反向表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒Bartha-K61株的构建

为构建以伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株为载体的反向表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(rgp)的重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Sph Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为反向连接,阳性重组子命名为p8AA-EGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/EGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的效价(TCID50)为108.25/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性.     

硅珠法提取DNA的灵敏度及抗抑制能力探究

硅珠法提取DNA具有灵敏度高、提取产物纯净等优点,在法医领域有广泛应用。采用实验室模拟的方法,以007标准DNA以及抗凝冻存血液为样品,对硅珠法的提取灵敏度进行了系统测试,并选取7种常见抑制物,包括灰尘、铁锈、油脂等,对硅珠法的抗抑制能力进行了探究。结果显示,硅珠法与磁珠法相比,在提取灵敏度上并无明显差异,当DNA达到300pg时,出位点率皆为95%以上,当千倍稀释血量达到10ul时,出位点率皆为86%以上。在抗抑制能力测试中,硅珠提取法对所选取的7种抑制物都有良好的抗性,当抑制物的量加倍时,仍可获得足够的STR位点。结果表明,硅珠法具有良好的灵敏度及抗抑制能力,可广泛适用于各种法医检材。