不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白AⅡ基因的克隆及比较

为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因序列的同源性在95.1%以上,编码氨基酸序列的同源性在97.3%以上,而且所有分析序列均具有明显的保守结构域,说明不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ具有很高的保守性;相对于ATCC35624和YP004393583.1来说,它们之间的差异主要表现在,CVCC3700、QXF、WL161、NJ34、NN725和BAF63175.1的OMPAⅡ基因缺失了3个碱基(CAA)。本研究结果为OMPAⅡ作为维氏气单胞菌基因工程亚单位疫苗候选成分提供了一定的理论依据。     

维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的克隆与生物信息学分析及原核表达

为研究维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的可能相关功能,扩增HisJ基因,并通过同源性比较构建HisJ基因的系统进化树,利用相关软件对HisJ基因编码的蛋白进行生物信息学分析,并对HisJ基因进行原核表达以及表达产物的免疫原性进行检测。结果显示,HisJ基因全长774 bp,编码247个氨基酸,TH0426株HisJ与维氏气单胞菌属同一分支,具有信号肽、跨膜区,属于膜外蛋白,二级结构主要以α螺旋、无规则卷曲为主。经SDS-PAGE分析发现,重组菌可表达出融合性蛋白,并且以10‰的体积接菌、IPTG终浓度为1.0mmol/L诱导8 h表达效果最好。Western-blot分析结果显示,重组HisJ蛋白在大肠杆菌中被成功表达且能被小鼠抗HisJ蛋白血清识别,表明表达的HisJ蛋白具有一定的免疫原性。为进一步对HisJ蛋白的结构功能及与致病性、耐药性关系的研究奠定了基础。     

维氏气单胞菌毒力因子的研究进展

为给维氏气单胞菌致病机制及疫苗深入研究奠定基础,综述了近年来国内外对维氏气单胞菌毒力因子研究的进展,包括外毒素、胞外蛋白酶、黏附因子以及分泌系统。     

屎肠球菌对鲤鱼非特异性免疫酶活性和抗病力的影响

为探讨饲料中添加屎肠球菌对鲤鱼的非特异性免疫酶活性和抗病力的影响,饲喂期间选取初始体质量为(28±0.3)g的健康鲤鱼,饲喂添加3种不同浓度(1×107、1×108、1×109CFU/g)屎肠球菌的颗粒饵作为试验饲料。结果显示,与对照组相比,各组血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力随时间增加持续上升,溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化物酶(POD)的活力和Ig M质量浓度呈上升趋势,但无显著差异(P0.05);在首次免疫后第28天时添加量为1×108CFU/g组的AKP和POD活力最高,在第35天时添加量为1×108CFU/g的SOD和LZM活力最高,1×107CFU/g、1×109CFU/g相比1×108CFU/g活力有所降低,但均高于对照组。Ig M质量浓度显著高于PBS组(P0.05),第14天血清中Ig M水平达到最高。首次免疫后第42天以维氏气单胞菌TH0426攻毒,攻毒14 d后各组的累积死亡率差异显著(P0.05),与对照组相比,添加1×108CFU/g屎肠球菌的鲤鱼存活率最高为58%,添加1×107和1×109CFU/g的存活率分别为42%和38%。综上所述,饲料中添加屎肠球菌可有效增强鱼体非特异性免疫力,且具有较高的免疫保护效果,其中1×108CFU/g和1×109CFU/g效果较好。     

维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白的筛选

为筛选维氏气单胞菌胞外产物的免疫反应蛋白,提取维氏气单胞菌TH 0426株胞外产物,利用双向电泳技术对其进行分离,比对蛋白胶与免疫印迹膜上的蛋白反应点,进行质谱鉴定。结果显示,应用免疫蛋白质组学方法筛选维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白,共得到24个免疫反应蛋白点,成功鉴定18个,经分析为11种蛋白,分别是肽酶S8、长链脂肪酸转运蛋白、溶血素样毒素、膜蛋白、主要外膜蛋白O mp AⅠ、麦芽糖、ABC底物结合转运蛋白和几种假定蛋白。本研究结果为维氏气单胞菌疫苗的研制奠定了基础。