实验性早期心肌缺血补体C5的免疫组织化学研究

建立大鼠急性心肌缺血模型。应用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对急性心肌缺血早期不同缺血时间心肌细胞内补体C5的变化进行研究。结果发现 :C5在心肌缺血 15min即可出现阳性反应 ,并随缺血时间的延长 ,其反应面积逐步增大。心肌细胞内C5阳性是早期心肌缺血的敏感指标 ,免疫组织化学染色法检测心肌细胞内C5的变化可望成为早期心肌缺血死后诊断的一种有意义的手段     

大鼠心脏型脂肪酸结合蛋白在早期心肌缺血时的含量变化

目的 观察心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量变化。方法 按Selye法结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型,用免疫组织化学和酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,观察心肌缺血后不同时间H-FABP在心肌细胞和血浆中含量的变化规律。结果 心肌缺血15min时,缺血区心肌即可出现H-FABP缺失,随着缺血时间的延长,缺失的范围扩大,程度加重,与对照组相比差异有显著性;心肌缺血15min时,血浆H-FABP含量在心肌缺血15min时即明显升高,与对照组相比有显著性差异。随着缺血时间的延长,血浆含量逐渐上升,4h时达到高峰,以后逐渐下降。结论 心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的H-FABP含量变化呈现一定规律性,可望成为诊断早期心肌缺血所致的心源性猝死的敏感指标。     

心肌氨基酸代谢与早期急性心肌缺血的关系

作者结扎家兔左冠状动脉前降支,对急性心肌缺血时蛋白质的降解和氨基酸代谢进行了研究。用离子交换色谱法测定缺血心肌组织游离氨基酸(酸性、中性、碱性)以及氨含量,发现缺血时大多数游离氨基酸含量上升,丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和组氨酸含量在缺血15min即有明显增加,但苏氨酸、谷氨酸和游离氨基酸总量却随缺血时间的延长而逐渐下降。丝氨酸含量在缺血早期上升,缺血60～480min,含量无明显变化。缺血120min以后,甘氨酸和精氨酸含量逐渐下降。组织氨含量在缺血早期上升,晚期下降。游离氨基酸总量、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸以及组织氨含量的降低是缺血心肌氨基酸代谢的特征性变化。作者认为:测定缺血心肌游离氨基酸及组织氨含量有助于急性心肌缺血的早期诊断。     

大鼠心肌缺血后SERCA和PLB基因表达变化的观察

目的观察大鼠心肌缺血后，肌浆网钙调节蛋白SERCA和PLB基因表达水平变化，探讨其在早期心肌缺血诊断上的应用价值。方法25只大鼠随机分为正常对照组、缺血5、10、15min及缺血性猝死组，建立大鼠急性心肌缺血模型；利用荧光标记逆转录聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测不同时间大鼠心肌缺血后，SERCA和PLB的基因表达变化，并与缺血性猝死组相比较。结果心肌缺血5min即可检测到SERCA和PLBmRNA表达相对下降，且随着缺血时间的延长，呈逐渐下降趋势，心肌缺血组与缺血性猝死组表达存在显著性差异。结论大鼠心肌缺血后SERCA和PLB基因表达变化呈一定规律性。对早期心肌缺血的诊断具有法医学意义。     

大鼠急性心肌缺血zif/268蛋白表达及其意义

目的 探讨急性心肌缺血早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因蛋白zif/268的表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供新指标。方法 建立心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血组。采用免疫组化SABC法研究心肌细胞核蛋白zif/268的累积情况。结果 缺血 60min后,缺血区大鼠心肌细胞有部分心肌细胞核呈弱阳性着色,以后随缺血时间延长核阳性增强。正常和缺血30min组及未缺血区心肌细胞核未见有阳性反应。HE染色无明显病理改变。结论 免疫组化染色法检测心肌细胞核zif/268的表达对急性心肌缺血的死后诊断是一种有价值有意义的手段。     

兔急性心肌缺血脱氢酶组织化学和血清酶学变化的综合研究

为了深入研究急性心肌缺血的脱氢酶变化,作者通过结扎兔冠状动脉左前降枝的动物模型进行了实验,观察了结扎后0.25,0.5、0.1、1、1.5、2、4、6、12、24、36、72小时的脱氢酶变化。结果表明;1)急性心肌缺血6小时血清乳酸脱氢酶活性显著升高,其缺血前后差别是734±153.66nmol/L(差数平均值±标准差,P<0.05);2)结扎冠状动脉0.5小时后,大体标本组织化学染色示心肌梗塞;3)结扎冠状动脉1小时后微观酶组织化学示LDH和MDH活性下降,SDH在冠状动脉被扎2小时后亦呈同样变化。LDH及MDH在心肌缺血时的改变比SDH敏感;4)心肌缺血时其局部酶组织化学早于血清酶改变。     

