通过激活PI3K/AKT信号通路上相关信号因子m RNA和蛋白表达对雄性小鼠生殖系统产生影响。     

卵泡期和黄体期牦牛输卵管中Bcl-2和Bax的表达变化

为了研究发情周期不同阶段牦牛输卵管中Bcl-2和Bax的表达变化,采用免疫组织化学SP法和实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR)技术分别对黄体期和卵泡期牦牛输卵管中Bcl-2和Bax蛋白及其m RNA的表达特征进行了研究。结果显示,发情周期不同阶段Bcl-2和Bax蛋白免疫阳性产物主要表达于牦牛输卵管黏膜上皮细胞质中,且主要分布于上皮细胞游离面和基底面。黄体期Bax蛋白阳性产物表达量显著高于卵泡期,而Bcl-2表达量略低于卵泡期,但无显著差异。卵泡期和黄体期牦牛输卵管管壁中有Bcl-2和Bax m RNA表达,不同时期Bcl-2 m RNA变化无显著差异;黄体期Bax m RNA表达显著高于卵泡期。表明,Bcl-2和Bax参与了牦牛输卵管黏膜上皮细胞周期性增殖与凋亡的调控,而且这一凋亡通路中主要通过Bax的变化来实现。     

依达拉奉在庆大霉素诱导MDCK细胞凋亡中的保护作用

为研究依达拉奉(edaravone,EDa)在庆大霉素(gentamicin,GM)诱导MDCK细胞凋亡中的保护作用,本研究用4 mmol/L GM和40?mol/L EDa单独或联合处理MDCK细胞24 h,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;Hochest 33258染色观察细胞核形态变化;比色法检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量;荧光染色检测活性氧(ROS)含量;Western-blot检测Bax与Bcl-2表达量,caspase-9、caspase-3和PARP蛋白活化情况,细胞色素C(Cyt C)和凋亡诱导因子(AIF)释放情况。结果显示,与对照组相比,EDa组无显著性影响。与GM组相比,GM+EDa组细胞凋亡率显著或极显著性下降(P0.05或P0.01);T-SOD和GSH-PX活力显著性下降(P0.05);CAT活力极显著性上升(P0.01);MDA含量极显著性下降(P0.01);ROS含量显著性下降(P0.05);Bcl-2/Bax比值显著性升高(P0.05);caspase-9、caspase-3和PARP蛋白的活化水平显著或极显著性降低(P0.05或P0.01);Cyt C与AIF含量显著性降低(P0.05)。结果表明,依达拉奉在庆大霉素通过线粒体凋亡途径诱导MDCK细胞凋亡中起保护作用。     

线粒体钙超载在镉致PC12细胞凋亡中的作用

为探讨线粒体钙超载在镉(Cd)致PC12细胞凋亡中的作用,用不同浓度Cd(0、2.5、5、10μmol/L)培养液分别处理PC12细胞12 h,或用5μmol/L Cd和15μmol/L钌红(MCU抑制剂,RR)共处理PC12细胞12 h。通过流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体钙离子水平变化,Western-blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,PC12细胞凋亡率和线粒体钙水平随着染Cd浓度增加显著或极显著增强(P0.05或P0.01);RR能显著抑制Cd暴露引起的PC12细胞Caspase-3蛋白活化并促进Bcl-2/Bax蛋白比值升高(P0.05),显著抑制Cd暴露引起的PC12细胞凋亡率上升(P0.05),说明线粒体钙超载参与到镉暴露引起的PC12细胞凋亡过程中并具有一定的调控作用。     

