大鼠死后肌肉总腺苷酸及腺苷酸能荷的时序性变化

目的测定大鼠死后不同时间双后肢肌肉嘌呤腺苷酸[三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)]含量,计算总腺苷酸(total adenine nucleotide,TAN)含量和腺苷酸能荷(adenylic-acid energy charge,AEC)的变化值并探究其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法健康大鼠颈部脱臼处死后,20℃恒温保存,分别于死后0、24、48、72、96、120、144、168 h提取大鼠双后肢肌肉,利用反相高效液相色谱法测定嘌呤腺苷酸含量,计算双后肢肌肉组织的TAN和AEC,并分别建立其与PMI关系的相关回归方程。结果大鼠死亡168h内,ATP、ADP变化趋势不同,AMP的含量持续增加;TAN值随PMI的延长而逐渐增加,而AEC在死后168h内,整体呈现下降趋势。AEC随PMI变化规律明显,决定系数较高(R2为0.903),曲线拟合关系较好;ATP、ADP、AMP、TAN与PMI拟合关系不佳(R2为0.198~0.754)。结论AEC的死后变化规律为法医学PMI推断提供了新的研究思路。     

大鼠死后心、肝、肾巯基含量的时序性变化研究

目的 测定大鼠死后不同时间心、肝、肾3种组织内总巯基(TSH)、非蛋白质巯基(NPSH)、蛋白质巯基(PSH)含量并探究其与死亡时间(Postmortem Interval,PMI)的关系。方法 健康大鼠颈部脱臼处死后，20℃恒温保存，分别于死后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h提取大鼠心、肝、肾。利用吸光光度法，测定大鼠死后不同PMI 3种组织内不同类型巯基含量，分别建立其与PMI的相关回归方程。结果 大鼠死后168 h内，3种组织NPSH含量变化规律均不明显；心脏TSH与PSH含量随PMI无明显变化规律，而肝和肾TSH与PSH含量在24 h内升高，随后持续下降。肝、肾TSH和PSH含量与PMI的关系用二次方程拟合较好，其中肝TSH的相关系数最高(R²=0.834)，肾TSH和PSH以及肝PSH的相关系数较低(R²=0.768～0.825)。肝、肾TSH和PSH含量与PMI多元线性拟合关系较好(R²=0.862)。结论 肝组织内TSH含量与PMI相关性较好，可用于PMI推...     

大鼠死后肌肉组织电阻抗幅值和相位角变化推断死后间隔时间的研究

目的研究大鼠死后皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角的变化规律，探讨生物电阻抗技术推断中晚期PMI的价值。方法利用四电极阻抗测量系统测量20只大鼠死后4种不同环境温度皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角，并用Excel及MATLAB对所得的离散阻抗数据进行处理。结果（1）所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗幅值都呈现出相似的先升后降的变化趋势，且中、长期的下降部分有一定的线性变化趋势。电阻抗下降段斜率与温度的变化呈正相关关系，且在不同环境温度时，下降段斜率与PMI的相关性都较高，均大于0．97。因此，有可能利用这一线性关系推断中、晚期PMI。（2）所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗相位角没有相似的变化规律，其变化杂乱无章。结论如果找出电阻抗幅值下降段起点、峰值、斜率这3者之间的确定关系，就可利用下降段的线性关系为推断中晚期PMI提供一定的判断依据。     

尸体心血红细胞ATP降解规律与早期死亡时间的相关性

目的观察早期死亡时间(PMI)与血液红细胞ATP含量的相关性。方法选择具有确切死亡时间的尸体30例,在死亡后6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h分别于第4肋间进行心脏穿刺取血,利用生物发光法检测血液样本红细胞ATP含量(μmol/g Hb),并观察红细胞ATP含量变化与死亡时间的关系。结果尸体心血红细胞ATP含量在死亡后1~24h之内呈现非匀速下降趋势,与死亡时间的Pearson相关系数为-0.971(P=0.000);尸体心血红细胞ATP含量与死亡时间的回归方程及R2值为:Y=-0.096X+2.872(X为死亡时间),R2=0.936,P=0.000。结论尸体心血红细胞ATP含量在死后1~24h之内的变化与死亡时间具有相关关系,可以作为法医学死亡时间推断的生物学指标。     

