NAC在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中的保护效应

为研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中的保护作用,本试验用10mol/L醋酸镉和100 mol/L NAC单独或联合处理PC12细胞24 h后,用MTT法检测细胞存活率;用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测细胞色素C(cytochrome c,Cyt C)的释放以及Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达量。结果,NAC能显著或极显著抑制镉引起的细胞存活率下降,凋亡率上升,Cyt C从线粒体释放进入胞浆中,Bcl-2/Bax比值下降,Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达量提高(P0.05或P0.01)。上述结果说明,NAC在镉致PC12细胞凋亡线粒体途径中具有保护作用。     

铅镉联合对体外培养大鼠肾小管上皮细胞存活及凋亡的影响

采用机械筛网结合酶消化法建立了大鼠原代肾小管上皮细胞培养模型,在传代细胞增殖活性最强时间段进行铅、镉单独染毒或联合染毒.通过CCK-8还原法和流式细胞仪检测不同时间铅、镉对细胞存活率和凋亡率的影响.结果显示,铅、镉单独染毒高剂量组从第6 h开始、低剂量组从第12 h开始,其细胞存活率显著低于对照组(P＜0.05);铅、镉联合染毒组从第3 h开始,细胞存活率显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01)低于对照组,且存活率的降低幅度与剂量呈正相关;染毒后第12 h,各组的凋亡率均极显著高于对照组(P＜0.01),铅、镉联合染毒组的细胞凋亡率显著高于各相关单独染毒组(P＜0.05),呈明显的剂量-效应关系.     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢的影响

为了研究镉对大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢的影响,以原代大鼠大脑皮质神经细胞为模型,用不同浓度的醋酸镉(0、5、10、20μmol/L)处理原代大鼠大脑皮质神经细胞24h后,流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平,试剂盒测定线粒体中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性和丙二醛(MDA)含量,Western-blot法检测SDHA蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,10或20μmol/L醋酸镉组中ROS水平、MDA含量极显著升高(P0.01),SOD、CAT、GSH-Px、SDH活性极显著下降(P0.01),SDHA蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01)。结果表明,镉能引起大鼠大脑皮质神经细胞线粒体氧化损伤及能量代谢障碍,并且与镉的浓度呈明显的剂量-效应关系。     

α-硫辛酸对亚慢性镉暴露致大鼠大脑皮质超微结构损伤的保护效应

为探讨α-硫辛酸(α-LA)在亚慢性镉暴露引起大鼠大脑皮质超微结构损伤中的保护作用,24只21日龄雌性SD大鼠被随机分为4组,分别为对照组、α-LA组、镉组和镉与α-LA共处理组,镉组采用50 mg/L醋酸镉溶液以自由饮水方式进行染毒,共处理组在镉暴露的基础上同时用α-LA溶液按50 mg/(kg·d)进行灌胃。12周后用原子吸收分光光度法测定大鼠大脑皮质中镉的质量分数,透射电镜观察大脑皮质组织超微结构的变化,Western-blot检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果表明,α-LA能够显著降低镉引起的大鼠大脑皮质镉质量分数的升高(P0.05),缓解镉引起的超微结构损伤,抑制镉导致的Bcl-2/Bax比值下降和Cleaved caspase-9,-3表达量的升高(P0.05或P0.01)。这说明α-LA对亚慢性镉暴露致大鼠大脑皮质超微结构的损伤具有保护作用。     

Fas/FasL信号通路在镉致PC12细胞凋亡中的作用及NAC的保护效应

为研究Fas/Fas L信号通路在镉致PC12细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护效应,本试验用10 mol/L醋酸镉和10 mg/L anti-Fas L抗体、40 mol/L Z-IETD-FMK、100 mol/L NAC单独或联合处理PC12细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,Western-blot法检测Fas、Fas L、FADD和cleaved caspase-8的蛋白表达量。结果,anti-Fas L抗体和Z-IETD-FMK极显著抑制镉致PC12细胞凋亡率升高(P0.01);NAC极显著抑制镉致PC12细胞凋亡形态学变化,Fas、Fas L、FADD和Cleaved caspase-8蛋白表达量的升高(P0.01)。上述结果说明,镉可通过Fas/Fas L信号通路诱导PC12细胞凋亡,NAC在镉致PC12细胞凋亡Fas/Fas L信号通路中具有保护作用。     

