猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR方法的建立和应用

猪圆环病毒3型(PCV3)是近两年报道的一种新病毒,为实现快速检测PCV3的目的,笔者以我国PCV3全基因组为模板设计合成了1对引物和1条TaqMan探针,建立了检测PCV3的实时荧光定量PCR方法。经过标准曲线分析、敏感性、特异性和重复性等一系列试验,表明该方法具有特异性强、敏感性高以及重复性好的特点。试验结果表明,阳性PCV3标准品DNA稀释10-8后(浓度为50 copies/L)仍然可以被检出,不同浓度的组间和组内重复性试验结果显示变异系数均小于3%,最后用36份临床样品进行了应用性评价,结果从中检测出9份阳性样品,表明所建立的方法是一种高效的可用于PCV3的分子诊断技术。     

猪肺炎支原体P97 C末端蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最小抗原决定区域,并通过生长抑制试验及抗黏附特性试验对抗原表位进行了分析。结果显示,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株A3C9和B4D5,并成功鉴定出P97C末端蛋白的2个独立线性表位F905PMAFSY911和G991TPNQGKKAE1000。2株单抗对猪肺炎支原体的生长均有一定的抑制作用,但对其黏附特性没有显著抑制作用。     

牛霉形体PCR检测方法的建立

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法.并对该方法进行了敏感性和特异性试验.该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性.利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法.