大鼠肌肉中微生物ATP含量及其在死亡时间推断中的应用

目的 研究死后大鼠肌肉组织中微生物ATP浓度变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法取健康SD大鼠处死,死后不同时间取肌肉组织,用生物发光法检测微生物ATP浓度,对所得数据进行统计学处理.结果 死后肌肉组织中微生物ATP含量随时间延长而增加,于7d达到高峰,随后逐渐降低,并于10d再次略微升高.PMI在0～9d内与肌肉中微生物ATP含量变化拟合最优.以PMI为自变量的三次多项式回归方程为:y=0.020x3-0.166x2-0.666x+13.412(r2=0.989,P<0.01).结论 死后肌肉组织中微生物ATP含量变化可用于PMI推测;本检测方法所需检材量小,不受组织自身降解的影响.     

大鼠死后不同组织电导率与死亡时间关系的研究

目的测定不同死亡时间大鼠脑、肺、肝和骨骼肌电导率,研究不同组织器官EC与PMI的关系。方法 SD大鼠处死后,保存于25℃恒温条件下,于死后即刻(0d)、1d、2d、3d、4d、5d、6d和7d提取大鼠脑、肺、肝和骨骼肌,四种组织器官与去离子水按照一定比例制成浸渍液,测定各组织器官浸渍液EC值;分析其EC值与PMI的关系,建立与PMI关系的回归方程;比较大鼠死后四种组织器官EC变化规律,探讨不同组织器官腐败进程。结果死后1d内骨骼肌与脑组织EC无显著变化,2~7d快速增加;而肝、肺EC值在1d内已开始增加,且2~7d内均快速上涨。四种组织器官EC与PMI的关系用三次方程拟合较好,其中肝的相关系数最高,R~2=0.96,且四种组织器官的EC值在不同的PMI区段之间呈现出不同的增长规律。结论大鼠脑、肺、肝和骨骼肌EC与PMI相关性均较好,测定尸体组织器官EC有望成为法医实践中PMI推断的有效方法。     

大鼠死后肌动蛋白降解与死亡时间的相关性

目的观察大鼠死后不同时间心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌肌动蛋白（actin）的降解规律,为晚期死亡时间（postmortem interval,PMI）的推断寻找客观指标。方法28只SD大鼠随机分为7组,经机械性窒息致死后．分别置于20℃恒温箱内,于0、24、48、72、96、120和168h后剖取以上器官,应用免疫印迹技术检测各组织内actin的含量,SPSS11．5软件对所得数据进行方差分析。结果大鼠死后上述各器官actin含量均随PMI的延长而逐渐下降,与PMI相关,决定系数（R2）均在0．75以上。但actin在上述各器官内的降解速度有显著差异（P〈O．05）,在脑组织中降解速度最快,其余依次为肺、脾、肝、肾、心肌和骨骼肌。结论尽管大鼠死后心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌actin的降解规律具有组织差异性,但是actin在上述组织中的含量变化与PMI相关．有助于较晚期PMI的推断。     

不同温度下大鼠脑组织RNA降解与早期PMI的相关性

目的探讨大鼠脑组织8种RNA指标,在不同温度下的表达水平与早期死亡时间(PMI)的相关性。方法将222只SD大鼠随机分为对照组(死后0 h)和4个实验组,实验组断颈处死后分别置于5℃、15℃、25℃和35℃的环境中,于死后1~24 h内9个时间点提取脑组织RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测8种RNA指标(β-actin、GAPDH、RPS29、18S rRNA、5S rRNA、U6 snRNA、miRNA-9及mi RNA-125b)的表达水平,ge Norm软件选取合适内参,SPSS软件对内参标准化RNA指标进行回归分析,R软件构建推断PMI的数学模型,另选6只已知PMI的SD大鼠予以验证。结果 5S rRNA、miR-9和mi R-125b表达稳定,可作为内参指标。β-actin和GAPDH具有良好的时序性降解规律,在24 h内随PMI延长不断降解。R软件拟合得ΔCt值随PMI和温度变化的数学模型可用以推断PMI。运用β-actin和GAPDH验证模型的平均误差率分别为14.1%和22.2%。结论β-actin和GAPDH表达水平与PMI和环境温度相关性良好。本研究建立的数学模型可为温度变化条件下的早期PMI推断提供参考。     

