SPAG11基因在雄性牦牛生殖器官中表达的检测

为了检测精子相关抗原11(sperm-associated antigen 11,SPAG11)基因在雄性牦牛生殖器官中的表达谱并分析其组织表达特性,从牦牛附睾头总RNA中RT-PCR扩增SPAG11基因(SPAG11C、D、E、U、V和W),半定量RT-PCR分析SPAG11mRNA在牦牛生殖器官中的表达水平。采用合成的SPAG11E多肽制备牦牛SPAG11E多克隆抗体,免疫组织化学检测SPAG11E蛋白在睾丸和附睾中的表达及定位情况。结果显示,SPAG11C、U、V和W基因在睾丸和附睾相对低表达,而SPAG11D和E基因相对高表达;SPAG11C和U基因在输精管相对低表达,而SPAG11E相对高表达;除SPAG11D在卵巢相对低表达外,SPAG11基因在其他雌性生殖器官均不表达。免疫组织化学结果显示,SPAG11E蛋白在睾丸的精子细胞和附睾内壁精子头部表达。结果表明,SPAG11基因的表达具有组织特异性,提示它在牦牛睾丸和附睾中可能发挥重要的免疫功能和生殖功能。     

牦牛舌抗菌肽基因cDNA的克隆及其在生殖系统中的表达

为了解牦牛舌抗菌肽(LAP)基因序列的特征及其在生殖系统中的表达情况,采用RT-PCR法从牦牛睾丸、附睾组织中扩增LAP基因,重组到pMD19-TSimple载体中,进行了测序和序列分析,并应用RT-PCR检测了雌性牦牛生殖系统(卵巢、输卵管、子宫、阴道等组织)中LAPmRNA的表达。结果显示,克隆的LAP基因包含一195bp的完整开放阅读框(ORF),与牛LAP基因相似性达97.9%,该ORF编码的64个氨基酸含有β-防御素特征性结构,即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基;LAP在牦牛生殖系统上皮组织中均有表达。推测LAP在牦牛生殖系统的先天免疫中具有重要作用。     

牦牛S100A12基因的克隆及其在生殖器官中表达情况的检测

为了解S100A12基因在牦牛生殖器官中的表达情况,采用RT-PCR技术从牦牛脾组织中扩增S100A12基因序列,用半定量RT-PCR技术和免疫组织化学染色方法分别检测S100A12基因mRNA和S100A12蛋白在牦牛脾、淋巴结、乳腺及生殖器官中的表达。结果显示,克隆的牦牛S100A12基因序列片段大小为279bp,包含一个完整开放阅读框(ORF),推导编码92个氨基酸;S100A12mRNA和蛋白在脾中表达量相对最高,在睾丸、附睾、淋巴结、乳腺、卵巢中相对强表达,在阴茎、阴道、子宫(子宫角、子宫体和子宫颈)中相对弱表达。结果表明,S100A12mRNA和蛋白在牦牛生殖器官中均有不同程度的表达,提示其在牦牛生殖过程中可能发挥一定的作用。     

深Ⅱ度烫伤早期犬血液生理指标及四种细胞因子质量浓度的动态变化

以中华田园犬为研究对象,用99℃多层纱布覆盖犬腰荐部多个面积为3cm2区域皮肤,制备深Ⅱ度烫伤模型,采集烫伤前和烫伤后第6、12、24和48小时血样和烫伤皮肤组织样品,检测血液生理指标和细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的质量浓度。结果显示,烫伤后犬血液白细胞、中性粒细胞和单核细胞的浓度均显著升高(P0.05),烫伤后第24小时达到峰值,淋巴细胞的浓度显著降低(P0.05),烫伤后第12小时降至最低;犬血清和组织中IL-6、IL-10和TNF-α的质量浓度在烫伤后第6~24小时均显著高于烫伤前(P0.05),烫伤前后血清中IL-8的质量浓度未发生显著变化(P0.05),组织中IL-8的质量浓度烫伤后第24小时显著升高(P0.05)。结果表明,深Ⅱ度烫伤早期(48h以内)试验犬呈现全身性炎性反应特征,血清和烫伤组织中促炎/抗炎细胞因子水平不同程度升高。     

藏獒源犬细小病毒的分离鉴定

为弄清犬细小病毒(CPV)在藏獒中的流行情况,将临床上经胶体金试纸检测为阳性的藏獒直肠棉拭子8份处理后接种猫肾传代细胞(F81细胞),分离到6株病毒,对其进行了血凝试验(HA)、半数组织培养物感染剂量(TCID50)的测定,理化性质鉴定,提取分离株DNA并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其一特异性片段和VP2全序列,并与GenBank上登录的CPV毒株进行比对。结果表明,接毒后第6～13天在F81细胞上出现了明显的细胞病变(CPE),表现为细胞融合、变圆或拉长;所得分离株能使猪红细胞发生凝集反应,血凝效价为27～211;能抗酸(pH3)、热(60℃)、200mL/L乙醚、480mL/L氯仿;从细胞培养物中分别扩增出与特异性片段825bp一致以及与VP2全基因1 755bp一致的条带。将扩增的VP2序列与GenBank上登录的HQ883267.1、FJ222823.1、FJ005214.1等10个国内外CPV分离株的VP2序列进行比对;结果显示,与北京地区一分离株(HQ883267.1)的同源性最高,为99.0%～99.6%。所得分离株为不同毒株,但均为CPV-2a型。     

梅花鹿结核病的诊断

20 0 2年 1月四川省某野生动物园梅花鹿出现咳嗽、不喜运动、腹泻、粪便呈暗黑色糊状、渐进性消瘦等症状。 1个多月后陆续死亡数头。其间曾用多种抗生素治疗效果不佳。取病死鹿肺组织、肠系膜淋巴结、肠内容物进行实验室细菌检验 ,分离出分枝杆菌 ,确诊该病为梅花鹿结核病。1　临床症状病鹿咳嗽 ,不喜运动 ,运动后出现痉挛性咳嗽 ;腹泻 ,粪便呈暗黑色糊状 ;渐进性消瘦 ,从出现症状至死亡持续 1个多月。2　剖检变化病死鹿躯体消瘦 ;大部分肺组织肝样变 ,坚硬 ,表面凹凸不平 ,散在粟粒大至核桃大的干酪样坚硬结节 ,部分肺组织出血 ,表现颜色不…