犬猫的恶性组织细胞瘤和淋巴瘤的病理学诊断

采用WHO肿瘤最新分类方法,对临床上犬和猫的恶性组织细胞瘤及淋巴瘤进行病理学分析。通过石蜡切片的常规染色(HE染色)、免疫组织化学方法及基因重排等方法进行组织学鉴定。1例病犬的病理学检查结果为肿瘤细胞核仁明显,体积较大,免疫组织化学结果 Vim、Lys、CD68及α-抗糜蛋白酶(α-AT)呈阳性;对CK、EMA及S-100呈阴性,依据2013版WHO对软组织肿瘤最新分类方法该病例被诊断为中间性恶性纤维组织细胞瘤;根据免疫组化及Ig H基因重排分析,依据2008版WHO造血及淋巴组织分类标准另1例病犬诊断为皮肤非亲皮性淋巴瘤。3例病猫的病理学检查结果分别为:1例经细胞标记的免疫组化分析,Vim、Lys呈强阳性,被诊断为恶性纤维组织细胞瘤;1例经免疫组化分析CD3、颗粒酶B和MPO均为阳性,诊断为慢性嗜酸粒细胞白血病;经免疫组化分析Pax5、CD79a为阳性表达,CD3、Ig G为阴性表达,结合2008年WHO造血及淋巴组织分类鉴别为结外黏膜相关淋巴组织边缘带B细胞淋巴瘤。     

犬肠管的组织学观察及Ghrelin分布的检测

为观察犬肠管的组织学结构、检测犬肠管Ghrelin的表达定位情况。取3周岁母犬肠管的各段组织,通过石蜡切片制作、HE和免疫组织化学染色,对其组织学结构及Ghrelin表达定位情况进行检测。HE染色结果显示,犬肠管黏膜上皮为单层柱状上皮,黏膜肌层完整,肌层发达,肠绒毛、皱襞和肠腺等在各段肠管都存在差异。免疫组织化学检测结果显示,Ghrelin在空肠、结肠和直肠黏膜层的表达呈强阳性,阳性细胞染色为深褐色;十二指肠和盲肠黏膜层表达较弱,阳性细胞呈黄褐色;回肠未检测到Ghrelin。犬在组织学结构上和一般家畜基本相似,但黏膜肌层比较完整,肌层较厚;Ghrelin阳性细胞主要分布在犬肠管的黏膜层和黏膜下层,十二指肠、空肠、盲肠、结肠和直肠均有分布,回肠未检测到表达。     

犬猫肺乳头状腺癌的病理学诊断

犬和猫的肺乳头状腺癌作为犬和猫肺腺癌的一种病理亚型,目前还缺乏相关病理学诊断依据。采用2015版WHO肺肿瘤组织学分类方法,对临床犬和猫的肺癌进行病理学诊断。本次研究以患病犬类和猫类为样本,通过多取材,细观察,精确选取肿瘤组织样品,制备石蜡切片,然后石蜡切片经HE染色及免疫组织化学方法进行组织学鉴定。观察比较肿瘤组织和正常组织的病理形态,观察病理切片的细胞异型性,以此对犬和猫的肺乳头状腺癌进行病理学诊断,得出了4例病犬和病猫的病理学检查结果,均为肺乳头状腺瘤。     

犬眼睑鳞状上皮细胞癌的组织病理学诊断

对一例自然患病犬眼睑增生组织进行组织病理学观察,以确定增生组织的病理学类型。对病犬进行血常规及生化检查,取手术切除增生组织标本,经福尔马林溶液固定后,进行常规石蜡包埋、切片、HE染色、SABC法免疫组织化学试验,并利用NIS-Elements高清晰度彩色图文分析系统记录观察结果。结果显示,血常规及生化检查白细胞浓度偏高;HE染色镜检,可在增生组织内见到明显的角化珠和细胞间桥。免疫组织化学检测结果显示,细胞角蛋白、上皮膜抗原、S-100蛋白均为阳性。结果表明,该眼睑增生组织为鳞状上皮细胞癌。     