褪黑激素对犬脂肪干细胞向雪旺细胞分化过程中凋亡发生的抑制作用研究

为了探讨褪黑激素(Mel)对犬脂肪干细胞(ADSCs)向雪旺细胞(SCs)诱导分化过程中凋亡发生的影响。本实验将犬ADSCs诱导分化为SCs,并使用免疫荧光法进行鉴定。采用CCK8法选取Mel的最佳浓度。应用q RT-PCR法和Western-blot法检测无Mel组和Mel处理组中ADSCs向SCs诱导过程中细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2和Bax的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,50 nmol/L Mel处理过的细胞活力最高;ADSCs向SCs诱导后S-100和GFAP呈阳性表达,并且观察到Mel的添加并不会影响到SCs的表型特征。ADSCs向SCs诱导后Bcl-2表达量明显低于对照组,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著高于对照组,细胞凋亡较多;在加入Mel后Bcl-2表达量显著升高,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著下降。结果说明Mel可以显著抑制犬ADSCs向SCs诱导分化过程中的凋亡发生。     

ZEA和DON及其联合作用对小鼠T淋巴细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响

为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用免疫毒性的机理,试验研究了ZEA、DON及联合作用对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠离体T淋巴细胞细胞凋亡和Fas/FasL凋亡信号通路的影响。从BALB/c小鼠脾分离原代T淋巴细胞,分别设细胞空白组、刀豆蛋白A对照组(Con A组)、Con A+不同浓度ZEA染毒组、Con A+不同浓度DON染毒组、Con A+不同浓度ZEA与DON联合染毒组,染毒时间为24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测Fas、FasL、Cleaved-caspase8、Bax、Bcl-2等关键蛋白表达情况。结果显示,与细胞空白组相比,Con A组细胞凋亡率上升但差异不显著(P0.05);与Con A组相比,各染毒组细胞凋亡率均上升,多组出现显著或极显著差异(P0.05或P0.01);联合处理组较单一毒素处理组细胞凋亡率升高,经CompuSyn软件拟合,ZEA和DON以20∶1联合作用时协同效应最为明显。Con A组与细胞空白组相比,Bax/Bal-2值显著降低(P0.05)、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量无明显变化(P0.05);与Con A对照组相比,各染毒组Bax/Bal-2、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量均上升,且呈剂量依赖性,多组出现显著或极显著差异(P0.05或P0.01);联合染毒组较单一染毒组各蛋白表达量均升高。结果表明, ZEA、DON均可通过Fas/FasL凋亡信号通路诱导T细胞的凋亡,ZEA与DON联合可发挥协同效应。     

孕酮对大鼠小肠黏膜结构及其相关细胞的影响

为了研究孕酮对小肠黏膜屏障结构的影响,将24只Wistar健康雌性大鼠进行同期发情处理后,于发情间情期随机分为4组。对照组:只做假手术;OVX组:双侧卵巢摘除;OVX P1组:双侧卵巢摘除 孕酮2 mg/kg;OVX P2组:双侧卵巢摘除 孕酮10 mg/kg,连续用药7 d后宰杀,观察小肠黏膜上皮细胞、上皮内淋巴细胞、杯状细胞形态结构和数量的变化。结果表明,和对照组相比,OVX组大鼠的小肠黏膜结构有明显损伤,绒毛萎缩,绒毛高度和隐窝深度的比值(V/C)明显降低,上皮内淋巴细胞数量和杯状细胞的数量减少;补充2种剂量的孕酮后,各项指标比OVX组有不同程度的改善,其中OVX P1组与OVX组差异显著,且好于OVX P2组。证实,卵巢摘除对大鼠小肠黏膜屏障结构有严重影响,补充适量孕酮可以在一定程度上减轻对黏膜屏障结构的影响。     

