| 奶牛乳腺特异性表达人溶菌酶基因载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 刘庆友,刘晟,王丹,李辉,李湘萍,罗婵,陆凤花,石德顺.奶牛乳腺特异性表达人溶菌酶基因载体的构建与表达[J].中国兽医科学,2011(8). |
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| 作者姓名： | 刘庆友 刘晟 王丹 李辉 李湘萍 罗婵 陆凤花 石德顺 |
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| 作者单位： | 广西大学动物繁殖研究所亚热带生物资源保护利用国家重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2007AA100505); 国家转基因重大专项(2008ZX08007-003); 国家自然科学基金项目(30960251); 广西自然科学基金项目(0991007Z) |
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| 摘 要： | 为探讨应用转基因动物技术降低奶牛乳腺炎发病的可行性,参照人溶菌酶(human lysozyme,hLZ)基因序列(NM_000239.2)设计引物,采用RT-PCR方法从人胎盘组织中成功扩增克隆了406bp的hLZ基因成熟肽片段。应用娟姗牛酪蛋白乳腺特异表达调控元件,经过多步酶切、连接、转化、筛选、鉴定,构建成奶牛乳腺表达hLZ的载体pBCN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(13.6kb)和pBCN-3.8-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(12.2kb)。将构建的2个载体瞬时转染Bcap细胞,24h后可观察到EGFP的表达;通过实时定量PCR检测比较2个载体hLZ的表达丰度,结果,相对表达量分别为0.89±0.04和0.62±0.05。将线性化的pB-CN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo载体转染Bcap细胞,筛选后获得阳性细胞克隆,纯化阳性细胞总蛋白进行SDS-PAGE分析,与空白对照相比,检测到14ku的新蛋白条带。Western-blot分析中亦出现14ku的特异性条带。证实构建的载体能够正常表达hLZ基因,这为进一步研究获得自然抵抗乳腺炎的转基因奶牛奠定了工作基础。
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| 关 键 词： | 奶牛 乳腺特异性表达 人溶菌酶基因 转基因载体 |
Construction and expression of bovine mammary gland specific expressing vectors with human lysozyme gene |
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| LIU Qing-you,LIU Sheng,WANG Dan,LI Hui,LI Xiang-ping,LUO Chan,LU Feng-hua,SHI De-shun.Construction and expression of bovine mammary gland specific expressing vectors with human lysozyme gene[J].Veterinary Science in China,2011(8). |
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| Authors: | LIU Qing-you LIU Sheng WANG Dan LI Hui LI Xiang-ping LUO Chan LU Feng-hua SHI De-shun |
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| Institution: | LIU Qing-you,LIU Sheng,WANG Dan,LI Hui,LI Xiang-ping,LUO Chan,LU Feng-hua,SHI De-shun (State Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization/ Animal Reproduction Institute,Guangxi University,Nanning 530005,China) |
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| Abstract: | To explore the feasibility of decreasing mastitis in cows using transgenic animal techniques,according to the mRNA sequence of human lysozyme(hLZ)(NM_000239.2), using RT-PCR technique,a 406 bp hLZ fragment was amplified from total RNA of human placenta tissues. Using bovine beta-casein regulatory elements as promoter,two mammary gland-specific expressing hLZ gene vectors pBCN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(13.6 kb) and pBCN-3.8-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(12.2 kb) were constructed,after several times of digesting-ligasing-tr... |
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| Keywords: | bovine mammary gland-specific expression human lysozyme gene transgenic vector |
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