心肌缺血再灌流损伤HSP70 mRNA原位杂交研究

目的观察家兔早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白70 mRNA的表达变化,为心性猝死的法医病理学诊断寻找新的方法.方法建立家兔心肌缺血再灌流损伤模型,通过原位杂交技术观察研究.结果心肌缺血15min再灌流30min后,缺血区HSP70 mRNA阳性反应增强,阳性颗粒均匀散布于心肌全层,随着缺血时间的延长,阳性反应细胞数目逐渐增多,染色加深.结论HSP70 mRNA原位杂交检测可望为早期心肌缺血再灌流损伤的死后诊断提供新方法.     

急性心肌缺血早期细胞膜糖蛋白表达的研究

目的 探测急性心肌缺血早期细胞膜糖蛋白 (凝集素受体 )表达特点。方法 应用免疫组化法（ S－ P法）对 32只 SD大鼠急性心肌缺血早期不同时间心肌细胞膜糖蛋白用 6种凝集素进行探测。结果 心肌缺血 15min时,心肌局部可出现花生凝集素（ PNA）染色阳性,并且随着缺血时间的延长其阳性表达面积明显增加。缺血 2h其表达水平达到高峰 ,呈弥漫性染色阳性,明显高于对照组, 2h后,心肌缺血区域 PNA受体的表达开始出现下降趋势。其它凝集素染色较为分散,尚待进一步研究。结论 心肌缺血,心肌细胞膜 呈现 D－半乳糖链改变。     

兔急性心肌缺血脱氢酶电镜—细胞化学变化的动态观察

为了研究急性心肌缺血脱氢酶变化的规律性，本文应用电镜酶细胞化学技术，通过结扎５０只家兔冠状动脉左前降支，观察心肌缺血后０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、１２、２４、３６、７２小时ＳＤＨ和ＬＤＨ的变化。结果显示：心肌缺血０．５小时后，ＳＤＨ和ＬＤＨ活性开始下降。同时伴有致密体的形成和超微结构的改变。随着缺血时间的延长，酶活性下降更加明显，最后消失。     

大鼠急性心肌缺血再灌流损伤c-fos mRNA原位杂交实验研究

目的 探讨急性心肌缺血和/或再灌流早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因c-fos mRNA表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供依据。方法 复制心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血及缺血再灌流组。采用原位杂交方法结合图像分析与统计学处理方法研究心肌细胞内c-fos mRNA表达情况。结果 缺血10min再灌流30min,部分大鼠再灌流区心肌细胞胞浆内c-fos mRNA弱阳性反应,散在分布。缺血60min再灌流30min时达高峰,120min开始减弱。正常和单纯缺血组中缺血少于60min组未见有阳性表达。HE染色无明显病理改变。结论 原位杂交法检测c-fos mRNA方法灵敏特异,有望成为一项急性心肌缺血/再灌流早期损伤的诊断指标。     

早期心肌缺血猝死心肌NF-κB p65的表达研究

目的探讨核因子NF-κBp65（NF-κB p65）在心肌早期缺血猝死后诊断中的法医学价值。方法将收集的案例心肌蜡块分为3组：正常对照组（3例）、早期心肌缺血组（14例）、心肌梗死组（8例）,采用免疫组织化学技术（SP法）,观察猝死心肌内NF-κBp65的表达情况,并对其结果进行半定量分析。结果早期心肌缺血组和心肌梗死组的心肌细胞胞浆内及细胞核内均出现NF-κBp65的表达,且早期心肌缺血组与心肌梗死组表达强度无差异。结论NF-κBp65可以作为早期心肌缺血猝死的一个辅助诊断指标。     

垂体后叶素致冠状动脉痉挛症的实验病理学研究

作者通过大鼠舌下静脉注射垂体后叶素致冠状动脉痉挛,运用组织学、酶组织化学及电镜技术研究冠状动脉痉挛症引起心肌急性缺血的形态学变化特点,同时对大鼠心肌自溶性变化与上述结果进行了分析比较,认为心肌纤维磷钨酸苏木素(PTAH)染色出现不规则横带且伴有心肌间质小血管壁腺苷三磷酸酶(ATPase)活性下降,有助于冠状动脉痉挛症引起心肌缺血的诊断。     

Oxidative enzyme activities and respective histochemical reactions in ischemic rat myocardium

To evaluate the diagnostic role of histochemically demonstrated aerobic dehydrogenases in ischemic myocardial injury NADH-diaphorase, succinate dehydrogenase (SDH), beta-hydroxybutyrate dehydrogenase (HBDH) and malate dehydrogenase (MDH) were demonstrated histochemically and the corresponding enzyme activities were measured biochemically in isolated perfused rats hearts after global ischemia from 0 to 12 h. The present data show that the enzyme-histochemical methods when used properly are more sensitive indicators of early ischemic injury than classical histological staining procedures. From the enzymes tested here the histochemical demonstration of HBDH turned out to be best suited for use when suspecting ischemic myocardial injury at autopsy.     