钙磷对体外培养SD大鼠破骨细胞生成和活化的影响

通过成骨细胞与脾细胞共培养,在体外诱导脾细胞转化为破骨细胞,转化过程中分别加入3、5mmol/L的钙或磷及不同比例的钙、磷,设不添加钙、磷因子对照。经形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝研究钙、磷因子对大鼠破骨细胞生成和活化的影响。结果表明,培养液中钙、磷浓度分别为35、mmol/L时对破骨细胞的生成及活化均有显著抑制作用(P<0.05),5mmol/L Ca对破骨细胞生成活化的抑制与对照组差异极显著(P<0.01)。CCa∶CP=2∶1组对破骨细胞生成和活化的抑制作用最强。证实钙、磷通过抑制破骨细胞的生成和活化抑制破骨细胞的骨吸收活性。     

亚慢性铅与镉单独或联合暴露致大鼠氧化损伤作用及α-硫辛酸的保护效应

为研究铅、镉单独及其联合暴露对SD大鼠机体的氧化损伤以及α-硫辛酸的保护作用,以300mg/L铅、50 mg/L镉单独或联合采用自由饮水方式染毒SD大鼠,α-硫辛酸保护组在铅、镉自由饮水的同时用α-硫辛酸(50 mg/kg剂量)灌胃,12周后测定血清中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)的含量。结果,与对照组相比,各染毒组CAT、SOD、GSH-Px活性极显著降低(P0.01),MDA含量极显著升高(P0.01)。与铅、镉单独染毒组相比,铅镉联合染毒组GSH-Px活性显著或极显著降低(P0.05或P0.01),SOD和CAT活性降低,但无显著性差异;MDA含量升高,与铅单独染毒组差异显著(P0.05)。与对应染毒组相比,染毒的同时添加α-硫辛酸组大鼠血清中CAT、SOD、GSH-Px活性和MDA含量均有所恢复,除镉与α-硫辛酸联合组MDA含量差异不显著外,其余组均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。上述结果说明,铅、镉能够导致大鼠氧化损伤,α-硫辛酸在一定程度上能够有效缓解铅、镉引起的氧化损伤,起到一定的保护作用。     

玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响

为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEA)诱导睾丸支持细胞(sertoli cell,SC)凋亡的影响,试验以分离大鼠原代SC为材料,不同浓度ZEA处理SC 24 h,采用CCK-8法观察支持细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的影响,q RT-PCR检测Fas、Fas L转录水平的变化,Western-blot法检测Fas、Fas L等凋亡相关蛋白表达的情况。结果显示,与对照组相比,随着ZEA浓度的升高,睾丸支持细胞的活力受到明显的抑制(P0.05或P0.01);流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,10、20 mol/L ZEA染毒组细胞凋亡率呈极显著升高(P0.01);q RT-PCR结果分析显示,10、20 mol/L染毒组细胞Fas和Fas L转录水平呈显著或极显著升高(P0.05或P0.01);凋亡相关蛋白检测结果显示,与对照组相比,5 mol/L以上ZEA染毒组Fas、Fas L、FADD、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3蛋白表达均出现显著或极显著性升高(P0.05或P0.01)。结果表明,ZEA可以通过Fas/Fas L途径诱导睾丸支持细胞发生凋亡。     

乳鼠成骨细胞的培养及鉴定

无菌采取5日龄SD大鼠的颅盖骨,用胰蛋白酶预消化后,漂洗,剪碎,再用Ⅱ型胶原酶消化获得成骨细胞。通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布,探讨一种经济、高效的原代成骨细胞培养方法。倒置相差显微镜形态观察结果显示,未贴壁的细胞呈圆形,贴壁生长的细胞呈不规则梭形、三角形或多角形,单核,有1~3个核仁;碱性磷酸酶和钙化结节染色均呈阳性(阳性率≥98.06%);MTT法结合形态学观察结果显示,成骨细胞培养至第10 d时活性最强。证实用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

镉对BRL 3A细胞缝隙连接通讯功能的影响

为探讨镉对大鼠肝细胞(BRL 3A)缝隙连接通讯功能的影响,以0、2.5、10μmol/L醋酸镉溶液分别处理BRL 3A细胞12h,采用实时分析技术测定细胞指数,显微镜观察细胞形态,划痕染料标记示踪法检测细胞缝隙连接通讯(GJIC),激光共聚焦观察缝隙连接蛋白Cx43的分布,免疫印迹测定Cx43的表达及其磷酸化水平。结果显示,随着镉浓度的增大(2.5、10μmol/L),细胞指数值降低,细胞间荧光黄两侧扩散距离极显著减少(P0.01),Cx43在细胞膜上分布减少、胞内增多,Cx43的表达及其磷酸化水平极显著降低(P0.01)。结果表明,镉对BRL 3A细胞有明显细胞毒性,可抑制GJIC,其机制可能是镉诱导BRL 3A细胞Cx43分布异常、表达减少及磷酸化水平降低。