捻转血矛线虫冷冻保藏研究

用人工感染捻转血矛线虫（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓｃｏｎｔｏｒｔｕｓ）单一种试验羊粪便培养收集感染性幼虫。经０．０６％和０．０８％次氯酸钠（ＮａＯＣｌ）脱鞘，脱鞘率可达９０％以上，慢速致冷后幼虫的存活率为６４．５％。加入冷冻保护剂不能提高冷冻感染性幼虫的存活率。用正常的感染性幼虫感染试验羊后第１７ｄ即可查到虫卵，剖杀后成虫的回收率为２．６％，而相同数量的冷冻保藏的感染性幼虫感染后第２１ｄ才查到虫卵，成虫回收率为０．８％。表明冷冻保藏后的感染性幼虫发育受阻，成熟期推迟，但仍可感染易感动物。     

嗜线虫真菌捕食绵羊粪便中捻转血矛线虫幼虫的效果观察

采集感染捻转血矛线虫等胃肠道线虫绵羊粪便培养、分离三期幼虫,加入嗜线虫真菌纯培养物中,72 h?4%的幼虫被真菌菌丝缠绕和捕获;将该真菌培养物与感染捻转血矛线虫等胃肠道线虫的绵羊粪便混合后共同培养10 d,粪便培养物中的三期幼虫减少82%.     

绵羊捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗药性等位基因的PCR-RFLP分析

对来自宁夏、内蒙古4个地区的64条绵羊捻转血矛线虫,用PCR-RFLP技术分析了β-微管蛋白同种型Ⅰ基因第200位密码子的多态性.结果显示,药物处理组捻转血矛线虫中,抗药性纯舍子为20%(2/10),杂合子为50%(5/10),敏感性纯合子为30%(3/10).其他3组来自于自然感染的田间样品(每组18条)中未发现有抗药性纯合子,杂合子分别为11%、28%和17%,其余为敏感性纯合子.在等位基因频率上,药物处理组抗药性等位基因为45%;而其他3组分别是6%、14%和8%,敏感性等位基因占绝大多数.药物处理组绵羊寄生虫群体与自然感染组绵羊寄生虫群体,无论是基因型频率还是等位基因频率,均有显著差异(P<0.05).其中1份抗药性纯合子的测序结果表明,该线虫β-微管蛋白基因第200位密码子由TTC突变为TAC.     

应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫Hc38基因转录的研究

为研究RNA干扰对捻转血矛线虫Hc38基因转录的抑制作用,针对Hc38基因序列设计并合成特异性dsRNA、3对siRNAs(siRNA1,siRNA2,siRNA3),采用浸泡方式分别将dsRNA、siRNAs导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析Hc38基因在L3期幼虫中的相对含量以确定抑制效果。通过体外转录成功获得高浓度和高纯度的dsRNA,L3期幼虫经浸泡处理3d后,siRNAs组Hc38基因的相对含量分别为(14.93±1.75)%、(26.34±2.91)%和(15.86±2.54)%,dsRNA组为(32.27±1.50)%,均显著低于对照组。表明通过浸泡法导入的dsRNA和siRNAs均能有效抑制Hc38基因的转录,从而为捻转血矛线虫及其他寄生线虫的基因功能研究提供了一种新的方法。     

不同集卵方法收集的抗苯并咪唑捻转血矛线虫卵的发育试验

用饱和盐水、饱和糖水漂浮法获得抗苯并咪唑(benzimidazole)的捻转血矛线虫(Hae monchus contortus)虫卵,在实验室进行了在不同浓度的苯并咪唑药液中保存不同时间的虫卵发育试验。结果显示,用2种集卵方法获取的虫卵在虫卵发育试验中仅有不足以影响虫卵发育的微小差异,对整体试验也没有实质性的影响,表明2种集卵方法都可以作为该试验获取虫卵的方法;不同保存时间的苯并咪唑药液的试验结果也差别不大,对试验也没有实质性的影响。     

鞭式达丁屯氏菌对捻转血矛线虫感染性幼虫及秀丽隐杆线虫作用的动态观察

用光学显微镜和扫描电镜研究鞭式达丁屯氏菌对捻转血矛线虫感染性幼虫(L3)和秀丽隐杆线虫的动态作用。将鞭式达丁屯氏菌接种在0.2g/L玉米粉培养基中,培养7d后,加入试验线虫,在虫体刚被捕捉时即开始记为0h,此后分别于第1、2、3、4、6、8、12、16、20、24、36和48小时取样观察。结果显示,该菌培养后可自发形成捕食结构;加虫30min后即有虫体被捕捉;捕捉后第4小时,菌丝侵入秀丽隐杆线虫导致死亡,而捻转血矛线虫L3被菌丝侵入致死亡则需要20~24h;捕捉后第24小时,整个秀丽隐杆线虫被菌丝侵占并完全消化;而捻转血矛线虫L3则需要36h被菌丝完全侵占,48h被完全消化。以上结果为进一步探讨捕食线虫性真菌的杀虫机理提供科学依据。     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１～３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检法的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ作为牛、羊捻转血矛线虫病检测手段是可行的     

