抗丁丙诺啡单克隆抗体的制备

目的建立抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备高特异性的丁丙诺啡单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。方法在丁丙诺啡的分子上连接活性羧基基团，通过缩合反应将丁丙诺啡半抗原连接于血蓝蛋白（KLH）和小牛血清白蛋白（BSA），形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb／c小鼠，通过细胞融合，筛选等杂交瘤技术，建立稳定的分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过腹腔注射杂交瘤细胞，诱导小鼠产生含有单抗的腹水。用辛酸-硫酸铵加亲和层析法纯化抗丁丙诺啡单克隆抗体。采用酶联免疫反应和胶体金膜层析实验测定丁丙诺啡单抗的特异性以及免疫反应动力学参数。结果共获得3株分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为7E6，6G4和3C2。7E6，6G4抗体灵敏度为10．0ng／ml，3C2抗体灵敏度为20．0ng／ml。7E6，6CA和3C2抗体的亲和常数分别为3．6×10^-9 mol／L，4．3×10^-9 mol／L和6．3×10^-9 mol／L。特异性测试结果表明7E6和6G4抗体与40种药物、毒品无任何交叉反应，而3C2抗体与吗啡有交叉反应。结论杂交瘤细胞株7E6和6G4产生的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有很高的特异性和灵敏度。     

胶体金标记苯丙胺单克隆抗体免疫试剂盒研究

目的建立一种准确、快速、简便的检测尿液中苯丙胺(AMP)的胶体金免疫层析技术。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗AMP单抗,将AMP—BSA抗原固相于硝酸纤维素膜上,制备胶体金免疫层析测试条。通过尿液、血液和唾液中的可能存在的苯丙胺成分与测试条上的苯丙胺-BSA完全抗原竞争结合有限的单抗结合位点,来判定检测结果。结果用ICT法和GC/MS检测217份尿样,本法检测阈值为1000ng/mL,特异性为99.17%,准确性为99.54%。结论ICT法检测尿液中的AMP特异性强,灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备,具有广泛应用价值。     

SELEX技术筛选甲基苯丙胺适配子

目的利用SELEX筛选甲基苯丙胺适配子,并初步鉴定获得甲基苯丙胺的适配子。方法体外合成全长为76 bp的随机ssDNA文库,以甲基苯丙胺完全抗原偶联到溴化氰活化琼脂糖上,作为固相靶分子对随机ssDNA文库进行SELEX筛选。利用SPR测定适配子和甲基苯丙胺的结合率和特异性,通过MFOLD分析软件对适配子进行二级结构预测和结合位点分析。结果经过10轮筛选后,甲基苯丙胺适配子的结合率由88.3 RU上升到113.7 RU,表明特异性适配子得到逐步富集。获得的适配子进行测序,得10个序列,二级结构均为茎-环结构,可能是适配子和甲基苯丙胺结合的结构基础。结论本研究使用SELEX技术筛选小分子毒品甲基苯丙胺适配子的方法,获得与甲基苯丙胺特异性结合的适配子序列,揭示了适配子与甲基苯丙胺结合的基本结构,为制备特异性甲基苯丙胺检测试剂盒奠定了基础。     

唾液中乙醇含量检测试剂条的研究

目的根据唾液和血液中乙醇含量相关性的实验结果,建立了一种简便快速、准确可靠的检测唾液中乙醇含量的方法。方法本方法利用酶学原理,将一定量乙醇氧化酶(ALO)和过氧化物酶以及底物四甲基联苯胺(TMB)固定于试剂条上,当样本中含有乙醇时,酶学反应使底物TMB显色,通过比对反应的不同颜色,对样本中乙醇质量浓度进行半定量。结果用本方法检测300个自愿者的唾液,和用GC/MS法对照检测志愿者唾液中的乙醇含量,定量结果基本一致。本产品检测过程仅需2min,其检测的阈值为0.1mg/mL,敏感度为96.5%,特异性为91%,准确性为94.7%。结论采用酶学方法制备的乙醇含量检测试剂条,通过显色反应对唾液中的乙醇含量进行半定量检测,其特点为快速简便、准确可靠,适合现场使用。     