摄入不同能量的围产期乳牛肝低密度脂蛋白受体 mRNA丰度的比较

将30头健康、经产、处于围产期的黑白花乳牛随机分为3组,每组10头。从产前28 d开始,低能量组乳牛饲喂《中国奶牛饲养标准(2000)》减少20%日粮(能量摄入80%),对照组乳牛饲喂《标准》日粮(能量摄入100%),高能量组乳牛饲喂《标准》增加20%日粮(能量摄入120%),产后各组乳牛均饲喂标准日粮,至产后第56 d结束试验;采用内对照RT-PCR方法检测摄入不同能量的围产期乳牛肝活体组织低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA丰度。结果,不同能量组乳牛肝LDLR mRNA丰度产前至产后均呈现先升高后降低的趋势,100%和120%能量组肝LDLRmRNA丰度在产后14 d达最大值,且产后均高于产前(产后56 d除外,P<0.01或P<0.05);而80%能量组产后1 d即达到最大值,产前14 d至产后14 d,LDLR mRNA相对表达量显著高于100%和120%能量组;产后28~56 d,120%能量组显著高于80%和100%能量组(P<0.01)。表明围产期乳牛能量摄入水平对肝LDLR mRNA丰度有显著影响。     

磷对体外大鼠成骨细胞增殖分化及钙化功能的影响

在体外培养大鼠成骨细胞的过程中添加磷(0、1、2、4 mmol/L),检测不同时间内的细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白表达及钙化功能,探讨了磷对成骨细胞增殖分化及钙化的影响。结果表明,磷能促进成骨细胞增殖,随着磷浓度的增加,增殖作用减弱,只在添加磷后第6、7 d极显著高于对照组;磷能显著或极显著地抑制碱性磷酸酶活性,即作用第5 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组;作用第8 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组,2 mmol/L磷组极显著低于4 mmol/L磷组;磷能诱导骨桥蛋白的表达(P<0.01),12、mmol/L高于4 mmol/L磷组;磷能诱导钙化,钙化结节个数极显著高于对照组,钙化结节平均面积只有1 mmol/L磷组显著高于对照组,随着磷浓度的变大,钙化结节平均面积逐渐减小而钙化结节个数则逐渐增多。表明添加不同浓度的磷均能抑制成骨细胞的早期分化,促进其增殖,诱导细胞基质成熟及钙化,利于新骨的形成,但4 mmol/L磷组效果较差。     

IBDV感染鸡免疫器官淋巴细胞中细胞凋亡调控蛋白的动态表达

用鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)SNJ93株、BC6/85株、B87株感染SPF鸡后观察免疫器官淋巴细胞中Bcl 2和Bax蛋白的分布定位和动态变化。结果,B87株接种组的腔上囊、脾、胸腺淋巴细胞中这两种蛋白在各检测时间均为阴性反应;SNJ93与BC6/85攻毒组胸腺淋巴细胞中这两种蛋白呈现阴性反应,SNJ93攻毒组腔上囊和脾淋巴细胞在48h即开始出现Bcl 2和Bax阳性反应,腔上囊淋巴细胞内这两种蛋白在感染后72、96、120h呈现明显的强阳性反应,以后开始降低,脾淋巴细胞中这两种蛋白在感染后72、96h出现强阳性反应;BC6/85攻毒组腔上囊淋巴细胞中只在96、120h出现阳性反应,脾淋巴细胞中只在96h呈现阳性反应。用免疫组化法检测Bax和Bcl 2,有可能为IBDV毒力划分增添新的依据。     

缺磷日粮对笼养蛋鸡生产性能及内分泌的影响

将 12 0只 19周龄依莎蛋鸡随机分成A、B、C组 ,分别饲喂总磷含量为 5 .8、4 .4和 3.0g/kg的日粮 (相应的有效磷含量分别是 4 .0、2 .5和 1.0 g/kg) ,进行缺磷日粮对蛋鸡生产性能及内分泌的影响试验。结果表明 ,B组与A组间生产性能无显著差异 ;与A、B组相比 ,C组产蛋率、体重、蛋壳品质及骨密度 (BMD)均显著下降 (P <0 .0 1) ;各组间血钙、血磷含量无显著差异 ;C组碱性磷酸酶 (AKP)活性和血液骨钙素 (BGP)含量均比对照组显著提高 (P <0 .0 1) ;从试验开始到产蛋高峰期 (33周龄 ) ,A、B和C组雌二醇 (E2 )水平随年龄增长而上升 ,但随后E2 水平则呈下降趋势。试验结果表明 ,日粮总磷含量为 4 .4 g/kg时有助于提高和改善蛋鸡生产性能 ,若日粮总磷含量低于 4 .4 g/kg ,则会降低产蛋率、蛋重、蛋壳品质及骨量。     