Cytoskeleton immunohistochemical study of early ischemic myocardium

Previous studies on cytoskeletal changes of in vitro and in vivo animal models of ischemic myocardium have suggested the possibility of using alterations in cytoskeleton proteins as an early marker for the post-mortem diagnosis of myocardial ischemia in cases of sudden death due to coronary artery disease (CAD). In the present study, using the technique of ABC-immunohistochemistry, we examine the changes of three cytoskeletal proteins: vinculin, desmin and α-actinin in human myocardial samples taken from 14 cases of CAD sudden death and 13 cases of non-CAD death. Results of these examinations are compared with immunohistochemical changes of myoglobin and histochemical staining of hematoxylin and eosin and phosphotungstic acid, and Masson trichrome. Patchy and extensive loss of the three cytoskeletal proteins was demonstrated in the myocardium of victims who died 1 h or later following the onset of symptoms of ischemic myocardium. The pattern of cytoskeleton change is equivocal in the cases of CAD who died less than 1 h after the onset of symptoms and of the cases of non-CAD. In these cases, no significant histological change was observed. With less non-specific background changes and stronger positive staining, immunohistochemical staining of the three cytoskeletal proteins is more reliable than myoglobin, which has attracted the attention of many pathologists searching for anatomic evidence of ischemic myocardium in coronary artery disease.     

心肌早期缺血再灌流损伤免疫组化观察

探询原癌基因c fos蛋白产物在心肌早期缺血再灌流损伤中的病理形态学改变。用SD大白鼠建立心肌早期缺血再灌流损伤模型 ,3 2只大鼠分为正常、缺血对照组与缺血再灌流组。心脏标本经HE染色及免疫组化观察。结果发现 :在缺血 3 0min再灌流 3 0min后 ,再灌流区心肌细胞有部分细胞核 ( 3 7 76%± 9 66% )呈弱阳性着色 ,而在缺血 60min再灌流 3 0min后 ,心肌细胞核 ( 4 0 3 4 %± 3 3 2 % )呈棕褐色阳性染色 ,但正常和单纯缺血组心肌细胞核未见有阳性反应 ;HE染色无明显改变。提示c fos蛋白免疫组化对显示实验性心肌早期缺血再灌流损伤有重要的价值     

早期心肌缺血心脏型脂肪酸结合蛋白的免疫组织化学观察

目的探讨心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)对早期心肌缺血诊断的灵敏性。方法应用免疫组织化学技术对正常心脏、心肌梗死及其它怀疑有心肌缺血的心肌细胞内H-FABP和肌红蛋白(Mb)的变化进行研究。结果正常对照组均无明显的缺失,心肌梗死组均出现明显的缺失,9例可疑心肌缺血病例中有3例出现H-FABP明显的缺失,3例出现可疑缺失,有4例出现Mb明显的缺失,2例出现可疑缺失,说明H-FABP可用于诊断早期心肌缺血。结论H-FABP用于诊断早期心肌缺血具有较好的灵敏性。     

苏木素—碱性复红—苦味酸染色法对诊断早期心肌缺血的意义

本文应用苏木素-碱性复红-苦味酸染色法(HBFP)对家兔实验性心肌缺血的早期改变及急死案例的尸检材料进行了研究,实验性心肌缺血材料均作电镜观察。结果表明,冠状动脉结扎后15min,缺血心肌显复红色,呈散在分布,与正常心肌对比明显。随缺血时间延长,显复红色之心肌纤维数目增多,缺血区扩大。HBFP 染色法不受常规组织处理及死后自溶的影响,可用于临床病理及法医病理诊断。     

苏木素碱性品红苦味酸（HBFP）染色法对诊断心肌早期缺血的评价

法医病理学检验中,常需一种诊断心肌早期缺血性损害的准确方法,以便解决疑为心肌早期缺血,迅速死亡的案例.这些案例往往因为HE染色病变不典型,难以作出急性心肌缺血的诊断.为此,我们采用Lie等介绍的苏木素碱性苦味酸(HBFP)染色法,对26例法医尸体解剖的心肌组织切片进行研究,并同HE染色进行了对比观察.期望在诊断早期心肌缺血方面作出一恰当的评价.