保定地区不同动物源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因flor的同源性分析

为了解不同动物间大肠杆菌的耐药性,对分离的23株鸡源、14株猪源和8株牛源大肠杆菌进行了耐药性测定,并对其氟苯尼考耐药基因flor进行了同源性分析。结果显示,同种动物之间、猪源与牛源flor基因的相似性为100%,鸡源与猪源、牛源flor基因的相似性为99.8%。与GenBank中已报道的flor基因(登录号AF231986)进行比对,鸡源flor基因在开放阅读框的第439,479,683位出现点突变,猪源、牛源flor基因在开放阅读框的第439,683,1100位出现点突变。由flor基因编码的氨基酸序列也发生了相应的改变。     

复方"连黄"对金黄色葡萄球菌耐药基因femA的影响

采用聚合酶链式反应(PCR)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因femA;通过耐药基因失活试验,研究了中药复方"连黄"对金黄色葡萄球菌耐药基因femA的影响,探讨了中药"连黄"降低金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类药物耐药性的作用机理。结果显示,中药"连黄"作用前后金黄色葡萄球菌的耐药基因femA在23~72碱基区发生较大改变,对应的氨基酸序列也发生改变,从而导致femA基因失活。     

柔嫩艾美球虫抗药株第二代裂殖子的双向电泳图谱比较

对实验室诱导的柔嫩艾美球虫马杜拉霉素、地克珠利抗药株及其同母源敏感株第二代裂殖子的蛋白质进行双向电泳 ,构建了稳定的双向电泳图谱。经Imagemaster 2DElite软件分析 ,敏感株和抗药株平均可分离 90 0个点 ;以敏感株平均胶作为参考胶 ,抗药株平均胶与之比较 ,得到差异蛋白质斑点 ,其中地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株各有 4个表达差异点。这些差异表达的蛋白质可能参与了球虫抗药性产生的过程。     

天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的多态性分析

为分析天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的遗传多态性及变异特征,采用PCR-SSCP方法检测了698头天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的多态性,对群体内各等位基因进行了克隆、测序。结果显示,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子有AA、AB和BB 3种基因型,其基因型频率分别为0.892 6、0.106 0和0.001 4,由A和B 2个等位基因控制。序列分析表明,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子在41bp处发生了A→G突变,但并未导致编码氨基酸序列发生改变。统计结果表明,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子呈低度多态。     

广东省猪源葡萄球菌耐药性分析及多重耐药基因cfr的流行现状

为了解2013-2017年间广东省猪源葡萄球菌的耐药情况及多重耐药基因cfr的流行现状,采集生猪养殖场和交易市场猪鼻腔拭子分离葡萄球菌,采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药物的敏感性,并用PCR检测mecA和cfr基因的携带情况。结果显示,在采集的4099份样品中分离到葡萄球菌1485株,其中金黄色葡萄球菌173株。猪源葡萄球菌对红霉素、四环素、泰妙菌素、克林霉素、沃尼妙林和氟苯尼考耐药严重,耐药率分别为91.0%、90.2%、87.7%、84.6%、84.6%及82.0%,对利福平和利奈唑胺相对敏感,未发现万古霉素耐药菌株;庆大霉素、四环素、红霉素和环丙沙星的耐药率呈现逐年上升的趋势。在1485株葡萄球菌中,mecA和cfr的检出率分别为39.9%和12.3%。cfr阳性菌株常携带多种耐药基因,cfr基因的遗传背景也呈现多样化。结果表明,广东省猪源葡萄球菌的耐药情况严重,cfr的检出率高,应加强养殖业中抗菌药物的规范和合理使用,减缓耐药性的产生和传播。     

鸡传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的序列分析

采用RTPCR方法扩增了12株鸡传染性支气管炎病毒中国分离株的全长S1基因,并进行了序列分析。通过与GenBank中登录的其他IBV参考毒株S1基因序列比较,进行了系统进化分析。结果表明,12株分离毒株属于同一个进化群的2个不同进化亚群。其中11株分离株与国内一些分离株亲缘关系最近,属于同一进化亚群,而广西分离株GX041则与欧洲毒株4/91亲缘关系较近,属于另一亚群。这些结果说明,中国各地的流行毒株变异较大,实际免疫中要根据流行毒株的特性选择合适的疫苗株来进行。     

广西猪瘟流行毒株E2基因的序列分析

对从广西南宁和柳州分离的 2株猪瘟病毒E2基因进行了测序。应用DNAstar序列分析软件对所测 2个毒株GXNN、GXLZ的E2基因序列与猪瘟兔化弱毒株和石门 (Shimen)株进行了比较分析。结果显示 ,GXNN、GXLZ株与猪瘟兔化弱毒株核苷酸序列的同源性分别为 82 .1%和 82 .6 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 87.9%和 88.7% ;GXNN、GXLZ株与Shimen株核苷酸序列的同源性分别为 83.6 %和 84 .0 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 89.3%和 90 .1%。GXNN、GXLZ株与猪瘟兔化弱毒株和Shimen株的核苷酸序列和氨基酸序列都有明显差异。