AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒快速直接PCR扩增初探

目的 探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率.方法 联合运用AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较.结果 AmpF(l)fSTR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min.结论 采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高.     

山东沂源县汉族人群18个STR基因座遗传多态性

正本文应用DNA TyperTM15 plus试剂盒(公安部物证鉴定中心)对山东省沂源县1012名汉族无关个体18个STR基因座遗传多态性进行调查,为法医学及相关研究与实践提供遗传学资料。1材料与方法1012名常住沂源县汉族无关个体血样(男性741例,女性271例)均系本实验室日常工作积累。采用DNA TyperTM15 plus试剂盒10μL反应体系免提取直接扩增[1]。扩增产物应用ABI 3500基因分析仪检     

FTA-DNA直接提取法的研究与应用

目的建立一种简约且易于自动化操作的Whatman FTA卡血样DNA提取方法。方法取直径1．2mm FTA卡血样，分别用FTA-DNA直接提取法及FTA常规提取方法提取DNA，AB-Identifiler^TM试剂盒分别进行10山和25山体系检测比较，并筛选批量grA卡血样DNA自动化提取程序。结果200份grA卡血样分别采用2种方法提取DNA模板，25μl体系PCR-STR检测，分型结果均良好。10μl体系检测，FTA-DNA直接提取法优于FTA常规提取方法，图谱RFU值为1000～2000，采用自动化工作站运行该提取程序较手工操作DNA分型图谱均衡性更佳；采用FTA常规提取方法检测，图谱RFU值100～2000，小片段优先扩增现象明显，且有19％的样本出现丢峰现象，采用自动化工作站运行该程序对其结果改善不明显。经工作站运行FTA-DNA直接提取法自动程序及10山体系检测本2万余份FTA卡采集的血样，均获得16个STR基因座DNA分型结果。结论本文建立的FTA-DNA直接提取法适用于FTA卡血样自动化DNA建库。     

快速PCR扩增体系的建立及法医学应用

目的建立快速PCR扩增体系,探讨其在法医实践中的应用价值。方法设置不同的缓冲液、酶浓度与Mg SO4浓度、热循环参数等,观察不同参数对扩增结果的影响,建立快速PCR扩增体系。使用该体系对常见检材进行STR分型,与常规方法扩增的结果比较,考察其分型准确性与扩增用时。结果本文建立的快速PCR扩增体系含DNA TyperTM19试剂盒的Primer Mix(5×)2μL;Ta KaRa试剂的Fast BufferⅡ(10×)1μL,Speed STARTMHS DNA Polymerase(5U/μL)0.3μL,Mg SO4(50mmol/L)为0.1μL。扩增程序为95℃120s;95℃2s、61℃15s,27个循环;72℃60s。结论快速PCR扩增体系分型结果准确,用时仅19min,缩短了常规扩增用时,有较大的法医学应用价值。     

DNATyper Y21试剂盒基因座在河南人群中的遗传多态性

本文采用DNA Typer Y21试剂盒对中国河南地区汉族604个健康无关个体进行19个Y-STR基因座和1个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查。采用血卡样本进行直扩,用DNA Typer Y21试剂盒进行扩增及检测。结果在20个基因座共检出164个等位基因和601种单倍型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的河南人群20个STR基因座具有较好识别能力,该试剂盒与Yfiler Plus相同基因座遗传学数据比较无显著差异。     

荧光STR直接复合扩增试剂缓冲体系的研制

目的研制适用于数据库样本荧光STR直接复合扩增体系。方法针对常规血卡、FTA和903血卡样本,配制扩增缓冲液基准母液,采用不同配方的扩增缓冲体系进行直接扩增及检测。考察不同种类增强剂、4种商业化DNA聚合酶、不同复性温度和终延伸时间对检材的检测效果,并验证优化体系的适应性。结果采用本文所建体系对各类血卡样本进行检验,均可获得样本清晰、完整的STR分型。体系选择BSA\Tween20\DMSO\甘油等增强剂组合、Typer热启动聚合酶1.5U/10μL、57～59℃复性温度、30～50min终延伸时间,采用10μL体系即可对直径1.2mm FTA卡血样进行有效分型。结论本文所研制的缓冲体系能够满足常规血卡、FTA和903血卡样本直接扩增检验的需要。     

FTA卡直接扩增缓冲增强剂的研制

目的研制一种能够配合非直接扩增试剂应用的PCR缓冲增强剂,实现对FTA卡保存样本的直接扩增。方法基于常规STR复合扩增试剂盒的扩增体系及引物组,加入增强剂对FTA卡类样本进行直接扩增。结果获得样本STR分型结果清晰、完整、平衡性好,无明显抑制现象存在。结论所研制的FTA卡直扩增强剂能达到FTA卡保存样本的直接扩增检验要求,可应用于法医STR检验。     

