应用细胞传代毒制备水貂阿留申病CIE冻干抗原的研究

水貂阿留申病(Aleutian Disease)是由阿留申病毒引起的慢性进行性传染病。其特点是:潜伏期长,呈慢性经过,可垂直感染,严重侵害肾脏和肝脏,血液中浆细胞增多,丙种球蛋白异常增高,故又称浆细胞增多症。本病广泛流行于欧、美、亚洲等养貂发达的国家,我国养貂地区普遍发生,感染率较高。黑龙江省某貂场(1973)检查1234只貂,碘反应阳性率为22.8％。北京某貂场(1979)患阿留申病的貂占49.65％。严重影响着养貂业的发展。 阿留申病无中和抗体,为自家免疫病、免疫问题至今未获成功。因此,各国普遍采用定     

宁夏水貂阿留申病流行病学调查

水貂阿留申病血检结果表明,宁夏水貂存在本病,感染率为41.73％。本病感染率与水貂性别和年龄有关;亲代感染情况对子代有影响。本病死亡高峰期在夏、秋季节,能使母貂配种率和仔貂成活率降低。     

水貂阿留申病的诊断和观察

1981年10月25日至11月30日三河县某貂场陆续死貂15只,经检查确诊为水貂阿留申病,后经血检发现,貂场剩余的水貂中阿留申病感染率高达68％,诊断结果报告如下: (一)增床症状 大体可分为急性和慢性二种:急性的表现为突然拒食,体温下降,可视粘膜苍白,卷缩卧地不动,对外界的刺激反应冷漠,濒死期出现轻瘫,还发现有的水貂死前双目失明,大多于12～36小时内死亡,至死有渴欲。慢性的表现为食欲长期时好时坏,瘦弱,被毛粗乱无光,换毛延缓,可视粘膜苍白,鼻镜、爪垫无血色,有的口腔内上颚有大片的溃疡,溃疡表面复盖着灰绿色固膜,还有的貂留有溃疡愈后的黑色斑痕,患貂喜饮水,排出沥青样粪便,有的貂还便出红黑色血滴,落地成圆片状,分外显眼。后期有的患貂双目失明,共济失调,最后在抽搐中死亡。     

用对流免疫电泳检测水貂阿留申病

水貂阿留申病(Aleutian disease)是水貂的一种慢性病毒性传染病。研究表明,对该病的被动和主动免疫均不能产生良好抗感染效果,反而使其病理过程加重。为此集中研究了各种特异性诊断方法,以淘汰阳性病貂,使貂群逐步达到净化。其中用对流免疫电泳(CIEP)诊断阿留申病已在加拿大、美国、丹麦、日本和苏联普及,并取得了控制和扑灭该病的良好效果。我们从1983～1985年在国内首次应用CIEP检测水貂阿留申病。 (一)材料与方法 1.被检血清:系由辽宁省金州外贸水貂饲养场和吉林省大安外贸水貂饲养场采得。从1983～1985年,在每年的11～12月份水貂取皮期进行趾尖或心脏采血,以3000rpm离心30分     

水貂阿留申病毒抗体胶体金检测方法的开发和应用

为开发一种全新的检测水貂阿留申病毒抗体的检测方法,采用胶体金标记法对水貂阿留申病毒AMDV-G株进行全病毒标记,随后将金标记物固化在固相载体中,同时按顺序将水貂阿留申病毒全病毒以及水貂抗阿留申病毒抗体喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)上,将金标记物固相载体以及包被有抗体及病毒的NC膜连同其他组件组装成试纸条,进行水貂阿留申病毒抗体的检测。对于水貂阿留申病毒抗体阳性样品,试纸条检测线(T线)和质控线(C线)均有条带,水貂阿留申病毒抗体阴性样品,试纸条检测线(T线)无条带,而质控线(C线)有条带。结果,所制备的水貂阿留申病毒抗体胶体金检测试纸条实验室检测阳性质控血清符合率达100%,不与MEV、CDV阳性血清及ADV阴性血清反应,对试纸条的重复性检测达100%,临床试验对240只水貂血清样品对比进行检测,两种方法检测结果符合率95.83%。上述结果表明,本研究建立的水貂阿留申病毒抗体胶体金检测方法可以作为替代对流免疫电泳检测水貂阿留申病的新方法。     

CIEP法检疫进口水貂阿留申病

水貂阿留申病是一种常见的水貂慢性、进行性病毒病,对养貂业危害较为严重。本病的损失不单在于其潜伏期长,传染率、死亡率高,尤为严重的是本病可以大大增加母貂的空怀、新生仔貂死亡和降低产仔率,使生产能力下降,造成极为严重的经济损失。近年来,我国养貂业发展也很快,从国外引进优良品种也较多,为此加强进口水貂阿留申病检疫工作十分重要。1989年9月,辽宁某地貂场从国外引进5月龄煤黑色种貂2500头,其中雄性500头,雌性2000头。     

