基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物

目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。     

基于国产遗传分析仪的毛细管电泳筛分介质的制备

目的制备一种毛细管电泳筛分介质,将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上。方法通过聚合反应、冷冻干燥得到白色固体聚丙烯酰胺(LPA),经溶胶缓冲液溶胀后获得所需的毛细管电泳筛分介质。对其分子量、结构等关键性能指标进行表征;并将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上,根据空间校正、光谱校正及STR检测结果对其筛分性能进行评价。结果制备的筛分介质Mw 1.8×105Da,Mn 1.2×105Da,多分散性1.5;结构正确且纯度高;在GA118-16A型遗传分析仪上能够建立空间校正、光谱校正文件;能够有效分离相差1bp的DNA片段,峰型尖锐、无杂峰、无拖尾、无丢峰现象。结论该方法制备的筛分介质完全可应用于GA118-16A等国产遗传分析仪。     

两个体混合样本比例的PCR-STR检测研究

目的探讨PCR-STR检测两个体混合样本比例的灵敏度。方法按不同比例将两个体全血、单个核细胞及纯DNA 3种不同的样本进行混合,应用AB I公司生产的profile p lus商品化试剂盒多重PCR扩增后,用AB I3100基因分析仪进行毛细管电泳,检测基因座及其峰面积,并就混合样本中两单个核细胞样本DNA含量百分比与扩增前混合样本比例的关系进行相关分析。结果当样本混合比例为4%+96%时,可明确区分混合样本中两个体的基因型,且扩增前混合细胞百分率与扩增后两者峰面积比值呈直线相关。结论PCR-STR检测两个体混合样本比例的灵敏度有一定范围,并可进行半定量。     

海洛因毛细管电泳分析

应用毛细管电泳测定毒品海洛因,获得了满意的结果,证明毛细管电泳具有样品制备简单、检验温度不高样品不会被分解、节省试剂、定性准确、操作直观、简便、省时等优点,是海洛因检验分析的重要手段之一.     

PGM1和EAP同步等电聚焦电泳分型

采用薄层等电聚焦电泳PAGIF，结合反转显色，同时对EAP及PGM1亚型分型。结果在同一块凝胶板以两个表面分别显现出清晰的同工酶谱带，结果互不干扰。EAP检出AA、BB、BA三种表型PGM1检出十种亚型。PAGIF结合双面反转显色可同时对EAP及PGM1亚型分型，累积个体识别率为0．87，可应用于亲子生定。     

DYS19、DYS391、DYS439三个Y-STR荧光标记复合扩增的法医学应用研究

自Casanova(1985)和Nago(1986)分离出能识别Y-DNA的特异性探针,学术界相继开始对Y-DNA为遗传标记的群体研究[1、2].Y-DNA具有独特的特异性:(1)Y-DNA属父系遗传,父亲的Y染色体能完整传递给儿子;(2)Y-DNA遗传标记为连锁遗传,属单倍型.因此,对Y染色体的研究,是对常染色体DNA和mt DNA遗传标记必要的补充.     

毒鼠强诱导细胞DNA损伤的彗星电泳检测

目的　研究毒鼠强对小鼠淋巴细胞和脑细胞DNA的损伤作用。方法　分离健康小鼠的淋巴细胞和脑细胞 ,以彗星电泳的方法测定不同浓度毒鼠强处理后的细胞DNA损伤。结果　 1/2 0～ 1/2LD50 剂量组的毒鼠强均可引起淋巴细胞和脑细胞不同程度的DNA损伤 ,与对照组呈极显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论　毒鼠强引起细胞DNA断裂损伤 ,并呈现明显的剂量 -效应关系。     

尿中氯氨酮的固相萃取及毛细管电泳分析

目的:建立尿中氯氨酮的固相萃取方法及毛细管电泳分析条件。方法:添加为4-苯基丁胺为内标物用固相萃取剂对检材进行萃取有机溶剂洗脱,再用毛细管电泳分析技术对浓缩提取液进行分析。结果:用该方法对不同配比的缓冲溶液的考查实验,最终确定了分析氯胺酮的最佳缓冲体系为:65MmoL/L磷酸二氢钠、10MmoL/L四硼酸钠、25%甲醇,pH5。并通过实验证明,对尿中氯胺酮的固相萃取较理想的条件为:以4-苯基丁胺为内标,在pH8的弱碱性条件下,以GDX-301为吸附剂,甲醇或乙醇洗脱。结论:本方法使内标物与待测物得到较好分离,是一种极有应用前景的分离分析方法,具有一定的推广价值。     

三种绦虫蚴囊液抗原的SDS-PAGE分析

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对绵羊棘球蚴囊液和原头节抗原分析结果表明，前者共有多肽带１９条，其中６６和５９ｋｕ多肽带为主带；后者共有多肽带２９条，缺乏主带成分。这两种抗原在多肽组成和含量方面差异明显。绵羊细颈囊尾蚴囊液和脑多头蚴囊液抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，前者共有多肽带１５条，其中主带成分为６６，５９，４０和１２．５ｋｕ多肽带；后者共有多肽带１３条，其中６６，４０和１２．５ｋｕ多肽带为主带。三种绦虫蚴囊液抗原之间的共有成分为９４，６６，５９，４３和４０ｋｕ多肽带。棘球蚴囊液的４２，３４．５，３３和２４．５ｋｕ多肽带组分也为细颈囊尾蚴所共有，而５５，５２，４１，３９，３８．５，１４ｋｕ以及１条分子质量小于１０ｋｕ的多肽带为棘球蚴囊液的特异性组分     

旋毛虫不同株同工酶比较的研究

本文对7株旋毛虫6种同工酶进行了分析比较,各株旋毛虫原始虫种分别来自哈尔滨、长春、天津、河南邓县、新野、云南保山及西安。除长春株畜主为犬外,其余均为猪。采用IEF电泳,分别显示6种酶:GPI、PGM、G6PDH、MDH、ALAT及ASAT。结果长春犬株与哈尔滨猪株在GPI、PGM、G6PDH、MDH、ASAT5种酶的同工酶谱均有差异。同工酶分析及长春犬株与哈尔滨猪株在其它生物学特征方面的差异提示它们可能为姊妹种。