牛乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成与耐药性的研究

为探讨金黄色葡萄球菌生物被膜形成与耐药性之间的关系,本研究对分离于宁夏地区牛乳腺炎的50株金黄色葡萄球菌进行药敏试验,采用刚果红琼脂法检测金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力,同时用PCR方法对菌株的生物被膜相关基因进行检测。结果显示,金黄色葡萄球菌耐药情况严重,普遍存在多重耐药现象;受试菌株有36株菌(72%)为生物被膜阳性菌株,有14株菌(28%)为生物被膜阴性菌株;受试菌株生物被膜相关基因的检出率分别为icaA(96%)、sarA(76%)、fnbA(100%)、fnbB(100%);生物被膜阳性菌株对大多数抗菌药物的耐药率高于生物被膜阴性菌株,但二者只对克林霉素的耐药率具有统计学意义(P0.05)。本研究结果表明,金黄色葡萄球菌生物被膜的形成机制复杂,生物被膜的形成在金黄色葡萄球菌的耐药性方面起到了一定的促进作用。     

应用SPA—扫描免疫电镜技术诊断鸡传染性法氏囊病

目前,免疫电镜技术已广泛用于病毒检测、病毒分型和临床诊断。为了克服免疫电镜技术存在前带效应的影响。Katz等(1980)应用金黄色葡萄球菌作为固相,成功地建立了一种固相免疫电镜技术。此法具有简便、快速、敏感等特点。我们应用此法诊断鸡传染性法氏囊病(IBL),收到了较好的效果。 (一)材料与方法 1.金黄色葡萄球菌Cowan I株:购自中国兽药监察所,固体培养基培养。在制备葡萄球菌A蛋白(SPA)菌体稳定液前,间隔12小时传1代,连传12代。     

河南省猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及分子分型研究

本研究旨在阐明河南省猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行现状及耐药表型特征。从河南省3个规模化养猪场和1个生猪屠宰场共采集1 107份猪鼻腔拭子,采用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌与MRSA疑似株,运用多重PCR(扩增16SrRNA、nuc和mecA)鉴定金黄色葡萄球菌和MRSA;以纸片扩散法检测MRSA分离株对19种抗菌药物的敏感性;运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和葡萄球菌蛋白A(spa)分型方法对MRSA分离株进行分子分型。结果显示,共检出358株金黄色葡萄球菌,分离率为32.3%,其中119株为MRSA,分离率为10.8%,金黄色葡萄球菌分离株中MRSA的阳性率为33.2%。有66.39%的MRSA分离株同时耐受15种抗菌药物,其中出现了喹奴普汀/达福普汀(1.7%)和利福平(0.8%)耐药株,但尚未出现万古霉素和利奈唑胺耐药株。PFGE结果显示,河南省猪群流行的MRSA遗传谱系较为复杂。MLST和spa分型结果显示,该地区猪群流行的MRSA主要为ST9-t899型。研究结果表明,河南省猪群MRSA广泛流行,多重耐药十分严重;流行的猪源MRSA主要为ST9-t899型,但遗传背景呈多样化。本研究结果为加强我国生猪养殖重点地区猪源MRSA的监测和流行传播机制研究奠定了基础。     

禽大肠埃希氏菌融合菌株疫苗的研制及应用

对从陕西省主要养鸡地区病死鸡分离的禽致病性大肠埃希氏菌进行Omp分型 ,用不同Omp型的菌株构建成融合菌株。用融合菌株制作铝胶灭活疫苗 ,与单价疫苗和两亲本菌株双价疫苗的免疫保护效果进行比较。结果表明 ,融合菌株疫苗可对多种O血清型致病性大肠埃希氏菌的攻毒试验产生坚强的保护 ,保护率高达 93%～ 10 0 % ,而O血清型单价疫苗的保护率仅 6 7%～80 % ,双价疫苗的保护率仅 80 %。在生产中对蛋用鸡的应用结果表明 ,融合菌株疫苗可明显降低鸡的死淘率。     