宠物兔三种典型子宫肿瘤的病理学诊断

本研究分别对3例宠物家兔患子宫肿瘤进行病理学分析。通过石蜡切片的HE染色及免疫组织化学方法进行病理学诊断及分析。病例一,子宫肿块显示乳头状突起,腺上皮呈假复层或复层。肿瘤腺上皮细胞核颜色深,嗜碱性,核仁明显,细胞质稀少,有丝分裂低,异型性易见。免疫组化结果显示,CK强阳性、vimentin阴性,确诊为子宫内膜样腺癌;病例二,子宫内膜边界不清,伴肌层侵润,细胞筛状或实性排列,复层或多层,具有合体细胞聚集等特征。肿瘤上皮细胞由柱状、多角性细胞组成,嗜酸性,细胞质丰富,细胞边界清晰,细胞核深染,从卵圆形到椭圆形不等,核仁明显。其免疫组织化学表型AE1/AE3阳性、α-SMA阴性。肿瘤间叶细胞,细胞核呈梭形或多形性,有轻度或深嗜酸性纤维质,细胞边界不清,细胞核从卵圆形到圆形不等,核分裂现象易见,呈脉管侵润。其免疫组化结果显示,α-SMA阳性、AE1/AE3阴性、CD10阳性,确诊为子宫恶性苗勒管混合瘤;病例三,子宫内部充满组织液,局部呈虫卵状。有实体性组织肿块,瘤细胞梭形呈束状、编织状排列,细胞核均匀,未见异型细胞。其免疫组化结果显示,α-SMA阳性、desmin阳性、S-100阴性。确诊为子宫多发性平滑肌肿瘤。     

绵羊肺炎支原体免疫组织化学及间接免疫荧光检测方法的建立

以病理组织学观察为基础,建立检测绵羊肺炎支原体的间接免疫组织化学和间接免疫荧光方法,以绵羊肺炎支原体标准血清为一抗,分别以家兔抗山羊Ig G-HRP和家兔抗山羊Ig G-FITC为二抗,对绵羊肺炎支原体阳性肺组织切片及阴性对照组切片进行HE染色、免疫组织化学染色及间接免疫荧光染色,并优化染色条件,以确保组织切片在最佳的条件下进行鉴定。结果显示,本试验所建立的免疫组织化学方法与PCR方法对病样的检出率相符,且高于传统的分离培养法。结果表明,本试验建立的间接免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法可用于对临床病例的组织样本检测,具有很强的特异性和可靠性,可直观地观察和探究该病原在机体内的定位、动态分布以及致病机理,以期为临床诊断提供更可靠的方法。     

犬肝细胞肝癌和猫胆管型肝癌的病理组织学诊断

采用2015版W H O肝癌组织学分类方法,对临床上犬和猫的肝癌进行病理学分析。通过石蜡切片的常规染色(HE染色)及免疫组织化学方法进行组织学鉴定。犬的病理学检查结果为肝脏组织的外部多处坏死出血与肝硬化。我们进一步应用HE染色的方法对肝组织进行染色,观察到其病理改变为细胞有异型,3层的细胞排列成柱状,梁索状和腺泡状,细胞异型性明显,核仁显著,最后确诊为为肝细胞癌。猫的病理学检查结果为胆管上的肥大部分,胆管的纤维组织显著增加,是狭窄胆管胞膛,黏膜红色。在狭窄的部位,胆管扩张。胆管上皮增生管状腺,纤维增加,淋巴细胞浸润。胃、十二指肠、结肠黏膜固有层淋巴细胞浸润,纤维分生固有层淋巴细胞浸润。最后确诊为肝胆管癌。     

周围神经浸出液对犬脂肪干细胞向神经膜细胞分化的影响

本研究旨在研究周围神经浸出液对犬脂肪源性干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)向神经膜细胞(Schwann cell,SCs)分化的影响。采用Ⅰ型胶原酶消化法体外原代培养犬ADSCs,并应用流式细胞术进行表型分析,同时观察所培养细胞的成脂成骨分化能力。分离犬坐骨神经,无菌剪碎、浸出和过滤制备犬周围神经浸出液。将周围神经浸出液作为诱导剂,作用于犬ADSCs,7d后分别通过倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光试验和Western-blot观察SCs标志蛋白GFAP和S-100的表达情况。结果显示,周围神经浸出液作用于犬ADSCs 7d后,大多数细胞形态由原来的三角形或梭形变为两端伸出2个细长突起的长梭形,非常像成熟SCs的形态;免疫荧光和Western-blot试验显示,周围神经浸出液诱导ADSCs后,细胞出现GFAP和S-100阳性表达。以上结果提示,周围神经浸出液能有效诱导犬ADSCs向SCs分化。     