大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究

目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d、4d、8d、16d、24d),分别在各时间点取大鼠胫骨前肌及脑组织约50mg,提取各组织总RNA,利用RT-q PCR技术检测9种管家基因的m RNA相对表达量。运用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件对基因稳定性进行评价,利用spss软件对内参标准化的m RNA指标进行回归分析。结果脑组织及骨骼肌中均为HPRT稳定性最高,适合用于本研究的内参基因。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种指标的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系。骨骼肌中m RNA指标相对表达量与PMI之间没有显著的相关性。结论脑组织及骨骼肌是较适宜推断晚期死亡时间的检材。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种m RNA的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系,有望成为推断PMI的辅助指标。     

GFAP及NSE阳性表达与早期PMI的相关性

目的通过对神经元及胶质细胞进行HE染色、免疫组化染色,观察GFAP/NSE的阳性表达,探讨推断早期死亡时间(postmortem interval,PMI)的可行性。方法健康白兔36只,分为6组,处死后对兔脑组织取材并进行HE染色及相应免疫组化染色,观察10℃条件下镜下0~24h的变化,分别测定0h、1h、4h、8h、16h、24h阳性细胞的数目和OD值。结果在10℃条件下,HE染色在0~24h内无明显变化;脑组织AST中GFAP的阳性表达在24h内无统计学意义;神经元NSE的表达逐渐降低,并具有统计学意义。结论在10℃条件下NSE的阳性表达与PMI具有相关性,可以用于早期PMI推断;GFAP的阳性表达与早期PMI无相关性。     

肌原纤维小片化指数与人体死亡时间的相关性

目的研究死后人体骨骼肌肌原纤维小片化指数(myofibril fragmentation index,MFI)与死亡时间的关系。方法采用双缩脲法测定室温下死后不同时间人体右肱二头肌和右股四头肌的全蛋白浓度,紫外分光光度计测定540 nm处的吸光度,得到骨骼肌MFI值。以死亡时间为自变量(x),MFI值为因变量(y),进行回归分析。结果在死后早期,人体骨骼肌MFI值随着时间延长逐步增高,之后趋于平缓,以12 h内最为显著。死后0~12 h,右肱二头肌回归方程为y=32.660+3.227 x(r=0.987 9),右股四头肌回归方程为y=32.380+3.495 x(r=0.983 9)。结论 MFI与死亡时间相关性强,结合法医实践经验,对于死后早期(尤其12 h内)死亡时间推断具有良好的应用前景。     

测量大鼠死后骨骼肌pH值推断早期死亡时间实验研究

目的利用KNIpHE电极对大鼠死后不同时间骨骼肌pH值进行测定,探讨死后骨骼肌pH值与早期死亡时间(PM I)之间的关系,为利用该种电极在现场快速准确推断死亡时间取得实验依据。方法36只大鼠分为12组,每组3只,分别于死后即刻和死后1,2,3,4,6,8,10,12,16,20,24h取材,制备匀浆后,采用美国Thermo O rion公司210型便携式酸度计配套KNIpHE7120BN电极直接测量pH值;采用南京建成生物工程研究所研制的试剂盒用分光光度法检测乳酸(LA)浓度、肌酸激酶(CK)活性。结果①大鼠死后12h内,股四头肌pH值随PM I延长而逐渐下降,二者之间呈负相关;②大鼠死后12h内,股四头肌LA浓度随PM I延长而上升,与pH值呈负相关;③大鼠死后24h内,股四头肌CK活性随PM I延长而逐渐增强,二者之间呈正相关;④以12h内pH值数据对PM I进行一元线性回归分析,回归方程为:PM I=115.499-17.7pH(R2=0.662,P<0.01,R2为决定系数)。结论利用Thermo O rion KNIpHE电极测定骨骼肌pH值推断早期死亡时间具有较好的应用前景。     

