弓形虫单克隆抗体试剂的研究——应用RIHA及IHA法对弓形虫感染兔、羊循环抗原和抗体的检测

应用抗弓形虫单克隆体(McAb)致敏绵羊红细胞建立的反向间接血凝诊断法(RIHA)和间接血凝诊断方法(IHA),对人工感染弓形虫的兔、羊血清进行了循环抗原(CAg)和抗体(Ab)检测。结果表明,弓形虫弱毒(QHO)株和强毒(RH)株感染的兔和羊血清,用RIHA检出CAg的时间在感染后1～2天,平均4天;IHA检出Ab的时间在感染后8～16天,平均12天。用毒力不同的弓形虫感染后,CAg检出时间有一定差异:QHO株感染的兔平均5.3天,羊平均6.25天;RH株感染的兔平均2.3天,羊为1天。兔、羊CAg的阳性检出率均为100％。兔、羊血清CAg于感染后23～66天先后消失,而Ab滴度长期维持在一定高度(1:64～1:4096)。证明RIHA方法对不同毒力弓形虫感染的动物血清CAg可以达到早期诊断的目的。为弓形虫病急性期和早期现症感染提供了可靠的诊断方法和手段。     

用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血凝诊断试剂的研究

用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝诊断试剂与弓形虫虫体抗原间接血凝诊断试剂的符合率为 10 0 % ;在人工感染兔血的检测中 ,E/SA致敏的间接血凝诊断试剂比虫体抗原致敏的间接血凝诊断试剂的阳性检出时间提前 2d ,显示弓形虫E/SA间接血凝诊断试剂具有早期诊断和生前诊断的应用价值     

陕甘宁青四省(区)人及畜禽弓形虫病的血清学调查

采用中国农科院兰州兽研所提供的间接血凝诊断液和试验方法,对我区驻陕甘宁青四省区28个单位共4340份人畜(禽)血清进行了弓形虫抗体检测,检出阳性283份,阳性检出率为6.52％。其中检测人血清973份,检出阳性38份占3.91％;检测猪血清916份,检出阳性240份占26.20％,检测马(骡)血清1108份,检出阳性1份占0.09％;检测牛血清570份,检出阳性2份占0.35％,检测羊血清647份,检出阳性1份占0.15％;检测兔血清81份,检出阳性1份占1.23％;检测犬血清11份、鸡血清34份,均未检出阳性。     

猪囊虫旋毛虫弓形虫组联快诊膜及全血斑点ELISA检测法的建立

将纯化猪囊虫、旋毛虫、弓形虫抗原分别定点包被于直径为5mm的混合纤维素酯微孔滤膜上,制成三虫组联快诊膜;自猪耳尖采取全血10μl作为Dot-ELISA检测样品,2小时内同时检测3种寄生虫病。以猪囊虫、弓形虫抗体阳性血清各90份、旋毛虫阳性血清26份进行检测,只在其相应位点呈阳性结果,无交叉反应;对720头份商品猪血清进行检测,其阳性检出率分别是:猪囊虫4.3％(31/720),旋毛虫0.14％(1/720)、弓形虫抗体阳性46.7％(336/720),与当地检出率平行:用350头商品猪的微量全血和其相应微量血清进行检测对比,结果猪囊虫阳性检出率,微量全血法为4.3％(15/350),微量血清法为4.6％(16/350),弓形虫抗体阳性检出率,微量全血法为45.7％(160/350),微量血清法为47.1％(165/350),经X~2检验,两种样品检测结果相差不显著(P>0.05)。     

华南地区军警犬弓形虫旋毛虫血清抗体调查

采用酶联免疫吸附试验对广西、广东军警犬进行了弓形虫和旋毛虫血清抗体调查。采样１０１份，其中广西３０份，广东７１份。检出弓形虫抗体阳性５份，阳性率４．９５％；旋毛虫抗体阳性１份，阳性率０．９９％；广西的弓形虫、旋毛虫阳性率均为３．３３％；广东弓形虫阳性率为５．６３％，旋毛虫未检出。     

云南省家畜弓形虫病的调查

应用间接血凝试验(IHA)对云南省大理、丽江、红河、玉溪、昆明等地区的主要家畜进行了弓形虫抗体检测,共抽查家畜血清1076头份,发现阳性125份,阳性率为11.62％。其中包括,猪血清525份,阳性率为20.19％;马132份,阳性率为1.51％;牛205份,阳性率为1.44％;羊202份,阳性率为6.93％。检测抗体滴度均达到或超过1:64。猪的阳性检出率最高,很可能是云南地区人畜自然感染弓形虫的重要感染源。     

