鸭源和鸡源减蛋综合征病毒的多肽分析

减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒属禽腺病毒,虽然其血清型只有１种,但用限制性内切酶试验可将大量病毒分离物分为３组基因型。基因型不同,则由核酸翻译成的蛋白质也会存在差异。我们已证实鸭源ＥＤＳ病毒ＪＥ１株和鸡源ＥＤＳ病毒ＮＥ４株属不同的基因型。本试验利用ＳＤＳ?..     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸及结构蛋白比较研究

采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成。近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的血清Ⅰ型强毒Ｊ＿１Ｃ＿７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电泳迁移率也基本一致。同时观察到毒株间各蛋白带相对百分含量的变化。     

麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究

从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针斑点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型鉴定为Ⅰ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感，ｐＨ２．０不能灭活病毒，ｐＨ１２可使病毒失去感染性，５６℃作用３小时病毒仍有活性，７０℃１小时可灭活病毒。以上结果表明从麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ理化性质比较稳定，与目前鸡场流行的ＩＢＤＶ极为相似，可能与鸡ＩＢＤＶ同源，提示麻雀可能在ＩＢＤ流行病学中起主要作用。     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１２００，以ＯＤ４９０＞０．３，Ｐ／Ｎ＞２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。     

减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定

减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定王砚范宋晓华李维义（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）从一产蛋突然下降的蛋用鸡群中分离到１株与减蛋综合征（ＥＤＳ）相似的腺病毒。该病毒能凝集鸡的红细胞，并且可在鸭胚尿囊腔中复制出高效价的病毒。１材料和方法１．１...     

鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株糖蛋白gB基因克隆及鉴定

以ＰＵＣ１９质粒为载体构建了鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）ＥｃｏＲＩＤＮＡ文库。根据已经发表的澳大利亚ＩＬＴＶ－ＳＡ２株和英国ＩＬＴＶ－Ｖ８２２株的糖蛋白ｇＢ基因的核苷酸序列，设计并合成了一对引物，以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，扩增出１．３３８ｋｂ的糖蛋白ｇＢ基因片段，用ＤＩＧ标记制备成核酸探针，从ＩＬＴＶＥｃｏＲＩＤＮＡ文库中筛选出阳性重组子，得到一个ＥｃｏＲＩ３．０ｋｂ的ＩＬＴＶＤＮＡ片段。经酶切分析表明，该３．０ｋｂＩＬＴＶＤＮＡＥｃｏＲＩ片段含有完整的糖蛋白ｇＢ基因，经ＰＣＲ和核酸杂交表明所克隆的糖蛋白ｇＢ基因是特异的。     

NEWS IN BRIEF

ＮＥＷＳＩＮＢＲＩＥＦＬｉＪｉｎ（１）ＡｔｔｈｅｉｎｖｉｔａｔｉｏｎｏｆＣＡＦＩＵ．ａ４－ｍｅｍｂｅｒＭｏｒａｌＲｅａｒｍａｍｅｎｔＳｗｉｓｓＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＤｅｌｅｇａｔｉｏｎｈｅａｄｅｄｂｙｉｔｓｐｒｅｓｉｄｅｎｔＭａｒｃｅｌＧｒａｎｄｙｖｉ...     

中药免疫增强剂提高鸡免疫功能的研究

以鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）和新城疫（ＮＤ）为模型研究自拟中药免疫增强剂（简称补益方１、补益方２）对ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗、ＮＤ油乳剂灭活苗的免疫增强效果；用间接ＥＬＩＳＡ法测定鸡血清ＩＢＤＶ抗体效价，以微量血细胞凝集抑制试验测定血清ＮＤ血细胞凝集抑制（ＨＩ）抗体效价。结果表明，补益方１与ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗配合使用，血清ＩＢＤＶ抗体Ｐ／Ｎ值在测定期内（４～３９ｄ）都高于免疫对照组；补益方１和补益方２对ＮＤ油乳剂灭活苗均有一定的免疫增强效果，其中补益方２的免疫增强效果（平均为１．０２０）明显优于补益方１（平均为０．４１０），从而认为补益方２与ＩＢＤ疫苗、ＮＤ疫苗配合使用具有免疫增强作用，可以提高机体体液免疫水平。     

斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

鸡痘病毒282F_4弱毒株基因组BamHⅠ片段的克隆与分析

采用鸟枪法克隆鸡痘病毒（Ｆｏｗｌｐｏｘｖｉｒｕｓ，ＦＰＶ）基因组ＢａｍＨⅠ部分片段，用Ｔｈｇｏｘｉｇｅｎｉｎ一ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｆ_４弱毒株ＢａｍＨⅠ片段探针，点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ_４弱毒抹ＤＮＡ的ＢａｍＨⅠ片段，选取具有代表性的大小不同的６个质粒ｐＵＡ、ｎＵＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＥ、ｐＵＦ。６个质粒插入的片段Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为７．３，４．９．４．２，３．６，３．２，３．０ｋｂ，分别以ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄⅡ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｃⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ进行单酶切，又经适当组合酶切。实验结果表明，在各片段在在的单酶切位点为Ａ：ＥｃｏＲⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｈⅠ位点；Ｂ：ＥｃｏＲⅠ、ＸｈⅠ、ＨｉｎｄⅡ位点；Ｃ：ＣｌａⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ位点；Ｄ：ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ位点；Ｅ：ＥｃｏＲＶ位点；Ｆ：ＥｃｏＲＶ位点。逃出７．３ｋｂ片段，选取片段中单一酶切位点ＢｇｌⅡ，插入痘苗病毒（ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ，ｖｖ）Ｐ_７，５启动于和Ｐ_１１启动子控制下的报告基因ＬａｃＺ，构建成时时表达载体质粒，通过与ＦＰＶ２８２Ｅ_４株转染鸡胚成纤维细胞，一生的重组病毒，可以表     

鸡新城疫－减蛋综合征蜂胶佐剂灭活二联苗的研究

首次用蜂胶作为佐剂，研制出鸡新城疫－减蛋综合征（ＮＤ－ＥＤＳ）二联灭活苗。在开产前１个月左右，用该苗按０．５ｍｌ／只的剂量皮下或肌肉注射免疫蛋鸡，接种后２０ｄ测ＮＤ抗体（ＨＩ法）效价为６．２５～７．０（ｌｏｇ２，下同），ＥＤＳ－７６抗体（ＨＩ法）效价为６．５～８．０。用ＮＤ－ＥＤＳ油乳剂灭活二联苗做对照，进行免疫持续期平行测定对比试验，免疫后１８０ｄ，蜂胶苗免疫组鸡的ＮＤ抗体滴度为８．５～８．７，ＥＤＳ－７６抗体滴度为８．３～８．５，与油苗免疫对照组鸡的ＮＤ抗体（８．６）和ＥＤＳ－７６抗体（８．１）效价相比，无明显差异（Ｐ＞０．０５，Ｐ＞０．０５）。用禽胚做中和试验揭示，该苗免疫半年后，其保护率仍可达９０％以上。田间试验表明该苗安全性理想；免疫４．５月ＮＤ抗体效价达９．０，ＥＤＳ－７６抗体效价为８．０     

NEWS IN BRIEF

ＮＥＷＳＩＮＢＲＩＥＦ（１）ＡｔｔｈｅｉｎｖｉｔａｔｉｏｎｏｆＣＡＦＩＵ，ａ３－ｍｅｍｂｅｒｄｅｌｅｇａｔｉｏｎｆｒｏｍＲｏｔａｒｙＤｉｓｔｒｉｃｔ５１０７，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａｈｅａｄｅｄｂｙＫａｒｌＳｔｕｃｋｉ，ｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅＷｏｒｉｄＣ...     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病，经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ ＧＩＢ） ，并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 株，ＨＡ 效价为２１２，ＥＩＤ５０ 为１０ －６．８１／０ ．２ ｍ Ｌ。病毒干扰试验中，ＩＢＶＪＢ９７０２ ＋ ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ 效价为２４～６ ，ＬａＳｏｔａ 接种鸡胚ＨＡ 效价为２１０～１１ ；用ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 病毒液１∶１０ 稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ１２０ 弱毒疫苗免疫雏鸡，发病８／１０ ，死亡３／１０ 。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒北京分离株的ORF7克隆与序列分析

