| 微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 王屿,罗建勋,马米玲,关贵全,李有全,刘爱红,任巧云,刘军龙,殷宏.微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[J].中国兽医科学,2008,38(7). |
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| 作者姓名： | 王屿 罗建勋 马米玲 关贵全 李有全 刘爱红 任巧云 刘军龙 殷宏 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
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国家自然科学基金
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国家科技支撑计划
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科技部欧盟项目
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中国农业科学院杰出人才基金
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欧盟EPIZONE、ICTTD3
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SSA-INCOME项目 |
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| 摘 要： | 从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.
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| 关 键 词： | 微小牛蜱 Bm91基因 分泌表达 微小牛蜱 基因 亚克隆 毕赤酵母 诱导表达 Pichia pastoris expression gene 蛋白 重组菌株 反应活性 培养上清液 显示 结果 分析 甲醇 高拷贝 抗性筛选 电转化 线性化 |
Cloning of Bm91 gene of Boophilus microplus and its expression in Pichia pastoris |
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| WANG Yu,LUO Jian-xun,MA Mi-ling,GUAN Gui-quan,LI You-quan,LIU Ai-hong,REN Qiao-yun,LIU Jun-long,YIN Hong.Cloning of Bm91 gene of Boophilus microplus and its expression in Pichia pastoris[J].Veterinary Science in China,2008,38(7). |
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| Authors: | WANG Yu LUO Jian-xun MA Mi-ling GUAN Gui-quan LI You-quan LIU Ai-hong REN Qiao-yun LIU Jun-long YIN Hong |
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