牡丹江地区出入境人员弓形虫病的血清学调查

采集经牡丹江国际旅行卫生保健中心健康体检的出入境人员血清样品 3 2 8份 ,用间接血凝 (IHA)试验检测弓形虫抗体。结果 ,检出弓形虫抗体阳性血清 2 0份 ,阳性率为 6.1%。     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测,并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测,与弓形虫IHA检测结果的符合率为82.5%,金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2 d检测到抗体。结果表明,检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂(金标试纸条)的敏感度高于IHA。     

循环抗原与弓形虫病的诊断

近几年的研究表明,弓形虫(Toxoplasma gondii)循环抗原(Circulating anti-gens,CAg)在弓形虫病的血清学诊断中有着重要的意义。特别是弓形虫感染早期、急性期或活动期以及免疫损伤和免疫缺陷(如AIDS)病人的感染。检测弓形虫CAg作为临床血清学诊断的依据已经愈来愈受到研究人员和临床医生的重视。本文以现有的资料结合笔者的体会就弓形虫病诊断所面临的问题和CAg的诊断学意义等予以评述。     

ABC—ELISA检测实验猪弓形虫特异性IgG抗体的研究

用ABC—ELISA对弓形虫实验感染不同时期的猪血清特异性IgG进行了检测,并和常规ELISA予以比较。结果,实验感染后第1周的15份血清、第2周的13份血清和第3周的10份血清,用ABC—ELISA检出IgG的阳性率分别为46.67％、61.53％和100％,而常规ELISA检出IgG的阳性率分别为20％、61.53％和100％;ABC—ELISA检测IgG的平均滴度为1:3666,常规ELISA检测IgG的平均滴度为1:1333;前者比后者灵敏2.75倍。另外,还和猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、猪喘气病、猪布氏杆菌病和猪旋毛虫病的阳性血清进行了对照检测,结果均无交叉反应。证明:ABC—ELISA是检测弓形虫抗体的特异而又灵敏的方法。从而为弓形虫单克隆抗体的检测提供了良好手段。     

牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查

为了调查我国牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,应用新孢子虫酶联免疫吸附试验(ELISA)和弓形虫间接血凝试验(IAT)分别检测了来自国内10个省(市、自治区)的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清。结果显示,乳牛新孢子虫的抗体阳性率为17.2%,弓形虫的抗体阳性率为2.3%,没有检测到既有新孢子虫抗体又有弓形虫抗体的乳牛血清。各牛场所检乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率在0~34.4%之间。在水牛和肉牛血清中未检测到新孢子虫抗体和弓形虫抗体。流产乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率为20.2%,未流产乳牛为16.1%,其中血清抗体阳性乳牛主要在妊娠中晚期流产。各个年龄段乳牛血清的抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。不同妊娠胎次的乳牛血清抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。确认新孢子虫病在国内大部分牛场存在。     

重庆地区猪弓形虫病的血清学调查与分析

为掌握重庆地区猪弓形虫的感染情况及流行趋势,于2011年5月份、8月份和11月份分别采集重庆39个区(县)的猪血清样本3 510份,采用酶联免疫吸附试验检测了血清中的弓形虫抗体。结果显示,受检的3 510份猪血清样本中,阳性样本2 522份,弓形虫感染阳性率为71.85%。按不同猪来源统计,散养户的阳性率为75.46%,规模猪场的阳性率为69.96%,屠宰场生猪的阳性率为67.79%,种猪场种母猪的阳性率为73.59%;按采样季节统计,猪弓形虫抗体阳性率5月份为71.58%,8月份为81.28%,11月份为69.97%。根据调查结果判断,重庆地区各区(县)和各种来源的猪均有较高程度的弓形虫感染,夏季的感染率明显高于冬季和春季,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。     

陕甘宁青四省(区)人畜棘球蚴病的血清学调查

1986年4月～1987年2月用甘肃省人民医院的棘球蚴微量间接血凝诊断液,对驻陕甘宁青4省(区)24个团以上单位共1776份人畜血清进行了抗体检测,检出阳性456份,检出率为25.68％。人血清941份,阳性113份,阳性率占12.01％(其中:藏、蒙族人67份,阳性13份,占19.40％;汉族人874份,阳性100份,占11.44％。男性909份,阳性107份,占11.77％,女性32份,阳性6份,占18.75％);牛血清266份,阳性132份,阳性率占49.62％;羊血清569份,阳性211份,阳性率占38.08％。感染棘球蚴阳性抗体最高滴度人血清1:256,牛血清1:8192,羊血清1:4096。     

河北省家畜弓形虫病的流行病学调查

应用间接血凝试验 (IHA)对河北省家畜弓形虫病进行了检测 ,共检测猪血清 1 3 0 0份 ,其中阳性血清 4 64份 ,阳性率达 3 5 .69% ;绵羊血清 2 2 2份 ,阳性 5 7份 ,阳性率 2 5 .68% ;山羊血清 10 0份 ,阳性 10份 ,阳性率 10 .0 0 % ;牛血清 3 0份 ,阳性 8份 ,阳性率 2 6.67% ;马血清 4 3份 ,阳性 1份 ,阳性率 2 .3 3 % ;骡血清 2 8份 ,阳性 1份 ,阳性率 3 .5 7% ;驴血清 3 3份 ,阳性 2份 ,阳性率 6.0 6%     