硬脑膜厚度及生物力学参数时序性变化在死亡时间推断中的应用

目的研究人尸体硬脑膜厚度以及生物力学参数与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系,探讨其用于推断PMI的可行性。方法收集尸体检验的硬脑膜样本并按死后6h、12h、18h、24h、30h、36h、48h、60h、72h、84h、96h分组,统一制作成4.0cm×1.0cm的A、B两块试件。测量A试件厚度后检测极限载荷、最大力变形、抗拉强度、弹性模量、断裂力等生物力学参数,分别拟合厚度和生物力学参数值与PMI的回归方程,并通过验证组验证PMI预测值与实际值之间的差异。B试件经10%中性甲醛溶液固定后制备组织切片观察其形态学变化。结果死后6~96h,硬脑膜厚度逐渐减小,胶原纤维从排列清晰逐渐变为相互融合,细胞核数量逐渐变少;硬脑膜厚度、极限载荷、抗拉强度、弹性模量、断裂力呈时序性下降趋势,其中硬脑膜厚度、极限载荷、弹性模量、断裂力与PMI具有相关性(P<0.05)。回代检验中验证组PMI实际值和预测值之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论人死后6~96 h的硬脑膜厚度、极限载荷、弹性模量、断裂力呈时序性变化,利用其与PMI的关系建立的回归方程可用于PMI推断。     

新西兰白兔死亡后颅脑CT检查与死亡时间关系的研究

目的采用CT扫描动态观察新西兰白兔死亡后脑组织变化,建立利用CT值、脑组织/颅腔面积比,推断死亡时间(PM I)的研究方法。方法通过耳缘静脉注射空气,建立新西兰白兔死亡模型;于死亡后0~120h,运用CT进行头颅平描;选取颅顶面层测定脑组织CT值、脑组织/颅腔面积比。结果死亡后兔脑组织CT值呈双峰样上升、脑组织/颅腔面积比呈不断下降趋势;建立与死亡时间的回归方程:CT值=47.4780-0.1768T+0.0049T2(T/h,CT值/HU)、面积比=99.7368+0.3098T-0.0118T2/100(T/h)。结论CT扫描检查可准确显示兔脑的死后变化;脑组织消失之前,综合运用CT检查指标可用于准确推断死亡时间。     

Enzymehistochemical and immunohistological changes of skeletal muscle motor end-plates and muscle fibers and their relation to the time of death

In order to investigate the relationship between the retrograde changes of the skeletal muscle and the time of death in various postmortem intervals (PMI), a systemic study of the enzymehistochemical activity of AChE, SDH, LDH, Ca(2+)-ATPase and the immunohistochemical reaction of SYN in motor end-plates and muscle fibers was conducted in rats under different temperatures and at various PMI. The results were analyzed and compared by an image processing system. It was found that these changes were related to the PMI, especially AChE changes. The AChE could be used as a sign-enzyme of skeletal muscle to date death.     

免疫印迹检测人胸大肌肌钙蛋白I推断较晚期死后经过时间

目的研究人死后骨骼肌肌钙蛋白I(Skeletal troponn in I,sTnI)的变化规律,探讨较晚期死后经过时间推断方法。方法以人胸大肌为研究对象,利用免疫印迹(W estern b lot)结合图象分析技术半定量检测不同离体时间内人胸大肌sTnI的含量,观察其与离体时间的关系。结果人胸大肌sTnI含量随离体时间延长而逐渐下降,与离体时间的对数值呈近似的线性关系:Y=11 972.5-4 761.9 lgX,相关系数r=0.989;离体5d的人胸大肌仍可检出sTnI。结论检验人死后骨骼肌(胸大肌)sTnI的含量有望成为用于推断人体较晚期死后经过时间的新技术。