生物素——亲合素系统试剂的制备及其鉴定

本文报告了用N—羟基丁二酰亚胺法制备生物素酯以及应用羧甲基纤维素离子交换法从鸡蛋清中提取纯化亲合素的全过程,并对二者的部分理化性质和生物学活性进行了鉴定。所得生物素酯在普通显微镜下为白色结晶。熔点(MP)为201℃,质谱所得分子量(MW)为340dlt。纯化亲合素所带电荷和泳动方向与溶菌酶相同,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为64000dlt,用N—溴琥珀酰亚胺作用于亲合素可灭活其活性,阻止了与生物素间的结合,用233nm紫外分光光度法和用羟基偶氮苯甲酸可见分光光度法测得亲合素活性值为10.3个单位。此外,还对生物素酯与抗体之间结合比以及应用改良过碘酸钠法酶标亲合素过程进行了探讨。生物素与抗体间结合比以1:7为最佳,酶标亲合素的工作浓度约5mg/ml(1:1600)。