乙型脑炎病毒E蛋白基因的原核表达及ELISA抗体检测方法的建立

通过PCR方法扩增流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因,全长1 500 bp,将其连入经双酶切的pET-28a(+)载体,构建了重组原核表达质粒pET28a-E.将pET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,进行SDS-PAGE分析.结果显示,E基因在大肠杆菌BL21中获得高效表达,表达的蛋白分子质量约53 ku.Western-blot分析表明,该表达产物具有良好的抗原性.在此基础上,利用该蛋白初步建立了检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,并用武汉科前生物制品公司生产的猪JEV ELISA抗体检测试剂盒同时对250份临床采集的猪血清样品进行了检测,结果这两种方法的符合率达到92%,表明建立的ELISA方法具有较高的灵敏性和特异性.