AGCU免提取STR荧光检测试剂盒的验证

目的考察AGCU免提取STR荧光检测试剂盒．对保存在滤纸片或FTA卡上血液样本的直接扩增检测情况。方法使用人GCU免提取STR荧光检测试剂盒，对未经提取的滤纸片血液样本、FTA卡血液样本675份进行直接扩增和18个基因座的DNA分型，并对结果的可靠性进行研究。结果18个基因座检测结果与PP16和ID试剂盒分型结果一致，2000年数据库样本成功率92．3％，2001年数据库样本成功率92．6％，2004以后年数据样本及案件样本、亲子鉴定样本成功率在99％以上。结论AGCU试剂盒可以成功地对滤纸片、FTA卡样本的18个STR基因座进行直接扩增检测，检验结果稳定，分型准确。     

快速PCR扩增检验体系的建立及技术指标验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法运用快速扩增酶Fast Start与DNA TyperTM15 plus primer mix组合并优化建立快速扩增体系,对50份静脉血卡和35份案例检材提取的DNA进行扩增,并对体系检测结果的准确性、稳定性和检材适应性进行验证;采用不同稀释浓度的标准品9947,采用快速扩增方法进行检测,验证体系的灵敏度。结果模板DNA浓度达到0.50ng/μL,采用快速扩增体系可能获得准确分型;扩增耗时仅为69min,比常规扩增方法明显缩短;不同种类检材,经检测均获得良好分型图谱,同一份样本重复实验结果一致、稳定。结论本文建立的快速扩增体系可显著提升检测速率,其灵敏度、准确性、稳定性、检材适用性等技术性能,可满足实际检验的需求。     

DNA Typer~(TM)15 plus直扩试剂盒在DNA数据库建设中的应用

目的测试DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的技术性能指标,评价其在DNA数据库建设中的应用价值。方法采用DNA TyperTM15 plus试剂盒,并使用IdentifilerTM和DNA TyperTM15试剂盒进行比较,设定不同体系和引物量、不同退火温度和循环次数以进行方法验证;设定不同模板量标准品、不同比例混合样本,取猪、狗、兔等动物的血液样品,血痕、骨骼、唾液斑等常见检材样本以及不同建库样本,以验证试剂盒灵敏度、特异性、稳定性以及混合样本、常见检材及建库样本的检测能力。结果直扩试剂盒分型结果准确,重复性好,灵敏度可达0.125ng,不同批次间试剂检测结果稳定,对不同检材有很好的适应性。10μL扩增体系时FTA卡和加强型血液采集卡取样直径应为0.5mm,而血滤纸、血液采集卡样本和经典型血液采集卡取样直径应为1.0mm。结论 DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的性能可以满足DNA数据库建设及检案的需要,可在相关实验中选择使用。     

西藏藏族人群18个STR基因座遗传多态性

<正>DNA Typer 15TMplus试剂盒是公安部物证鉴定中心针对目前办案及DNA数据库建设研制的五色荧光STR复合扩增试剂盒。该试剂盒在DNATyper15TM试剂盒的基础上,增加了4个基因座(TH01、TPOX、D19S433、D12S391)。本文使用该试剂盒,对西藏藏族人群18个STR基因座进行了遗传多态性调查,现报道如下。     

PowerPlex(R)16HS试剂盒在陈旧血样DNA检验中的应用

PowerPlex 16 HS系统是对16个STR基因座进行联合扩增试剂盒,对PCR抑制物的耐受性较强,适于直接扩增。本文作者在公安部的打拐专项行动中,采用该试剂盒,对保存近10年的300份陈旧血样进行DNA检验,取得了较好的效果。1材料与方法1.1主要仪器与试剂PowerPlex(16 HS试剂盒(Promega公司,美国),BSD 600半自动取样机(BSD公司,澳大利亚),9700扩增仪、3130XL遗传分析仪(ABI公司,美国)。     

广西京族和汉族群体18个STR基因座遗传多态性

本文对中国广西壮族自治区京族和汉族共158名健康无关个体18个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查,采用QIAampDNA Blood Midi试剂盒提取DNA,用TyperTM15plus试剂盒进行PCR扩增和检测,结果在18个STR基因座共检出350个等位基因和875种基因型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的广西京族和汉族人群18个STR基因座均具有较好识别能力。     