将北京地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ） 分离株ＢＪ２ 和ＢＪ４ 的ＯＲＦ ７ 及部分３’端非编码区（ ＵＴＲ） 的ＲＴＰＣＲ 扩增产物克隆连接于ｐ ＧＥＭＴｅａｓｙ 质粒载体上,重组质粒经ＥｃｏＲ Ⅰ酶切鉴定后进行了双链测序。测定的基因序列与欧美标准毒株已知序列比较发现,ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株与美洲ＶＲ２３３２ 株非常接近,在其长度为５５５ ｂｐ 的ｃＤＮＡ 序列中,仅与ＶＲ２３３２ 株分别相差１ 和２ 个核苷酸,其中ＯＲＦ ７ 的核苷酸序列与ＶＲ２３３２ 株同源性分别高达１００ ％ 和９９ ．４６ ％ ,其推导的氨基酸序列与ＶＲ２３３２ 株同源性分别为１００ ％ 和９９ ．２５ ％ ,３’ＵＴＲ 则完全相同;而与欧洲ＬＶ 株则有明显差异,其核苷酸序列同源性仅为６８ ．００ ％ 和６７ ．００ ％ ,推测的氨基酸序列同源性仅有６５ ．００ ％ 和６４ ．００ ％ ,且ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株与ＬＶ 株相比缺失了ＫＫＳＴＡＰＭ 和ＡＳＱＧ 两段氨基酸序列,而３’ＵＴＲ 则比ＬＶ 株多出３８ ｎｔ 的一段特征性核苷酸序列。序列分析结果表明,ＢＪ２ 和ＢＪ４ 株属于同一基因型,且具有ＶＲ２３３２ 株的基因特点     

抗新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析

以蔗糖反透析浓缩及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ 200层析纯化Ｆ48Ｅ8和ＬａＳｏｔａ新城疫病毒(ＮＤＶ),取纯化的病毒液免疫接种ＢＡＬＢ ｃ小鼠,将小鼠脾细胞与ＮＳ 1骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(ＨＡＴ)培养基选择,间接ＥＬＩＳＡ检测,有限稀释法克隆,筛选出了3株杂交瘤细胞,依次命名为1Ｄ4、1Ｄ5、16Ｇ12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80～100,并能稳定传代,其产生的单克隆抗体重链属于ＩｇＧ1,轻链属于κ链;ＥＬＩＳＡ检测时仅与ＮＤＶ发生特异性反应,而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应,应用这些单克隆抗体对ＮＤＶ分离株进行了分群研究。     

鸡传染性支气管炎北京地方株S_1基因的克隆与鉴定

利用反转录套式聚合酶链反应（ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）技术从北京地区３株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株（ＢＪ１,ＢＪ２,ＢＪ３）中扩增出１０５４ｂｐＳ１基因高变区。利用限制性内切酶ＳｉｎⅠ和ＰｓｔⅠ的酶切位点分析图谱进一步证实了ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ的特异性。将３段Ｓ１基因分别克隆到ｐＵＣ１９质粒中,获得重组质粒ｐＵＣＩＢＶＳ１ＢＪ１,ｐＵＣＩＢＶＳ１ＢＪ２和ｐＵＣＩＢＶＳ１ＢＪ３。     

尼赫鲁与现代印度

尼赫鲁与现代印度尚劝余ＮＥＨＲＵＡＮＤＭＯＤＥＲＮＩＮＤＩＡ￥ＳｈａｎｇＱｕａｎｙｕＡｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｒｔｉｃｌｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＮｏ．３１９９３．（续１９９３年第３期）４．推行社团发展规划，改造农村面貌印度是一个农业人口占...