中药方剂对试验性鸡葡萄球菌性关节炎保护的组织病理学研究

采用右侧关节腔直接接种金黄色葡萄球菌的方法人工复制鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型,通过在饲料中添加一定比例的中药方剂,并在接种金黄色葡萄球菌后第7、14、21、35天,各组随机取4只鸡进行剖杀,取心、肝、肺、肾等脏器进行组织病理学观察,检测本教研室所组方剂对鸡葡萄球菌性关节炎的防治效果。结果表明,试验组鸡的脏器变化趋势与感染对照组鸡相似,均为试验初期急性病变,此后病变逐渐减轻,但试验组鸡的脏器在初期明显较感染对照组的病变轻,且此后病变减轻与恢复出现的时间早,速度快。表明,本试验所用中药方剂具有保护内脏器官,促进组织恢复的功能,可以预防和治疗鸡葡萄球菌性关节炎。     

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及其生物学特性的研究

为了对疑似猪接触传染性胸膜肺炎的病死猪肺脏进行胸膜肺炎放线杆菌(APP)的分离鉴定,并研究其生物学特性,通过形态学及培养特性观察、生化试验、PCR方法对分离菌株进行了鉴定,并对APP分离株进行了NAD依赖试验生物学分型、PCR方法血清学分型、PFGE基因分型以及K-B纸片法药敏试验。结果显示,共分离到16株APP,源自两省三地的APP分离株具有一致的形态学特征和相似的生化特性。9株福建分离菌均为生物Ⅱ型,其PFGE基因型均为Pa4;7株安徽分离菌均为生物I型,其中6株为血清型12型,菌株FD1402的PFGE基因型为Pa2,其余5株APP菌株的PFGE基因型为Pa1,剩余1株为血清型3型,其PFGE基因型为Pa3。药敏试验结果显示,对18种常用抗菌药中的环丙沙星、诺氟沙星、氟苯尼考,安徽株均100%敏感,福建株依次为88.9%、77.8%和66.7%敏感;所有分离株对其他15种药物均表现出不同程度的耐药。上述结果表明,不同来源APP菌株的生物学特性较为一致。血清型12型是安徽省APP的主要流行血清型之一。APP分离株的PFGE基因型与血清型、生物型之间无明显的相关性。     

猪链球菌分型方法的比较

采用传统的血清学分型方法和随机扩增多态性DNA分析 (RAPD)方法对长春地区分离的猪链球菌进行分型。结果表明 ,RAPD法比传统血清学分型方法更能反映菌株间的亲缘关系 ,并从分子水平上揭示了不同菌株的遗传距离 ;RAPD法具有快速、简便、分型性高等优点     

鸭源葡萄球菌的分离鉴定和毒力基因检测及其与致病性相关性研究

为了解广西部分地区鸭源葡萄球菌的流行状况、毒力基因分布情况及致病性,采集该地区送检病鸭组织,进行葡萄球菌分离鉴定,并用PCR方法检测7个代表性毒力基因。结果显示,自送检病料中分离鉴定出39株葡萄球菌,伪中间型葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、溶血葡萄球菌、猪葡萄球菌、阿尼蒂斯葡萄球菌、科氏葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌分别有8、18、2、1、3、3、3、1株。毒力基因检测结果显示,鸭源葡萄球菌各菌种间毒力基因分布存在差异,金黄色葡萄球菌携带毒力基因较全,其次是伪中间型葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、溶血葡萄球菌、猪葡萄球菌、阿尼蒂斯葡萄球菌、科氏葡萄球菌和表皮葡萄球菌。致病性试验结果显示,金黄色葡萄球菌和伪中间型葡萄球菌均可使小鼠产生皮肤化脓、致死,比率高于其他分离菌株,表明其对小鼠有强致病力。本研究结果表明广西地区存在葡萄球菌感染,其中金黄色葡萄球菌和伪中间型葡萄球菌毒力基因分布多,且致病性强。     

孵化后期鸡胚葡萄球菌感染的诊断

葡萄球菌病是危害养禽业较普遍的一种疾病。近几年,国内有关本病的报道不少,但多限于幼龄鸡和成年鸡,而有关葡萄球菌引起胚胎死亡的报道则罕见。我们于1987年6月在广东省某县的一个孵化室确诊孵化后期鸡胚感染金黄色葡萄球菌引起胚胎和出壳雏鸡死亡。     

肉种鸡金黄色葡萄球菌病的诊疗

肉种鸡金黄色葡萄球菌病的诊疗黑龙江省讷河市某种鸡场的一群１５周龄肉种鸡于１９９６年３月中旬发生一种以跛行为特征的疾病，经流行病学调查、病理剖检及实验室检验等，诊断为金黄色葡萄球菌病。发病情况该群鸡从１５周龄开始部分出现跛行，随后表现跛行的逐渐增多，病...     