水貂阿留申病的碘凝集试验

阿留申病是水貂的三大疫病之一,为一种病毒性传染病。它不同程度地流行和存在各个饲养场,对养貂业危害甚大。主要表现浆细胞增多、血清中γ-球蛋白增高、持续性病毒症、肾小球肾炎、伴有母貂空怀显著增加和秋冬季节的大批死亡。目前,此病的诊断多采用碘凝     

貉狐源阿留申病病毒的感染检测与基因特征

为检测新发现的貉狐阿留申病病毒(RFAV)感染并分析该病毒的基因特征,应用PCR、对流免疫电泳(CIEP)和碘凝集(IAT)试验检测RFAV感染的貉、狐样品;用阿留申病病毒属保守引物对RFAV进行PCR扩增、测序并进行序列分析。结果显示,2012至2014年77只可疑RFAV感染病兽的PCR检测阳性率为81.8%,其中58份PCR阳性血清用AMDV-G抗原的CIEP检测的阳性率是100%,IAT检测的阳性率为92.0%。而健康貉、狐用PCR、CIEP和IAT检测均为阴性。RFAV的4个代表毒株蛋白NS1、VP2氨基酸序列与水貂阿留申病病毒(AMDV)的相似性分别小于76.7%、92.1%,与同属的灰狐阿留申病病毒(GFADV)的相似性更低。与AMDV和GFADV毒株相比,RFAV的NS3蛋白序列较短,为66aa;VP2蛋白的半胱天冬酶裂解位点417DTLS/A421是S420,不同于其他2种病毒的D420;NS1蛋白的半胱天冬酶裂解位点226EE/T228,与其他2种病毒不同。所有测序的RFAV高变区核酸序列进化树显示,RFAV形成阿留申病病毒属的一个新分支。3种方法检测结果分析表明,AMDV-G毒株抗原适用于狐、貉RFAV感染后抗体的CIEP检测;IAT试验可用于RFAV导致的貉高γ球蛋白血症检测。RFAV基因特征表明其不同于水貂阿留申病病毒,是自然感染貉和蓝狐的新种阿留申病病毒;这提示应采取有效措施预防貉、狐的阿留申病病毒感染。     

水貂病毒性肺炎的诊断

1988年秋季和1989年春,宁夏某养殖场的水貂开始发病,以后逐渐蔓延至全群。病貂没有年龄、性别、肥瘦之差别,疫情持续约3个月,以出血性肺炎为主要特征,死亡率为2％,2年共死亡水貂90只,占该场水貂死亡总数的35.3％。     

貂阿留申病特异性IgE及IgD型循环免疫复合物检测

采用兔抗貂免疫球蛋白e链及8链包被聚苯乙烯反应板,建立了检测貂阿留申病(ADM)病貂血清中特异性IgE及IgD型循环免疫复合物(CIC)水平的捕获法ELISA.对132份ADM病貂不同病期血清检测结果,IgE及IgD型CIC检出率分别为62.12%和49.24%.IgE及IgD型CIC动态变化相似,即患病早期较高,5-9 d达高峰,以后逐渐下降,其变化与病情发展密切相关.     

毛皮兽阿留申病毒可视化交叉等温扩增检测方法的建立及初步应用

为建立快速、特异、灵敏的毛皮兽阿留申病毒可视化交叉引物等温扩增检测方法(CPA),以阿留申病毒属内病毒序列为参考,在VP2序列高变区保守区段设计合成4条特异引物。通过优化CPA反应条件,建立了毛皮兽阿留申病毒可视化交叉引物等温扩增检测方法,并进行了特异性、敏感性试验以及对临床样品的检测。结果显示,该方法可扩增水貂阿留申病毒(AMDV)和狐貉阿留申病毒(RFAV),对犬科和水貂组织以及常见病毒无特异性反应;对AMDV、RFAV可视化检测下限分别为5.38×10~2copies/μL、5. 93×10~2copies/μL;对83份临床样品的检测结果显示,其中有16份PCR检测为阴性,CPA、qPCR检测为阳性的样品,表明CPA检测方法优于传统PCR。本试验建立了一种高敏感性、特异性检测毛皮兽阿留申病毒的方法,通过添加荧光染料实现了可视化检测,它更加适合基层兽医站、养殖场进行快速核酸检测。     

