四种猪呼吸道疾病综合征病原多重PCR检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 陈玉燕,杨俊,聂福平,王昱,张姜琳,秦敏,肖进文,王国民,李应国,蔡家利.四种猪呼吸道疾病综合征病原多重PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2015(4):339-344. |
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作者姓名: | 陈玉燕 杨俊 聂福平 王昱 张姜琳 秦敏 肖进文 王国民 李应国 蔡家利 |
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作者单位: | 重庆理工大学;重庆出入境检验检疫局/重庆市进出口食品安全工程中心;重庆大学生物工程学院;云南农业大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 国家质检公益项目(201310093);国家质检总局科技项目(2013IK049);重庆市科技攻关计划项目(cstc2012ggyyjs80014) |
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摘 要: | 为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)和猪肺炎支原体(M.hyo)的多重PCR方法,分别针对PRRSV的ORF1a基因、PCV2的ORF2基因、APP的OMLA基因和M.hyo的P46基因的保守区域设计4对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了可同时扩增PRRSV(225bp)、PCV2(337bp)、APP(107bp)、M.hyo(176bp)相应基因的四重PCR方法。结果显示,该方法能单管同时特异地鉴别检测PRRSV、PCV2、APP、M.hyo 4种病原体,对猪瘟病毒、副猪嗜血杆菌、猪呼吸道冠状病毒、猪流感病毒、猪细环病毒及猪细小病毒等无特异性扩增,说明该PCR具有良好的特异性;方法的灵敏度分别为195、272、241、321pg/μL。应用该方法对重庆市的61份样品进行检测,其中PRRSV、PCV2、APP、M.hyo的阳性率分别为22.9%(14/61)、18.0%(11/61)、8.2%(5/61)和18.0%(11/61)。该方法的建立为临床上4个病原的快速鉴别诊断提供了有力的技术手段。
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关 键 词: | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 胸膜肺炎放线杆菌 猪肺炎支原体 多重PCR |
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