| 抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘菲,唐卫杰,程安春,汪铭书,赵婷婷,韩清林,高丽芹.抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽医科学,2011(6). |
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| 作者姓名： | 刘菲 唐卫杰 程安春 汪铭书 赵婷婷 韩清林 高丽芹 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物医学院;动物疫病与人类健康四川省重点实验室;四川省大英县畜牧局; |
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| 基金项目： | 四川省教育厅自然科学基金项目(2006A012); 教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848); 现代农业产业技术体系建设专项(nycytx-45-12) |
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| 摘 要： | 采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。
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| 关 键 词： | 抗鹅细小病毒卵黄IgG 纯化 间接ELISA 应用 |
Preparation of anti-GPV yolk IgG and development of an indirect-ELISA for detection of goose parvovirus infection in goose |
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| LIU Fei,TANG Wei-jie,CHENG An-chun,WANG Ming-shu,ZHAO Ting-ting HAN Qing-lin,GAO Li-qin.Preparation of anti-GPV yolk IgG and development of an indirect-ELISA for detection of goose parvovirus infection in goose[J].Veterinary Science in China,2011(6). |
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| Authors: | LIU Fei TANG Wei-jie CHENG An-chun WANG Ming-shu ZHAO Ting-ting HAN Qing-lin GAO Li-qin |
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| Institution: | LIU Fei1,2,TANG Wei-jie1,CHENG An-chun1,WANG Ming-shu1,ZHAO Ting-ting1 HAN Qing-lin1,3,GAO Li-qin1(1.College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China,2.Key Laboratory of Animal Diseases and Human Health of Sichuan Province,3.Bureau of Animal Husbandry of Daying,Sichuan Province,Daying 629300,China) |
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| Abstract: | IgG was extracted from egg yolk of goose infected with goose parvovirus(GPV) by the methods of water-dilution-octanoic acid-ammonia sulfate initial extraction and DEAE chromatography.The concentration and purity of the extracted IgG were detected by protein nucleic acid detector and SDS-PAGE.Rabbit anti-goose IgG HRP was prepared.An indirect ELISA assay was developed for detecting the antibody against gosling plague.The optimal working conditions,specificity and reproducibility of the indirect ELISA assay w... |
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| Keywords: | anti-GPV yolk IgG purification indirect-ELISA application |
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