水貂土拉杆菌病的诊断

土拉杆菌病(Tularemia)又名野兔热,是由土拉杆菌引起的一种传染病。1982年4月河北省某水貂场暴发了一种急性传染病。笔者采取病料进行综合实验诊断,确诊为土拉杆菌病。 (一)发病情况 该水貂场附属于一个冷冻厂,共养水貂183只,其中公貂34只,母貂149只。水貂的饲料以冷冻厂加工山兔、野猪的下杂和孢子肉为主,并喂少量谷物饲料如玉米面和豆面等。动物性饲料放在冷库冰冻保存,每天下午从冷库取出来放在锅内煮熟,第二天早晨喂貂。4月24日从冷库取回的全部是山兔     

水貂新型败血性疾病病原体的研究

某水貂场发生一种急性败血性传染病,引起水貂大批死亡。自死亡貂分离到一种革兰氏阴性菌,回归水貂典型发病死亡,并于24小时内致死小白鼠,从貂和小白鼠均分离到同一病原菌。根据细菌系统分类法,进行了一系列试验,结果表明为嗜水性气单胞菌嗜水亚种。本菌存在于淡水、非污染水中,可引起蛙的红腿病,致蛇败血病和口炎(Camin,1948;Page,1961),也可感染淡水鱼,常为鱼病毒侵入后的继发感染菌。     

抗水貂肠炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

将水貂肠炎病毒SMPV-11株纯化后免疫4～6周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,获得了8株稳定分泌抗水貂肠炎病毒SMPV-11株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、H5、F5、F4、A9、B7、H11和H8.经过鉴定:其腹水ELISA效价分别在1:6.4×103和1:2.56×104之间;且与犬瘟热病毒、阿留申病病毒、犬腺病毒不发生交叉反应;而与水貂肠炎病毒、犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒呈特异性反应;这8株单克隆抗体均为IgG类型.     

毛皮兽阿留申病毒SYBR Green Ⅰ-qPCR检测方法的建立及病毒种鉴别

为建立快速定量检测、鉴别毛皮兽阿留申病毒的SYBR Green ⅠqPCR方法,以阿留申病毒属内病毒序列为参考,在VP2序列高变区的保守区段设计合成1对引物。结果,该方法检测水貂阿留申病毒(AMDV)、狐貉阿留申病毒(RF AV)的最低浓度分别为5.38×10~2copies/μL、5.93×10~2copies/μL,且通过熔解曲线可区分鉴别不同病毒种。对55份临床样品以及4株RFAV进行定量检测,结果,有13份PCR检测为阴性的样品被qPCR检测为阳性,说明qPCR检测方法的灵敏度优于普通PCR。上述结果表明,本试验建立的方法是一种高敏感性、特异性检测毛皮兽阿留申病毒,并可通过实测Tm值区分阿留申病毒的分子诊断技术。     

貂病毒性肠炎牛睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１～５ｍｌ．未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱毒株具有良好的安全性、免疫原性和遗传稳定性。     

水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。     

水貂温和气单胞菌病的调查

1986年海安县渔业村水绍场爆发一种急性败血性水招传染病。该场饲养563只水貂,发病372只,发病率65.7％。曾用犬瘟热疫苗预防和青霉素等治疗,均不奏效。死亡364只,死亡率97.6％。经流行病学调查,病原体分离鉴定、水貂人工感染试验等,确定这是一种由温和气单胞菌引起的在国内外尚未发现的貂的新传染病。     

一起水貂痢特灵中毒的报告

我县一社员自办貂场,共养水貂104只,其中60～70日龄幼貂76只,发生幼貂痢特灵(呋喃唑酮)中毒,发病21只,死亡5只。现报告如下: 貂场于1981年7月3日和6日因胃扩张和肠炎死亡幼貂4只,为了治疗和预防肠炎,从7月8日起每天给每只健康幼貂的饲料中加入痢特灵0.1克、合霉素0.2克,于早餐时一次喂服,结果7月10日投药后1小时发病6只,7月11日投药后1小时发病12只,死亡2只,12日凌晨发病3只,全部死亡。12日清晨,貂场停止喂痢特灵、合霉素,发病即行停止。     

美国申大为、高恒博士来兰进行学术活动

美国华盛顿州立大学申大为博士夫妇、高恒博士夫妇,应中国农业科学院邀请,于5月29日来兰州进行学术交流。在有130多人参加的报告会上,他们作了“动物病毒研究的新趋势”,“羊蓝舌病”、“慢病毒病”的学术报告,介绍了美国当前防制病毒病及兽用疫苗研制情况,以及酶标、荧光抗体、放射免疫分析、琼脂扩散,单克隆抗体等技术及核酸限制内切酶的研究情况;阐述了蓝舌病在世界及美国的流行情况、病原分型、诊断及免疫方法;较详细的讲述了在世界许多地方流行的梅迪维斯纳病、羊肺腺瘤样病、山羊关节炎脑炎、绵羊痒病、水貂阿留申病等慢病毒病的病原、流行病学、临床表现、诊断及防制问题。随后,我