广西鸡毒霉形体的分离与鉴定

从广西不同地区采集疑似鸡毒霉形体 (MG)感染的 46份病鸡病料中分离到 7个菌株 ,经分离培养、L形细菌检验、理化特性鉴定、血清学定型、人工感染试验以及PCR扩增检测等方法鉴定 ,确定 7个分离株为MG。     

食品动物源沙门菌fosA_3基因的流行及传播特征

为研究质粒介导的磷霉素耐药基因fosA_3在食品动物源沙门菌中的流行状况及传播特征,采用PCR方法对本实验室保存的288株动物源沙门菌进行磷霉素耐药基因fosA_3、fosA和fosC2的检测,用琼脂稀释法测定阳性菌株对17种抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,玻片凝集法确定其血清型。采用脉冲场凝胶电泳(PFG E)和多位点序列分型(M LST)分析菌株间的亲缘关系。采用接合转移/转化、复制子分型、S1-PFGE和Southern杂交等对fosA_3的水平传播和质粒特征进行分析。结果显示,共筛选得到6株(2.1%)fosA_3阳性沙门菌,没有检测到fosA和fosC2。6株fosA_3阳性菌均表现出多重耐药,且同时携带blaCTX-M-9G(均为blaCTX-M-14)基因和floR基因,血清型检测均为印第安纳型。6株菌均为MLST(ST)17型,PFGE结果显示其图谱相似。质粒分析结果显示,fosA_3能通过IncN或IncA/C型质粒与blaCTX-M基因发生共同转移。本研究首次从国内不同地区采集的鸡粪便拭子样本中分离得到的沙门菌中检测到fosA_3基因,菌株的克隆传播和fosA_3与blaCTX-M随质粒的水平传播都加速了耐药性的散播,对公共卫生构成潜在威胁。     

晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离株的鉴定及其16S rDNA序列的同源性分析

为了鉴定晋中地区鸡致病性大肠杆菌,利用传统细菌鉴定方法及16S rDNA序列分析,对分离自晋中地区养殖场送检的30只病死鸡肝中的疑似大肠杆菌菌株进行鉴定及遗传进化分析。结果表明:分离出8株致病性不同的大肠杆菌;鉴定出O78、O2、O11共3种血清型;8株菌均为多药耐药菌,其中对5种及5种以上抗菌药物耐药的菌株达到总分离菌株的87.5%;将8株菌株的16S rDNA基因序列与GenBank中登录的大肠杆菌参考株的16S rDNA基因序列进行比对,同源率均达到99%。经MEGA6.0软件分析后,其位于不同的分支上。本研究结果为进一步研究致病性大肠杆菌的耐药性和对晋中地区大肠杆菌病的有效防治奠定了一定基础。     

水貂出血性肺炎病原铜绿假单胞菌的分子特征

为了解水貂出血性肺炎病原铜绿假单胞菌的流行特点,对来自水貂出血性肺炎和貂场环境经生化培养鉴定的41株疑似铜绿假单胞菌分离株,用PCR快速鉴定;对鉴定的菌株以纤毛、鞭毛结构蛋白基因的核苷酸序列进行分型,并进行LPS血清分型。结果显示,建立了快速鉴定铜绿假单胞菌的二重PCR方法和纤毛、鞭毛结构蛋白基因序列的分型方法。菌株分型结果显示,分离的铜绿假单胞菌株被分为6种核酸分子型和6种血清型(G、B、I、C、D、F)。分型结果表明,水貂出血性肺炎的主要流行株属于LPS血清型G、核酸分子型4f4p或4f5p;另外,少数其他分子型铜绿假单胞菌也可对水貂致病。     

