国产法医DNA检验设备联合应用测试研究初探

利用国产DNA检测设备(包括核酸自动提取仪、基因扩增仪及遗传分析仪)对血样、口腔拭子及烟头样本进行DNA提取、PCR扩增及电泳检测,其中1000份血样DNA检测成功率达100%,32个口腔拭子和烟头样本成功率达96.9%,获得的STR分型准确、峰型尖锐、无等位基因丢失。结果表明国产DNA检测设备即核酸自动提取仪、基因扩增仪及遗传分析仪可配套使用在血样、口腔拭子及烟头等检材的DNA检测上。     

AS-PCR技术检测20个mtDNA SNP位点及单倍型频率

目的基于等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA(mtDNA)SNP的方法。方法基于AS-PCR原理,选择20个mtDNA编码区SNP位点,分为两组,分别标记FAM和HEX荧光,每个位点设计具有长度差异的两条上游(下游)等位基因特异性引物以及一条下游(上游)通用引物。结合AS-PCR技术和毛细管电泳,检测200份无关个体血样。各位点随机选取至少3个样本进行直接测序验证,并进行单倍型频率调查。结果 200份血样均得到清晰分型,各位点的检测结果与直接测序结果完全一致。10μL体系下,DNA最低检测浓度为0.2pg,当模板量为0.5~5 pg时能得到较为理想的分型图谱。在200名无关个体中,共分出15种单倍型,单倍型多样性为0.906 0。结论 AS-PCR技术是一种简单、快速且有效的mtDNA SNP分型方法,适用于法庭科学检验的需求。     

DNA甲基化检测方法及其法医学应用研究进展

DNA甲基化是表观遗传标记的重要组成部分,参与基因表达的调控,在生物发育、衰老以及肿瘤学等领域受到广泛关注。由于具有相对稳定性、可遗传、含量丰富、随龄变化等特点,在法医学领域,DNA甲基化可以作为DNA序列相关经典遗传标记的有效补充,用于年龄推断、组织体液来源检测、同卵双生子的鉴定等。DNA甲基化的检测方法主要有基于甲基化敏感限制性内切酶、重亚硫酸盐转化以及甲基化CpG结合蛋白等原理而建立的一系列方法,近年研究表明,第三代测序技术也可用于DNA甲基化检测。本文就DNA甲基化检测方法及在法医学领域的应用研究进行回顾与综述,以期为法医学实践提供参考。     

16个线粒体DNASNP复合检测体系的建立

目的建立一种复合检测线粒体DNA（mtDNA）单核苷酸多态性（SNP）分型的方法。方法通过设计等位基因特异性引物并结合毛细管电泳分型技术平台,建立包含16个mtDNASNP位点的复合扩增检测体系。对50名汉族无关个体血样进行mtDNASNP检测,并通过直接测序法对其分型结果进行验证。结果50个样本经本检测体系复合扩增后,均得到清晰的SNP分型结果,当模板量在0．5～10pg时能得到较理想的分型图谱。样本的复合检测结果与直接测序法结果完全一致。结论建立的复合检测体系检测mtDNASNP方法灵敏度高、操作简便、分型准确,为针对mtDNA进行简便、有效的中高通量多态性分型提供了一种新方法。     

等位基因特异性PCR技术及其法医学应用

等位基因特异性PCR（allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR）是一种基于等位基因特异性引物引导的PCR技术,可以有效地分析单核苷酸多态性（SNP）,包括碱基的转换、颠换以及插入/缺失多态性,在疾病研究、分子诊断以及法医物证学研究中具有很好的应用价值.本文系统地综述了AS-PCR技术的原理、检测手段、改进方法及在常染色体、Y染色体和线粒体SNP等领域的研究成果,探讨其法医学应用价值.     

国产遗传分析仪测试专用等位基因标准物的新型制备方法研究

利用定点突变技术,以D2S441基因座为靶位点,通过体外克隆重组的方法建立包含该STR位点重复单位为8-17的等位基因克隆库,调整模板的浓度后,采用荧光标记引物,对上述模板混合物进行复合模板PCR扩增,最终获得了高质量的等位基因分型标准物。测试结果表明,该方法制备的等位基因标准物可完全满足GA118-16A等国产遗传分析仪的测试和验证要求。