急性犬瘟热伴发寄生性肠炎的病理形态学观察

为从病理学方面调查急性犬瘟热与寄生性肠炎的关系,通过免疫组织化学、苏木精伊红和过碘酸雪夫氏染色等方法,对12例急性犬瘟热伴发腹泻的病例进行了病理组织学研究。结果表明,6例腹泻主要是由球虫引起的,2例由隐孢子虫所致。犬球虫主要存在于病犬的空肠和回肠黏膜的上皮细胞内,在脱落的肠上皮细胞和被破坏的肠绒毛所形成的黏液内,也能检出大量的球虫。最常见的球虫形态为滋养体和裂殖体,滋养体多位于上皮细胞内或细胞间,断面呈不整圆形,核位于中央,被苏木精深染,原生质淡染呈细网状,质膜明显;裂殖体多呈不整圆形,内有香蕉状的裂殖子,位于变性的肠上皮细胞内,含有较多的糖原颗粒,用过碘酸雪夫氏染色时呈红色。隐孢子虫主要位于肠上皮细胞和肠腺上皮细胞的纹状缘,引起微绒毛破坏和细胞脱落。用抗犬瘟热病毒核衣壳蛋白单抗染色检查,小肠黏膜上皮细胞、隐窝的腺上皮细胞、浸润在肠黏膜固有层的淋巴细胞、巨噬细胞和集合淋巴结的树突状细胞均呈强阳性反应。据此认为急性犬瘟热的寄生性腹泻是在犬瘟热病毒引起肠黏膜抵抗力降低的基础上发生的。     

警犬细小病毒性肠炎20例尸检分析

犬细小病毒性肠炎是由犬细小病毒引起的一种主要侵害幼犬以急性肠炎为特征的致死率颇高的疾病。我们对江西省几个犬场历年来发生本病送来的病犬尸检记录进行了整理,提出具有证病意义的病理组织学变化,期望进一步丰富病理学资料及对诊断和防治本病有所裨益。 (一)临床表现及实验观察 全部病犬均系1980～1987年间在我系兽医院收治,经一系列临床和实验室检查确诊为犬细小病毒性肠炎,并于治疗无效死亡后而进行尸检的病例。病犬月龄为1.5～4个月。病初,食欲减损,精神沉郁。1～2天后,发生剧烈呕吐和腹泻。呕吐物先为食物,继为黄色泡沫样粘液,最后为血水样物。次数频繁,多者达10～20次。腹泻初为消化不良食物,很快变为恶臭内含粘膜块的水样稀粪,呈     

十例犬乳腺肿瘤病理组织p53及CD44抗体表达的解析

对通过外科手术摘除的10例疑似犬乳腺肿瘤标本按国际标准进行了病理组织学分类,并采用鼠抗人p53和CD44抗体,用免疫组织化学方法对病料组织中的p53和CD44抗原进行了检测.结果表明,10例犬乳腺肿瘤中恶性肿瘤占50%,其中乳腺浸润性导管癌占30%;良性肿瘤占30%,乳腺非肿瘤性疾病占20%.p53在恶性乳腺肿瘤组织中的表达明显高于良性乳腺肿瘤组织,差异极显著(P＜0.01).CD44在恶性乳腺肿瘤组织、良性乳腺肿瘤组织和非肿瘤组织中均有表达,三者之间CD44的表达无显著差异(P＞0.05).证实,p53在病理组织中表达的强弱可作为动物乳腺肿瘤诊断和预后的判定标准之一,而CD44的表达对于乳腺肿瘤的诊断无临床意义.     

乳牛咽后淋巴结内S-100阳性树突状细胞的分布

采取10头健康乳牛的咽后淋巴结,按常规制备石蜡切片,用兔抗牛S-100多克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察了健康乳牛咽后淋巴结内树突状细胞(DC)的分布。结果显示,在咽后淋巴结中,S-100+DCs不仅分布在皮质,而且在髓质中也有大量分布;在被膜下窦内也有S-100+DCs,在皮质的最外层有较多的S-100+DCs;在淋巴滤泡中,滤泡树突状细胞(FDCs)呈S-100阳性标记,而在淋巴滤泡之间则有少量的S-100+DCs;髓质中有大量的S-100+DCs,多数呈贴壁分布,少数散布在窦腔内。表明,在正常乳牛咽后淋巴结内就有树突状细胞分布,一群是皮质树突状细胞,另一群是髓质树突状细胞。     

家兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PLCγ/PKC信号转导通路的关系

为了研究家兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PLCγ/PKC信号转导通路的关系,以及星形胶质细胞的标志性蛋白-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,应用普通染色、特殊染色、免疫组织化学技术和Westernblot技术分别对脑炎原虫性脑组织病变进行了观察,并分析了脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PLCγ/PKC信号转导通路关键性蛋白的关系,以及GFAP在增生性星状胶质细胞中表达。结果显示,所有患病家兔的脑组织中均有数量不等的脑肉芽肿和非化脓性脑炎变化;免疫组化染色显示,成纤维细胞生长因子(FGF)、磷酯酶Cγ(PLCγ)、磷酸化的磷酯酶Cγ(P-PLCγ)和蛋白激酶C(PKC)的表达在肉芽肿的星形胶质细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞中明显增高,呈强阳性反应。GFAP仅在星形胶质细胞中表达,特别是增生性星形胶质细胞呈强阳性反应,被染成深棕色。用Western-blot检测,患病家兔脑组织中的FGF、PLCγ、P-PLCγ和PKC信号转导通路的关键性蛋白的表达丰度明显高于健康家兔;患病家兔脑组织中星形胶质中GFAP的表达也明显高于健康家兔。结果表明,PLCγ/PKC信号转导通路通过强大的级联反应参与了家兔脑炎原虫性脑肉芽肿的形成,GFAP在星形胶质细胞中大量表达,是脑肉芽肿中星形胶质细胞增殖的物质基础,是增生性基因被激活的表现。     

昆明屠宰猪戊型肝炎病毒感染情况的调查

为了解云南省昆明市屠宰猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况,对68份从农贸市场和屠宰场采集的猪肝样品,应用免疫组织化学染色、RT-PCR分别对HEV的抗原和核酸进行了检测,并对肝样品进行了组织病理学观察。免疫组织化学染色结果表明,83.8%(57/68)的肝呈HEV抗原阳性。组织病理学观察发现,47.1%的肝组织出现炎性细胞浸润,22.1%的肝出现肝细胞变性、坏死,20.6%出现肝细胞萎缩。Mal-lory三色染色法染色结果显示,有25%的猪肝存在不同程度的结缔组织增生。RT-PCR结果显示,有1份肝呈HEV核酸阳性,阳性率为1.5%。进化分析表明,这株病毒属4b基因亚型,与广西猪源、越南人源毒株的同源性最高,证实HEV的流行具有地理分布的特征。     

犬睾丸肿瘤组织中肿瘤标志物Lin28a和OCT4及P53的表达

睾丸肿瘤细胞起源于生殖细胞和非生殖细胞,生殖细胞来源者主要为成熟的畸胎瘤,非生殖细胞瘤主要包括支持细胞瘤和间质细胞瘤。本研究将贵宾犬的睾丸肿瘤样组织制成石蜡切片,通过HE染色以及免疫组化染色的方法,镜检观察睾丸肿瘤组织的细胞形态以及P53、Lin28a和OCT4等肿瘤发生相关蛋白的表达水平。结果,通过病理切片HE染色显示睾丸肿瘤组织细胞异常增生,导致正常的睾丸管腔结构消失;肿瘤免疫组化检测显示在睾丸曲细精管的支持细胞内OCT4、Lin28a以及P53等肿瘤发生相关蛋白表达呈阴性,而在曲细精管内的生精细胞表达均呈阳性。该结果对于临床上辅助诊断犬的睾丸肿瘤具有一定的参考价值。     

免疫鸡群发生马立克病的诊断与病理学研究

采用琼脂扩散试验、PCR和病理组织学观察分别对疑似马立克病(MD)病鸡进行确诊和病理学研究。结果显示,琼脂扩散试验中马立克病病毒(MDV1)抗原呈阳性;PCR扩增出567bp的MDV1特异性片段。病理学观察显示,肝、脾、肾和心程度不等肿大,色泽变淡,形成有大小不等和数量不一的灰白色结节。部分病鸡坐骨神经呈单侧性不规则肿粗,弹性降低或丧失。病鸡实质器官及坐骨神经组织中均出现大量多形态的类似淋巴细胞、成淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞及网状细胞的肿瘤细胞聚集和散在,并可见典型的MD细胞,尤其在血管周围和淋巴管周围。各型肿瘤细胞和MD细胞异型性明显,肿瘤细胞周围实质程度不等的变性、坏死,间质水肿。核仁区嗜银蛋白染色结果显示,肿瘤细胞增生活跃,恶性程度较高。     