3种国产化试剂盒与Identifiler^TM试剂盒检验结果比较

目的比较3种常用国产化PCR扩增试剂盒与IdentifilerTM试剂盒的检验结果。方法对455份中国汉族无关个体血样,分别用IdentifilerTM、DNA TyperTM15、GoldenEye 16BT、AGCU17＋1 4种试剂盒进行检测,对其中共有的11个基因座位分型结果进行比较,并对有差异的样本进行测序分析。结果 3种国产化试剂盒在455份样本中,发现4例样本的分型结果有差异,差异率为0.88%。其中,DNA TyperTM15试剂盒CSF1PO基因座发现1例等位基因丢失,AGCU17＋1试剂盒D18S51基因座发现1例等位基因扩增不平衡,测序结果表明,2例均系点突变导致;GoldenEye16BT试剂盒D21S11基因座发现2例假3峰型,其中1例测序未发现碱基突变,分析3峰原因可能是stutter滑脱峰所致。结论与IdentifilerTM试剂盒比较,3种国产化试剂盒均有分型差异现象,成因不同,在实践中应给予注意。     

甘肃甘南藏族人群21个非CODIS基因座的遗传多态性

正本研究采用AGCU 21+1荧光标记复合扩增系统对515例甘肃甘南藏族健康无关个体的21个常染色体非CODIS基因座进行遗传多态性分析,旨在为法医遗传学研究提供基础数据。1材料与方法根据知情同意原则,随机采集祖孙三代居住在甘肃甘南藏族自治州的藏族健康无亲缘关系个体FTA卡血痕样本515例,其中男性305例,女性210例。采用AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒(无锡中德美联生物技术有限公司)直接扩增血样DNA,样本     

PowerPlex 21与GoldeneyeTM 20A试剂盒的一致性验证及法医学应用

目的：确认PowerPlex 21试剂盒与GoldeneyeTM 20A试剂盒分型结果的一致性。方法应用两试剂盒对205名北京汉族无关个体血样DNA进行复合扩增,观察19个重叠STR基因座分型的一致性,并统计D1S1656的遗传多态性。结果所有19个重叠基因座分型相同,两个试剂盒的杂合基因座峰高比例差异无统计学意义（P〉0.05）。D1S1656杂合度为0.878,个人识别率为0.949,三联体非父排除率为0.751,二联体非父排除率为0.506,多态信息含量为0.810。结论 PowerPlex21试剂盒与GoldeneyeTM 20A试剂盒分型结果一致性好,引物设计合理;D1S1656多态性好,可用于人类遗传分析及法医学中的亲子鉴定和个人识别。     

PowerPlex16HS试剂盒在陈旧血样DNA检验中的应用

PowerPlex16HS系统是对16个STR基因座进行联合扩增试剂盒,对PCR抑制物的耐受性较强,适于直接扩增^[1-2]。本文作者在公安部的打拐专项行动中,采用该试剂盒,对保存近10年的300份陈旧血样进行DNA检验,取得了较好的效果。     

PowerPlex(R)16HS系统在建立DNA数据库中的应用

免提取型法医DNA检测试剂盒是近年出现的新产品,具有成本低、速度快、操作简便等优点[1],在DNA数据库大样本量检验分析和检验标准化方面,优势明显.本研究采用PowerPlex(R)16 HS系统对DNA建库样本(FTA卡血样或滤纸片血样)进行直接扩增,检测情况报道如下..     

FTA卡在微量血痕DNA多态性分析中的应用

目的探索FTA卡样本DNA最小检出量及同一FrA卡样本进行多项目检测的可行性。方法制作含有不同浓度DNA丌A卡,使用Identifiler试剂盒进行检验;对同一rrA卡样本先后使用Identifiler、Y-filer试剂盒进行扩增及线粒体高变区HVI区测序,使用ABl3130测序仪检测各扩增产物。结果载有0．5ngDNA的FTA卡扩增产物即可正确分型,对同一血痕样本使用不同试剂盒检验,均可清晰正确判型,线粒体高变区HVI区测序图清晰,且各检验结果均与对照一致。结论载有0．5ngDNA的FTA卡扩增产物可用于DNA分型检测,FTA卡对DNA结合较稳定,可用于多项目检测。     

强奸致孕形成部分性葡萄胎的检验分析

目的探讨强奸致孕案葡萄胎组织的DNA检验和STR结果分析。方法用DNA Typer TM15试剂盒对犯罪嫌疑人、受害人血样和流产胚胎组织进行荧光复合STR基因座扩增检测。结果检测的一例流产胚胎组织DNA的STR峰谱表现出部分3条带,且3条带中有两个等位基因来源于犯罪嫌疑人,另外一个来源于受害人,推断为单卵双精子受精的部分性葡萄胎。结论应用STR分型技术可以推断葡萄胎的DNA来源和受精类型,为亲缘关系鉴定提供依据。