芪黄煎剂对脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的 观察芪黄煎剂对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的巨噬细胞M1型极化及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinases,p38MAPK）/核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）通路的影响。方法 对SD大鼠灌服芪黄煎剂制备含药血清。将RAW264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+芪黄煎剂组、芪黄煎剂+LPS组、LPS+NF-κB抑制剂组、LPS+p38MAPK抑制剂组、LPS+NF-κB抑制剂+芪黄煎剂组及LPS+p38MAPK抑制剂+芪黄煎剂组。除了对照组,其余各组均使用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞24 h。采用流式细胞术检测巨噬细胞极化方向;ELISA法测定细胞培养上清液中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）水平。RT-qPCR法检测细胞内IL-6、IL-1β、TNF-α、NF-κB p65、p38MAPK、核因子-κB抑制蛋白α（inhibitor of nuclear factor-kappa B alpha,IκBα）、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6）mRNA表达水平,Western blot法检测NF-κB p65、p38MAPK、IκBα、TLR4、TRAF6蛋白表达水平。结果 与对照组比较,LPS组细胞表面CD86表达水平升高,CD206表达水平降低（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+芪黄煎剂组细胞表面CD86表达水平降低,CD206表达水平升高（P<0.05）;与LPS+NF-κB抑制剂组比较,LPS+NF-κB抑制剂+芪黄煎剂组细胞表面CD86、CD206表达水平降低（P<0.05）。芪黄煎剂、NF-κB抑制剂显著降低LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平（P＜0.05）,芪黄煎剂加强了NF-κB抑制剂的作用（P＜0.05）。芪黄煎剂、NF-κB抑制剂显著降低LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α、NF-κB p65、p38MAPK、IκBα mRNA及其蛋白表达水平（P＜0.05）,芪黄煎剂加强了NF-κB抑制剂的作用（P＜0.05）;NF-κB抑制剂不能显著降低LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TRAF6 mRNA及其蛋白表达水平（P＞0.05）,而芪黄煎剂显著加强了NF-κB抑制剂的作用（P＜0.05）。结论 芪黄煎剂含药血清可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其机制可能与调控p38MAPK/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞向M1型极化有关。