钼对小鼠脂质过氧化损伤及肝Smac和Bax表达的影响

通过向饮水中添加不同剂量钼(以钼离子计,0、100、200、400mg/L)建立实验动物模型:分别为对照组、钼100组、钼200组和钼400组。在试验处理的第120天,采集血液及肝组织,用透射电镜(TEM)观察肝细胞超微结构损伤,用免疫组化技术测定Smac和Bax蛋白表达量。结果:在饮水中添加200mg/L和400mg/L钼显著降低了血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,提高了丙二醛(MDA)含量;高浓度的钼可导致小鼠肝组织细胞数量明显减少,细胞形态结构模糊,细胞核萎缩,内质网扩张,线粒体肿胀、嵴断裂,出现大量空泡化病理变化;添加200mg/L和400mg/L钼显著提高了肝中Smac和Bax蛋白的表达量。结果表明,钼暴露可增加机体脂质过氧化反应的程度,对肝组织的形态学和细胞超微结构产生病理学损伤,促进小鼠肝中Smac和Bax蛋白的高表达。     

硝普钠对犬瘟热模型犬支气管平滑肌细胞电压门控性钾通道的影响

应用细胞膜片钳技术,分别测定正常对照组、犬瘟热(CD)模型组、CD 硝普钠(SNP)组犬支气管平滑肌细胞(BSMC)电压门控性钾通道(Kv)动力学指标、静息膜电位(Em)、静息膜电容(Cm)和电流密度。结果显示,CD组BSMC膜Kv活性显著降低,与对照组差异极显著(P<0.01)。经0.01 mmol/L SNP作用后, Kv通道开放时间显著延长,通道关闭时间缩短,通道开放频率明显增加,电流密度增大,静息膜电位(绝对值)升高,静息膜电容降低。表明,NO 能拮抗CD 模型犬BSMC膜Kv通道活性的抑制,恢复降低的钾电流,使细胞膜复极化,降低CD模型犬BSMC的兴奋性,对支气管平滑肌有松弛作用。     

肉鸡脂肪肝综合征血液流变学和生化指标变化的研究

用高脂肪日粮饲喂45日龄三黄肉鸡,建立脂肪肝综合征(fatty liver syndrome,FLS)病理模型,系统观察了FLS鸡血液流变学和生化指标的变化规律。与正常对照鸡比较,FLS鸡全血黏度、血浆黏度、全血高切还原黏度、全血低切还原黏度、全血高切相对指数、全血低切相对指数显著升高(P<0.01),ESR血沉、血沉方程k值降低(P<0.01);血清甘油三酯含量、总胆固醇含量、低密度脂蛋白胆固醇含量、丙氨酸氨基转移酶活性、天门冬氨酸氨基转移酶活性以及肝脂肪含量和肝指数明显升高(P<0.01)。     

胸膜肺炎放线杆菌感染对猪肺及肺门淋巴结抗氧化功能的影响

将24头健康DLY(杜洛克×长白×约克夏)仔猪按性别、体重随机分为2组,采用鼻腔喷雾法分别接种生理盐水(对照组)和含3.8×107 CFU/mL胸膜肺炎放线杆菌的稀释液(试验组),研究了猪感染胸膜肺炎放线杆菌48h后血清及肺组织抗氧化功能的变化。结果显示,试验组血清中SOD、CAT的含量极显著低于对照组(P<0.01);GSH-Px、MDA含量极显著高于对照组(P<0.01);-OH含量显著高于对照组(0.010.05)。试验组肺组织除CAT含量显著高于对照组(0.01相似文献