猪流行性腹泻病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为开发一种快速、准确、灵敏及定量检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）的实时荧光定量PCR方法，根据GenBank中登录的S基因高度保守核苷酸序列，设计1对PEDV S基因的特异性引物，建立以SYBR Green I为染料的荧光定量RT-PCR检测方法，并对疑似PEDV感染的临床样品进行检测并与普通RT-PCR结果进行比较。结果显示，所建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数R~(2)=1，其扩增效率E=2.03，熔解曲线为尖锐单峰；不与猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪δ冠状病毒和猪轮状病毒发生交叉反应，具有较强的特异性；最低检出浓度（1×10~(1) copies/μL）比普通RT-PCR方法灵敏100倍；批内批间重复性试验的变异系数均小于2%，重复性和稳定性好；将36份临床样品检测结果进行比较，与普通RT-PCR的总符合率为88.89%。结果表明，建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏度高，对PEDV的快速及定量检测具有重要意义。