应用凝胶盘状电泳和ELISA分析肌旋毛虫抗原

本试验是应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE),分析肌旋毛虫抗原的组分,并用ELISA检测盘状电泳蛋白带的抗原活性,制备纯化的蛋白质抗原,实验结果证明,PAGE纯化分离的主要血清学相应抗原为Ag-OI,经ELISA检测水平达到0.7微克/毫升,比Ag-O(粗制)抗原的灵敏度提高7倍,比Ag-G(经Sephadex G200柱层析提取)抗原的灵敏度提高3倍。为寻求诊断用的敏感特异的抗原成份,提供了实验依据。     

猪小肠碱性磷酸酶提取的研究

本试验从成年猪小肠粘膜提取碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase 简称AKP),经DEAE纤维素纯化获得每毫克20000单位活力的AKP,取得了相当满意的效果。经盘状脉电凝胶分析,呈现一条粗蛋白带和两条细带。酶染色结果,粗带呈现酶活性。将该酶用于免疫酶标记技术,标记在兔抗猪IgG、羊抗人IgG、羊抗兔IgG,分别对猪旋毛虫病、人血吸虫病、兔血吸虫病进行检测均得到满意结果,并与辣根过氧化物酶比较结果一致。 材料与方法 (一)酶活力测定 在pH10碳酸盐缓冲系统中,37℃条件下与底物反应。以每毫克固体酶,每分钟水解出底物(磷酸苯二钠)1微克酚为1单位。按表1程序测定:     

ELISA诊断猪旋毛虫病条件的研究

七十年代酶标技术广泛用于人、畜寄生虫病诊断。1976年Ruitenbers等用旋毛虫幼虫制备的粗抗原,以酶标技术生前检测猪旋毛虫(人工感染)病,获得比荧光抗体技术测得更为满意的结果。本文用酶标间接法(ELISA)。以自己研制的碱性磷酸酶(Alkaline Phosphrase、AKP)标记兔抗猪IgG,磷酸苯二钠为底物,对旋毛虫病猪和阴性猪进行检测,同时对抗原、抗体、pH、温度和时间进行了探讨。     

猪蛔虫蛋白分子聚丙烯酰胺凝胶电泳的分析

聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)是先由Crowlde和Bednarile应用和完善起来的。它具有三维空间的网状结构,不但有浓缩效应和电泳效应,而且有分子筛作用。近年来国内应用很广泛,它不仅用于免疫沉淀反应,而且更多地用于高分子物质的分离、提纯和鉴定。生物组织蛋白质大小分子之间的差别,能够很好地在PAGE的盘状区带电泳中表现出来,从而被应用于生物间的差异及生物种群的鉴定。本试验旨在用PAGE技术,建立猪蛔虫不同器管组织蛋白质在PAGE中的标准区带,比较雌、雄虫之间和各器官组织之间蛋白质分子的差异,并对PAGE在这方面的应用价值作一个试验性的探讨。