新城疫病毒HN蛋白及其基因的分子生物学

新城疫（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅ,ＮＤ）是一种在鸡群中具有高度传染性的病毒性传染病,能感染雉、鸽和野生鹦鹉等多种鸟类。目前全世界已分离出致病性不同的ＮＤＶ毒株达数十种之多,不同的毒株致病性差异很大,可分为速发型（Ｖｅｌｏｇｅｎｉｃｓｔｒａｉｎ...     

猪链球菌病三价灭活疫苗的研究--安全性与免疫效力试验

在对长春地区临床分离的 2 0株猪源致病性链球菌基因分型的基础上 ,挑选出分属 3个血清型的 4株毒力强、免疫原性好且遗传距离较远的猪链球菌作为疫苗株 ,研制猪链球菌病氢氧化铝胶三价灭活疫苗。该疫苗对小鼠、断奶仔猪、育肥猪和妊娠母猪安全性好 ,无不良反应 ,对母猪繁殖性能无影响。小鼠效力试验证实 ,该疫苗的保护率为 10 0 % ,优于单价灭活疫苗和猪链球菌病活疫苗 ;田间效力试验证实 ,2种三价灭活疫苗 (菌液浓度分别为 2× 10 9CFU/mL和 4× 10 9CFU/mL)对猪的保护率分别为 83.3%和 10 0 % ;经田间试用免疫效果较好 ,试验组猪发病率和死亡率分别为 4 .2 %和 1.8% ,对照组猪发病率和死亡率分别为 2 6 .8%和 13.4 % ,经卡方检验 ,试验组与对照组相比差异极显著。表明该疫苗的安全性好 ,免疫效力高 ,完全适用于本地区猪链球菌病的免疫防制     

GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建及原核表达

为构建具有示踪特性的新城疫病毒(NDV)HN基因乳酸菌穿梭表达载体,采用PCR方法扩增NDV HN基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因,将两基因克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,转化入表达宿主菌BL21(DE3)后利用IPTG诱导表达。用荧光显微镜检查重组菌的绿色荧光效应,采用SDS-PAGE和Western-blotting检测其在大肠杆菌中的表达情况。结果显示,NDV HN和GFP基因与表达载体pW425et正确重组。荧光显微镜下可见阳性重组菌落的绿色荧光,且该重组菌传代30代次以上,荧光效应依然稳定。SDS-PAGE显示表达出约63ku的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符。Western-blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性血清所识别,具有反应原性。构建了GFP标记的重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体且能在大肠杆菌中表达。     

猪链球菌分型方法的比较

采用传统的血清学分型方法和随机扩增多态性DNA分析 (RAPD)方法对长春地区分离的猪链球菌进行分型。结果表明 ,RAPD法比传统血清学分型方法更能反映菌株间的亲缘关系 ,并从分子水平上揭示了不同菌株的遗传距离 ;RAPD法具有快速、简便、分型性高等优点     

鹅源新城疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank上鹅源新城疫病毒NA-1株M基因的序列,在保守区域设计并合成了1对引物,采用荧光嵌合法(SYBR Green Ⅰ)建立了检测鹅源新城疫病毒的实时荧光定量PCR(real-time PCR).以鹅源新城疫病毒NA-1株反转录产物cDNA为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析.结果,标准曲线的Ct值检测范围为23～36,相关系数(r2)为0.992;无引物二聚体及非特异性产物,且Tm=(83±0)℃.结果表明,建立的检测鹅源新城疫病毒实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏性高,能为以后快速诊断鹅源新城疫病毒提供有效保障.     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒株F蛋白前体(F0)F2片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白(BSA)化学偶联制备成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清.经ELISA检测,该抗体与NDV弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒(FPV)、鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)、NDV强毒F48E8株和四平株呈阴性反应.试验结果证明该抗体可以用于鉴别NDV弱毒株.     

犊牛血清对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖及其活疫苗的影响

为了研究在同一培养条件下,不同含量犊牛血清(FCS)对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1-R株病毒含量的影响,以及用其生产的疫苗质量、免疫效果的变化情况,采用4个不同含量的FCS对HP-PRRSV JXA1-R株进行了繁殖,并测定病毒毒价及疫苗样品的效价,监测免疫猪的体温变化,用ELISA方法检测免疫猪PRRSV特异性抗体水平。结果显示,用15～30mL/L犊牛血清培养的病毒的含量没有较大变化,但是随血清含量的增加而略有增高。样品疫苗的病毒含量没有明显变化,但是在免疫后测温过程中发现,血清含量高的样品疫苗在接种后第2～4天体温有短暂的高温波动,随后正常。采血检测抗体发现,血清含量高的样品疫苗产生的抗体也早3～5d。本试验结果可以为HP-PRRSV的培养及疫苗工艺的改进提供有效的参考数据。     

推进乡村治理法治化建设的路径选择

推进乡村治理法治化建设是推进乡村治理体系和治理能力现代化的必然要求。当前我国乡村治理法治化建设取得了很大成效,但同时仍面临治理主体法治意识亟待提高、法治资源不足、法治宣传效果不理想、有些村规民约与法律法规相矛盾等现实挑战。为此,应着力增强治理主体的法治意识、加大法治资源供给、提升法治宣传实效、调适法律法规与村规民约之间的关系,深入推进乡村治理法治化建设。