华蟾素注射液对胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化的影响

目的 探究华蟾素(cinobufagin, CBG)注射液对人胃癌细胞MGC803增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 CCK-8检测CBG注射液对MGC-803存活率的影响;倒置显微镜下观察CBG注射液对MGC-803形态的影响;采用细胞划痕实验和Transwell小室检测CBG注射液对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测人胃癌细胞MGC-803中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平。结果 华蟾素注射液能显著抑制MGC-803细胞的增殖、迁移与侵袭(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blot检测结果显示,CBG注射液能显著上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),显著下调N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平(P<0.05)。结论 华蟾素注射液可以抑制胃癌细胞MGC-803的增殖、迁移侵袭及EMT。     

重楼总皂苷对人胃癌细胞SGC-7901 增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨重楼总皂苷（Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法 取对数生长期的SGC-7901细胞,用不同浓度RPTS(2.5、5、10、20、40 μg/mL)处理24 h,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法观察RPTS对细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验、Matrigel transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力。结果 MTT法检测表明RPTS（10、20、40 μg/mL）可明显抑制SGC-7901细胞的增殖能力（P＜0.05）;细胞划痕实验、Matrigel transwell小室侵袭实验结果表明RPTS(2.5、5、10 μg/mL)处理过的SGC-7901细胞,迁移能力和侵袭能力降低（P＜0.05）。结论 RPTS具有抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的能力。     

芪玉三龙方通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化抑制肺癌细胞侵袭和转移

目的 从细胞水平探讨芪玉三龙方是否通过Wnt5a/β-catenin信号通路抑制上皮—间充质细胞转化,抑制肺癌转移。方法 将重组慢病毒转染小鼠肺癌细胞建立稳定过表达Wnt5a的细胞系,同时构建Wnt5a干扰和空载细胞株。qRT-PCR法检测Wnt5a、β-catenin mRNA的表达水平。CCK8、EdU实验检测肺癌细胞的增殖活性,Transwell实验检测肺癌细胞的迁移和侵袭能力。Western blot法检测Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Snail蛋白表达水平。结果 与对照组比较,芪玉三龙方组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达水平下降（P<0.05）,细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著降低（P<0.05）。Wnt5a过表达组中Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平增加（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平下降（P<0.05）,细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著增强（P<0.05）;Wnt5a干扰组Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）,细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著下降（P<0.05）,明显抑制EMT的发生。芪玉三龙方处理后,Wnt5a过表达组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）,细胞增殖活性、侵袭和迁移能力得到抑制。结论 芪玉三龙方可能通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化,抑制肺癌细胞增殖和转移。     

千金藤碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长和转移以及对血红素加氧酶-1和表皮生长因子受体基因表达的影响

目的 探讨千金藤碱抑制肺癌细胞A549生长、迁移和侵袭的作用以及对血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因表达的影响。方法 甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测千金藤碱对肺癌细胞的细胞毒性,观察其对A549细胞生长的抑制作用,并用倒置显微镜观察千金藤碱处理不同时间内A549细胞的形态变化;Transwell和侵袭实验检测A549细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot法分别检测A549细胞内HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 千金藤碱能够抑制肺癌细胞A549细胞的生长,细胞活力随着作用浓度的增加和时间的延长明显降低;10 g/ml千金藤碱处理24 h后,A549细胞发生体积变小、皱缩变圆和染色体固缩等现象;与对照组相比,千金藤碱（>5.0 g/ml）可使穿过隔膜和穿过基质胶的A549细胞数明显减少（P<0.05）。10.0 g/ml千金藤碱明显降低A549细胞中HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 千金藤碱可抑制肺癌细胞的增殖,降低A549细胞的迁移和侵袭能力,下调A549细胞的HO-1和EGFR基因的表达水平,且作用效果具有一定的时间和浓度依赖性。     

化痰通瘀解毒方提取物对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响

目的 观察化痰通瘀解毒方提取物对人胃癌细胞株SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法 10、20、40 μg/mL化痰通瘀解毒方提取物分别干预人胃癌细胞SGC-7901 24 h后，采用Transwell小室法检测人胃癌细胞SGC-7901的侵袭、迁移能力，分别采用酶联免疫吸附试验和Western blot法检测SGC-7901细胞中基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9, MMP-9）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。结果 4组SGC-7901的侵袭细胞数和迁移细胞数以及E-cadherin和MMP-9表达水平比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05），呈现明显的剂量依赖性，以高剂量化痰解毒方提取物的效应最明显。结论 化痰解毒方可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力，其作用机制可能与上调E-cadherin表达，下调MMP-9的表达有关。     