乳牛乳腺炎多联疫苗的研制及其临床应用效果

从全国各地奶牛场采集的256份临床型乳腺炎病乳中分离鉴定出了13株金黄色葡萄球菌、32株无乳链球菌和27株停乳链球菌;采用血清学交叉免疫试验,筛选出了毒力及交叉免疫原性强的3种菌的优势菌株。采用这些菌株和一系列新工艺和新方法,研制出了乳牛乳腺炎灭活多联疫苗。建立了用奶山羊进行制苗菌株毒力复壮及用ELISA进行抗体检测的方法,进行了免疫剂量及注射部位的筛选试验以及疫苗安全性、免疫持续期、效力及田间扩大试验。结果表明,该灭活多联疫苗对乳牛具有安全高效的特点,经肌肉或后海穴免疫1次,每次5mL,免疫持续期可达4个月;且后海穴的免疫效果优于肌肉注射,可使临床型乳腺炎发病率降低49.22%~59.86%。     

鸡源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

取病死鸡肝接种于血清琼脂平板,挑取符合巴氏杆菌特征的单菌落进行纯化培养和染色镜检;对纯培养菌提取核酸,进行16S r RNA、kmt1和cap A基因的PCR鉴定,7个管家基因的PCR扩增和多位点序列分型,以及12个毒力基因的PCR检测;并进行分离菌的动物回归试验。结果显示,分离的2株病原菌(HN-1和CZ-6)均为两极浓染的革兰阴性短杆菌,16S r RNA和kmt1基因序列与多杀性巴氏杆菌的同源性均高于99%,荚膜血清型鉴定为A型,基因型为ST129型,除tox A、ptf A、nan H之外的9个毒力基因均被检出,动物回归试验表明分离菌对鸡的致病性较强。结果表明,这2株鸡源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定为我国禽源菌株的遗传特性研究提供了一定参考。     

荆州地区家禽衣原体病的调查

1988～1989年,我们采用间接血凝和间接补反法对荆州地区的鸡、鸭、鹅的衣原体病进行了血清学调查;并对阳性的鸡、鸭、鹅的病原追踪和分离。 (一)血清学调查1.血清:来源于12个县市鸡、鸭、鹅,随机采样供检。2.抗原及阳性、阴性血清:间接血凝(IHA)和间接补反(ICF)的抗原及阳性、阴性血清均由湖北省畜牧兽医研究所提供;溶血素、冻干补体由成都生物药械厂提供;绵羊红细胞由本站供给。3.操作方法:间接血凝反应:操作按《畜禽衣原体病间接红细胞凝集反应技术操作规程》进行。判定标准:被检血清效价≥1:64(廿)为阳性,     

127株不同来源的猪丹毒杆菌的分型鉴定

目前,按照Kuosera的分型系统,根据菌细胞壁的可溶性耐热抗原,将猪丹毒杆菌分为27个血清型(含亚型),命名为1、1a、1b、2、2a、2b、3………22型和N型。最近,徐克勤等(1984)又报告一种由健康猪扁桃体分离的不同于(国际标准血清型的新株,初步定为23血清型。我们用国际分型方法,通过琼脂扩散试验对127株不同来源的猪丹毒杆菌作了血清学分型,现将结果报告如下。     

鸡大肠埃希氏菌的药物敏感性测定

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)引起鸡的一种细菌性疾病 ,近年已成为养鸡业主要疾病之一。目前对该病主要是利用抗菌药物进行预防和发病时的治疗 ,由于大肠埃希氏菌血清型繁多、且复杂 ,同时各地区血清型存在较大差异 ,给该病的防治带来很大困难。本试验对分离的 17株大肠埃希氏菌用氟哌酸等 11种药物进行药敏试验 ,旨在为大肠杆菌病的临床治疗提供用药参考。1　材料与方法1.1　试验用菌株　 17株大肠埃希氏菌均从东北地区发病鸡场分离获得 ,并经生化试验鉴定 ,编号为 1— 17号。1.2　培养基　营养琼…     

WHO紧急会议确定的研究课题

1.研究制定沙门氏菌污染鸡、饲料及环境的快速、准确的检出方法,其中包括细菌分离方法、血清学检查方法以及取材计划。2.实验室新技术,即质体的检出和鉴定,使用DNA指纹法、同功酶法等决定来源于人的沙门氏菌的病原性。3.用侵袭性血清型菌研究产蛋鸡沙门氏菌的病原性以及垂直感染。4.为防制沙门氏菌病探讨抗生素的使用方法以及Narmi法的评价方法。5.调查免疫程序的效果、费用、免疫期限、