犬腺病毒1型对犬北极狐和银狐的致病性比较

为比较本实验室保存的狐源犬腺病毒1型(CAdV-1)对犬、北极狐和银狐的致病性,以犬、北极狐和银狐为实验动物,建立3组CAdV-1 F1301株的感染模型。攻毒后监测各组动物的临床症状,并计算CAdV-1对这3种动物的半数致死量(LD_(50)),收集感染致死动物的脏器组织,采用病理组织观察、免疫组织化学试验和实时荧光定量PCR等方法比较CAdV-1对犬、北极狐和银狐的致病性。结果显示,3组实验动物均出现神经症状,CAdV-1对犬、北极狐和银狐的LD50分别为106.5T CID50、105.5TCID50和103.0TCID50。病理组织观察和免疫组织化学试验结果显示,3组动物的肝均出现较严重的病理损伤,且均呈CAdV-1强阳性,银狐的脾、北极狐的肺和脾均呈CAdV-1阳性。荧光定量PCR结果显示,3组动物肝中均检测到高拷贝数的病毒DNA,其中银狐肝中的病毒DNA载量高达10~(8.83)copies/g,显著高于北极狐(P0.05)和犬(P0.01),银狐脑组织中的病毒DNA载量也显著高于北极狐(P0.01)和犬(P0.01)。结果表明针对CAdV-1,银狐的易感性大于北极狐,北极狐的易感性大于犬;CAdV-1对3组动物的主要靶器官为肝,银狐的脾和脑以及北极狐的脾和肺也为CAdV-1感染的重要靶器官。本研究为CAdV-1的病理学诊断和综合防控提供了参考。     

褪黑激素对犬脂肪干细胞向雪旺细胞分化过程中凋亡发生的抑制作用研究

为了探讨褪黑激素(Mel)对犬脂肪干细胞(ADSCs)向雪旺细胞(SCs)诱导分化过程中凋亡发生的影响。本实验将犬ADSCs诱导分化为SCs,并使用免疫荧光法进行鉴定。采用CCK8法选取Mel的最佳浓度。应用q RT-PCR法和Western-blot法检测无Mel组和Mel处理组中ADSCs向SCs诱导过程中细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2和Bax的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,50 nmol/L Mel处理过的细胞活力最高;ADSCs向SCs诱导后S-100和GFAP呈阳性表达,并且观察到Mel的添加并不会影响到SCs的表型特征。ADSCs向SCs诱导后Bcl-2表达量明显低于对照组,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著高于对照组,细胞凋亡较多;在加入Mel后Bcl-2表达量显著升高,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著下降。结果说明Mel可以显著抑制犬ADSCs向SCs诱导分化过程中的凋亡发生。     

ColⅣ、LN及HSPG在滩羊皮肤组织的分布研究

应用Masson三色染色、Gomori银浸染及免疫组织化学SP法,结合IPP统计分析出生后第35天的宁夏滩羊的二毛皮皮肤的组织学特性,比较层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)在滩羊皮肤的分布特征,为解析滩羊毛囊发育的分子调控机制提供参考。结果显示,滩羊皮肤表皮层为复层扁平上皮,真皮层胶原纤维和网状纤维较多。免疫组织化学显示,ColⅣ在二毛皮毛囊毛根和内根鞘强阳性表达;LN在角质层呈强阳性表达,在次级毛囊的内根鞘和外根鞘呈高密度强阳性表达;HSPG在角质层、初级毛囊的内跟鞘和外根鞘、皮脂腺等结构均呈弱阳性表达。统计表明,ColⅣ及LN在滩羊皮肤组织中的表达强度极显著高于HSPG(P0.01)。滩羊二毛皮形成次级毛囊围绕初级毛囊的毛囊群结构,皮肤中大量网状纤维分布于毛根、次级毛囊外根鞘及间质结缔组织,ColⅣ及LN与次级毛囊生长发育密切相关,在滩羊绒毛发育中发挥重要作用。     

禽骨髓细胞瘤病自然病例的病理学研究

对禽骨髓细胞瘤病显性型病鸡、ELISA阳性的隐性型病鸡和阴性对照鸡进行了病理学研究。结果表明 ,临床症状明显的显性型病鸡肝、脾、肾、睾丸 (或卵巢 )、肺等组织有灰白色结节状病灶和不同程度的肿胀 ,甚至在股骨或肋骨等处出现大小不一的硬固肿块 ,镜检病变部位有大量髓细胞样瘤细胞 ,呈典型的骨髓细胞瘤病的病理特征。电镜下瘤细胞病变明显 ,瘤细胞胞膜下疑似病毒样粒子 ;在自然病例肾悬液感染的鸡胚成纤维细胞培养物中巨噬细胞的膜性结构上发现增殖的病毒样凸起。ALV JELISA抗体检测试剂盒检出阳性、无明显临床症状和眼观病变的隐性型病鸡 ,光镜下骨髓、肝、卵巢、心肌等组织中可见与显性型相同的髓细胞样瘤细胞 ,但数量较少。ELISA抗体检测阴性对照鸡骨髓中胞浆含有嗜酸性颗粒的髓细胞明显少于阳性鸡 ,除在肝、卵巢等组织中偶尔出现外 ,其他组织很少见到。