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为了评价鸡β-防御素的功能与基因工程化生产的可能性,从已构建的重组载体pGEM-T Easy-gal-8中克隆gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建表达质粒pGEX-6P-1-gal-8,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.挑取阳性克隆菌用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果检测显示,融合表达的GST-gal-8蛋白大小约30 ku,经灰度扫描显示该融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的119 mg/L.用固定化的谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化,融合蛋白经Prescission蛋白酶酶切并纯化获得了完整的gal-8成熟多肽.抑菌活性试验显示,表达的gal-8成熟肽对黄色微球菌有一定的抑菌活性. 相似文献
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禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用PCR法检测强毒力岛主要结构基因irp1、irp2、fyuA在禽致病性大肠杆菌中的分布;铬苯胺醇法检测铁载体的合成;SDS-PAGE法检测耶尔森菌摄铁蛋白HMWP1和HMWP2的表达,以半数致死量试验测定禽致病性大肠杆菌致病性与强毒力岛摄铁功能的关系。结果表明,7株禽致病性大肠杆菌强毒力岛irp1、irp2和fyuA基因的检出率为100%;铬苯胺醇平板上都能产生橙色透明晕圈;缺铁条件下,能够表达与耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2且半数致死量试验验证禽致病性大肠杆菌的毒力与强毒力岛摄铁功能呈正相关。证实禽致病性大肠杆菌中强毒力岛的摄铁功能与其致病性有密切的联系。 相似文献
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根据大肠杆菌的密码子偏好性,将编码AvBD2成熟肽的基因原片段Na-AvBD2优化为片段Op-AvBD2,将2条片段分别转化至大肠杆菌中重组表达,表达产物经GST树脂纯化后,对二者的表达水平和抗菌活性进行了比较。结果,融合蛋白rOp-AvBD2的表达量比rNa-AvBD2高2倍。而两者对大肠杆菌(CM-CC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)的抑菌活性及对鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)菌体超微结构的破坏程度无显著差异。结果提示AvBD2在预防和治疗细菌感染中具有替代抗生素的潜在应用价值,而密码子优化将成为通过基因工程生产AvBDs的可行途径。 相似文献
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鸡β防御素2成熟肽基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性分析 总被引：2，自引：0，他引：2
为构建基因重组酵母菌株表达鸡β防御素2(Gal-2)并研究其抗菌活性,将鸡β防御素2成熟肽基因克隆到pPIC9K中,获得重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2并用电转化法转入酵母菌GS115,筛选出阳性克隆后用甲醇诱导,表达上清经Tricine-SDS-PAGE和抑菌试验检测,最后通过禽致病性大肠杆菌CVCC1565感染雏鸡,研究表达上清的预防效果。结果表明,重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2构建成功,Tricine-SDS-PAGE检测到分子质量在5.8ku左右的目的条带,表达上清能抑制包括2种禽致病菌在内的多种细菌的生长;在禽致病性大肠杆菌感染雏鸡的试验中,注射不同浓度的Gal-2表达上清组与空酵母表达上清组、PBS对照组相比,死亡率均极显著降低(P<0.01),表达上清显示了较好的预防效果。该研究成功构建了表达鸡β防御素2的毕赤酵母菌株,为鸡防御素作为新型饲料添加剂的研发提供了基础。 相似文献
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鸡β-防御素13对尼罗罗非鱼生长和疾病抗性的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为探讨禽类β-防御素13(gallinaein-13,Gal-13)作为鱼用抗生素替代品的可能性,将150尾同塘同规格尼罗罗非鱼鱼种随机等分为2组:对照组喂商品罗非鱼饵料;Gal-13组在该饵料中添加100 mg/kg的Gal-13.通过观测试验鱼的生长表现及其对凡隆气单胞菌BJCP-9株的抵抗力和黏附能力,并采用cellELISA法体外测试Gal-13对BJCP-9黏附罗非鱼肠上皮的影响.结果显示,罗非鱼饲料中添加100 mg/kgGal-13可显著提高其生长表现和抗BJCP-9感染能力(P＜0.05);100μg/mL的Gal-13并不能抑制BJCP-9生长,但能在体内外抑制BJCP-9时罗非鱼肠道上皮细胞的黏附.离体模拟黏附试验表明,Gal-13在25和2.5/μg/mL的低浓度下有抗黏附作用(P＜0.05),提示Gal-13的抗黏附作用可能是其促进动物生长和提高罗非鱼抗凡隆气单胞菌感染的机制之一,这种抗黏附作用同离子桥和/或配体一受体连接有关,同疏水性无关. 相似文献
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