动物类人乙型肝炎的调查

作者采用人的乙型肝炎ELISA诊断试剂盒检测动物的乙型 肝炎。结果HBsAg检测黄牛血清43份,阳性率为2.3％(1/43); 肝浸液43份,阳性率为27.9％(12/43);肌浸液43份,阳性率为9.3 ％(3/43);鸡血清72份,阳性率为12.5％(9/72);牛奶37份,阳性率为10.8％。HBeAg检测黄牛血清43份,未检出阳性;肝浸液43份,阳性率为11.6％(5/43);肌浸液43份,未检出阳性;鸡血清72份,阳性率为2.8％(2/72)。其结果表明黄牛、鸡、奶牛均感染类人乙型肝炎病毒,并广泛存在于肝脏、血液、肌肉及牛奶中。     

牦牛莱姆病血清流行病学的初步调查

1991年5～12月,在甘肃省肃南县从不同生态环境下放牧的牦牛群采血清99份,用ELISA检测莱姆病流行情况,其中采自草甸草原牦牛群血清58份,检出阳性血清38份,阳性率为65.52％;采自灌丛草原牦牛群血清41份,检出阳性32份,阳性率为78.05％。总阳性率达70.71％(70/99)。     

牛蓝舌病的血清学调查

1988～1989年,对兰州军区部分军马场和牧场进行了牛蓝舌病的调查;并采用青岛动物检疫总站提供的牛蓝舌病凝胶免疫扩散诊断抗原进行了血清学抽样检测。调查结果表明我区部分牧场自1983年来牛蓝舌病呈散发,但未引起死亡。血清学抽样检测不同品种牛224头份,检出阳性19头份,阳性率8.48％。其中青海五十六基地牦牛血清65头份,阳性9头份,阳性率达13.85％;甘肃山丹军马场褐牛血清为108份,阳性8份,阳性率为7.41％;陕西北关农场奶牛血清51份,阳性2份,阳性率占3.92％。经统计学处理,不同品种的牛阳性率无显著性意义(P>0.05)。     

青海省猪牛羊弓形虫病的血清抗体检测

弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种人畜共患寄生原虫病。据报道 ,该病近年在我国湖南省衡阳市、山东省临沂市、江西省南昌市等地的养猪场暴发流行 ,造成较大经济损失。为了解青海省畜间弓形虫病的感染情况 ,为防制该病提供依据 ,笔者对青海省牧区和农区 8个县的猪、牛、羊弓形虫感染情况进行了血清抗体检测。1　材料1.1　诊断试剂　弓形虫IHA抗原、标准阴性血清和阳性血清均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。1.2　被检血清　牛、羊血采自牧区的玉树、玛多 2个县和农区的乐都、大通 2个县 ;猪血采自农区的民和、湟源、循化、化隆 4个县。…     

用ELISA和PCR检测异常妊娠妇女弓形虫感染

为了解兰州市妊娠妇女近年弓形虫感染情况 ,探讨异常妊娠与弓形虫感染的关系 ,分别采用ELISA和PCR检测了异常妊娠妇女血清中TOX IgM和TOX DNA。结果 ,1 3 5例异常妊娠妇女血清TOX IgM和TOX DNA阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 1 2 .5 9% (1 7/1 3 5 ) ,总阳性率为 1 3 .3 3 % (1 8/1 3 5 ) ,组间无显著差异 (P >0 .0 5 )。异常妊娠史妇女与妊娠期无异常孕妇的血清TOX IgM阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 6.0 2 % (3 2 /5 3 2 ) ,组间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,相对危险度为1 .85。调查结果显示 ,兰州市弓形虫血清抗体阳性率较 1 994年略有上升 ,弓形虫感染的孕前检查应联合应用ELISA和PCR为宜。     

弓形虫单克隆抗体试剂的研究——单克隆抗体微量反向间接血凝试验

本文首次报道用杂交瘤细胞株3C_2分泌的抗弓形虫单克隆抗体腹水经饱和硫酸胺盐析纯化后致敏绵羊红细胞而建立了弓形虫微量反向间接血凝试验。结果表明:它可检测出含量仅为5μg/ml的弓形虫速殖子可溶性抗原,并且在弓形虫QHO株速殖子感染绵羊和家兔之后的2～6天,血清中即能检测到循环抗原;与正常绵羊、家兔和小白鼠的血清以及其它寄生虫感染的动物血清无非特异性反应和交叉反应;试剂经冷冻真空干燥处理后其活性不受影响,且至少能保存3个月之久。从而为早期弓形虫感染和现症急性感染等提供了一种特异性强、灵敏度较高和简便实用的诊断方法。