复方守宫散联合放疗化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌90例

目的 观察复方守宫散联合放化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的近期疗效及耐受性.方法 对90例局部晚期NSCLC患者实施常规放疗,并同步行吉西他滨、顺铂化疗及口服复方守宫散治疗,中位随访期为18(5～27)个月.结果 NSCLC缓解率为15.6%,部分缓解率为70.0%,有效率为85.6%,稳定率和进展率分别为5.6%和8.9%;胸痛、血痰、气短和上腔静脉综合征改善率分别为89.7%、92.1%、89.5%和89.6%;因放化疗引起的放射性肺炎、放射性食管炎和白细胞减少发生率分别为14.4%、18.9%、32.1%;卡氏评分增高＞10分占78%,增高或减少＜10分者占17%,减少＞10分占5%.结论 复方守宫散联合放化疗治疗局部晚期NSCLC能明显缓解患者的近期临床症状,提高生活质量,并且对机体产生的不良反应小.     

复方守宫散对TP方案治疗的晚期非小细胞肺癌患者血液学毒性及免疫功能的影响

目的 观察复方守宫散对晚期非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）化疗患者血液毒性及免疫功能的影响。方法 将62例晚期肺癌患者随机分为治疗组和对照组,每组31例,对照组予以TP（紫杉醇+顺铂）方案化疗,治疗组予以复方守宫散联合TP方案治疗。观察两组患者近期疗效、血液毒性,比较两组治疗前后免疫功能及生存质量。结果 两组患者WBC、HGB减少分级比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,PLT分级比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与治疗前比较,TP方案治疗后对照组CD3+、CD4+、CD8+ T细胞绝对值及CD4+/CD8+比值均显著下降（P＜0.05）,治疗组CD3+、CD4+ T细胞绝对值均显著下降（P＜0.05）,CD8+ T细胞绝对值及CD4+/CD8+比值变化不明显（P＞0.05）;治疗组治疗前后CD3+、CD4+、CD8+ T细胞绝对值及CD4+/CD8+比值的差值均明显小于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组近期疗效分布比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。两组患者生存质量分布比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 复方守宫散可以改善晚期肺癌患者免疫功能,减轻化疗的血液学毒性及提高生存质量。     

复方守宫散辅助治疗晚期结直肠恶性肿瘤的疗效观察

目的 基于倾向性评分匹配法探讨复方守宫散辅助治疗晚期结直肠恶性肿瘤的疗效。方法 采用倾向性评分匹配法,将匹配成功的70例患者分为对照组（化学治疗）和观察组（复方守宫散联合化学治疗）,每组35例;比较两组患者瘤体客观疗效［客观缓解率（objective response rate,ORR）,疾病控制率（disease control rate,DCR）］、生活质量评分、免疫功能指标、安全性指标,并对生存期进行分析。结果 观察组ORR、DCR优于对照组（P＜0.05）;观察组患者治疗后功能维度（躯体功能、角色功能、情绪功能、认知功能、社会功能）,症状领域（疲劳、疼痛、恶心呕吐）评分改善程度显著优于对照组（P＜0.05）;观察组患者血清CD4+T细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞水平,CD4+/CD8+均显著高于对照组（P＜0.05）;治疗组患者总不良反应发生率显著低于对照组（P＜0.05）;观察组的中位无进展生存期显著高于对照组（P＜0.05）,中位总生存期高于对照组（P＞0.05）。结论 相较于单纯化学治疗,复方守宫散与化学治疗联合应用能显著提高疗效,增强机体免疫力,改善晚期结直肠癌患者生活质量,降低化学治疗的毒性及不良反应,在一定程度上延长患者生存时间。     