可卡因及其代谢物苯甲酰爱康宁胶体金检测试剂盒的研制

目的根据胶体金免疫层析的原理,建立一种可以在现场快速检测可卡因及其代谢物苯甲酰爱康宁的方法。方法将胶体金标记的抗可卡因单克隆抗体均匀浸涂在玻璃纤维膜上,用点膜仪将可卡因的完全抗原以及羊抗鼠多抗在硝酸纤维素膜上划线,分别作为可卡因的检测区（T）和质控区（C）。并且对样品垫用0.2%Tween 20和0.5%PVA封闭处理。样本（尿样、唾液、血样等）中游离的可卡因及其代谢物同包被的完全抗原分别免疫竞争结合胶体金标记的抗可卡因单抗。肉眼观察试剂盒的质控区和检测区上有无紫红色带来判读结果。结果可卡因胶体金检测试剂盒对65种毒品、药物的特异性测试中仅识别可卡因及其代谢物。对人体尿样中的可卡因和苯甲酰爱康宁检测阈值均为300ng/mL。与GC/MS对照试验,其准确性分别为98.9%和98.6%。在常温下能稳定保存2年。结论该可卡因检测试剂盒在5min内可以检测出样本中的可卡因及其代谢物成分。     

FluMag-SELEX技术体外筛选识别氯胺酮的DNA适体

目的 利用FluMag-SELEX技术筛选出能特异性识别氯胺酮的DNA适体. 方法 体外合成78 bp的随机ssDNA文库,氯胺酮作为靶分子,表面修饰甲苯磺酰基的磁珠作为固相载体筛选特异性识别氯胺酮的适体.经过13轮筛选后进行DNA克隆测序,并进行一、二级结构分析.通过对荧光强度的分析检测适体的亲和性、特异性和Kd值. 结果 获得2条ssDNA适体Apt#4和Apt#8,能够特异性地与靶分子氯胺酮结合,Kd值分别为0.59和0.66 μmol/L.二级结构预测以茎环和G-四聚体为主,茎结构可能是适体结构稳定的基础,环和G-四聚体结构可能是与氯胺酮特异性结合的关键. 结论 FluMag-SELEX技术可以较好地提高适体的筛选效率,得到能特异性识别氯胺酮的DNA适体,有望用于氯胺酮的快速检测.     

巴比妥单克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的建立抗巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗巴比妥单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法将巴比妥分子环状丙二酰脲环上氨基引入活性羧基,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到完全抗原BAR-KLH和BAR-BSA,并用紫外分光光度计鉴定。用BAR-KLH免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备巴比妥单克隆抗体,饱和硫酸铵法、亲和层析法纯化,并进行免疫学特性鉴定。结果完全抗原偶联成功,其偶联率为30∶1;筛选出1株杂交瘤细胞命名为5C6,其产生的单抗效价为1∶6.4×104,属于IgG1/kappa,抗体亲和力常数为2.27×108L/moL。纯化后的巴比妥单克隆抗体用ELISA法检测其灵敏度为130ng/mL,并与其他7种镇静催眠类药物交叉反应率小于1%。结论本研究制备的杂交瘤细胞株5C6分泌的抗体具有高特异性和灵敏度。     

在改革的春风中成长——中共十一届三中全会以来农工党山西省委会的发展概况

中共十一届三中全会重新确立了实事求是的思想路线后，我国进入了改革开放和社会主义现代化建设的新时期，多党合作制度作为我国的一项基本政治制度也实现了拨乱反正，多党合作事业呈现出蓬勃发展之势。沐浴着改革开放的春风，山西的农工党组织得以重建和成长。     

高特异性三唑仑代谢物单克隆抗体的制备

目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。     

适配体在毒品毒物分析中的应用

适配体是体外合成的能与蛋白质、其他小分子物质、有机离子等等各种配体特异结合单链DNA/RNA,是由SELEX(体外指数富集配体系统进化技术)技术筛选得到,适配体具有对靶标的高特异性和亲和性、合适的化学稳定性、无免疫原性和毒副作用的优点。利用适配体的这些优越性是得适配体可以作为生物识别分子元件应用于传感器及分析试纸中,进而可以快速高效的检测毒物毒品。为了大大提高办案的效率,为维护法治、打击犯罪提供更好的技术支持,通过介绍了一种基于适配体(aptamer)为识别元件的高选择、高灵敏、快速的毒物毒品检验方法。