华蟾素注射液抑制小鼠黑色素瘤的作用及机制研究

摘要：目的：体内实验探讨华蟾素注射液对小鼠黑色素瘤的抑制作用及其机制。方法：建立黑色素瘤B16F10 C57BL/6小鼠移植瘤模型，将造模成功的40只黑色素瘤移植瘤小鼠按随机分组原则分为四组：对照组（腹腔注射0.15 mL生理盐水）、华蟾素注射液低剂量组（腹腔注射0.15 mL，156 mg/mL）、中剂量组（腹腔注射0.15 mL，312 mg/mL）和高剂量组（腹腔注射0.15 mL，468 mg/mL）；H&E染色后观察黑色素瘤移植瘤的病理变化；免疫组织化学法观察移植瘤组织MMP-2、vimentin、MMP-9、 E-cadherin、N-cadherin、和Ki-67蛋白的表达。结果：与对照组比较，华蟾素注射液高、中、低剂量组小鼠移植瘤质量均明显降低，而小鼠体重变化无明显差异；H&E染色结果表明华蟾素注射液高、中、低剂量组黑色素瘤细胞形成的巢均减少、细胞密度均降低以及细胞体积均增大；免疫组化结果表明华蟾素注射液中、高剂量组下调了Ki-67蛋白的表达（均P<0.01）；华蟾素注射液中、高剂量组可上调黑色素瘤移植瘤中E-cadherin蛋白的表达（P<0.05）；华蟾素注射液低、中、高剂量组可显著降低N-cadherin、MMP-9蛋白的表达（均P<0.05）；华蟾素注射液中、高剂量组可显著下调MMP-2和vimentin蛋白的表达（均P<0.05）。结论：华蟾素注射液在体内具有抑制小鼠黑色素瘤的作用，其作用机制与抑制黑色素瘤EMT的发生有关。     

雄黄主要成分As2S2通过“ANP32A-INHAT-H3乙酰化”轴抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的表观遗传调控机制

目的 探究雄黄主要成分二硫化二砷（As2S2）对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）的作用及表观遗传调控机制。方法 〖JP2〗采用CCK-8、平板克隆形成和细胞划痕实验探究As2S2对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及TNBC细胞增殖和迁移的影响;4D-label free定量蛋白质组学分析挖掘As2S2抗TNBC的潜在干预靶点酸性核磷蛋白家族成员32A（acidic nuclear phosphoprotein family member 32A,ANP32A）;慢病毒感染法构建ANP32A过表达敲低细胞株,探究潜在靶点ANP32A对As2S2抗TNBC作用的影响;蛋白质免疫共沉淀和Western blot实验探究As2S2是否通过ANP32A调控TNBC细胞H3乙酰化。结果 As2S2对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A影响甚微,但显著抑制TNBC细胞增殖和迁移,且呈剂量依赖性;4D-lable free定量蛋白质组学分析结果显示,促癌因子ANP32A被As2S2显著下调,且ANP32A表达影响As2S2在TNBC中的抗增殖和迁移效果。As2S2能下调ANP32A的蛋白水平,抑制乙酰转移酶抑制剂复合物亚基的招募,增加H3乙酰化水平。结论 As2S2通过下调ANP32A蛋白调控TNBC细胞中H3乙酰化,抑制TNBC细胞增殖和迁移。     

超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱快速分析复方守宫散化学成分及血中移行成分

目的 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatogra-phy/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对复方守宫散中化学成分及其血中移行成分进行定性分析,为该制剂的...     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial,HUVECs)迁移中的作用.方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕...     

复方守宫散中铅、镉、铜含量分析

目的：测定抗肿瘤药物复方守宫散中微量金属元素铅（Pb）、镉（Cd）、铜（Cu）的含量.方法：采用湿法消化,火焰原子吸收分光光度法测定.结果：复方守宫散中含金属元素Pb、Cd、Cu,含量高低依次为：Pb〉Cu〉Cd.结论：复方守宫散每日服用量中Pb、Cd、Cu含量均远低于人体正常摄入量,属安全用药范围.     

鹅掌疯醋剂对抗白色念珠菌及其早期生物膜的体外实验研究

目的 分析鹅掌疯醋剂对白色念珠菌及早期生物膜的作用及其机制。方法 通过微量稀释法测定鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC),通过酶标仪测得其对菌体渗透性的影响,使用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其对菌体超微结构的影响,并且通过CCK-8法和Spider平板法测定其对白色念珠菌生物被膜形成早期黏附性和芽管形成的影响。结果 鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的MIC为药物原浓度的1/16,经过鹅掌疯醋剂处理后白色念珠菌细胞外紫外物质吸收增加,念珠菌超微结构被破坏,早期生物膜的黏附率和芽管形成受到抑制。结论 鹅掌疯醋剂有一定的抗真菌及抑制早期生物膜能力,其作用机制可能与改变菌体渗透性,破坏菌体结构,抑制早期生物膜的黏附率和芽管形成有关。