| 猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 施开创,陈宏备,覃芳芸,李向涛,胡杰,郑喜邦,李军.猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2011(9). |
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| 作者姓名： | 施开创 陈宏备 覃芳芸 李向涛 胡杰 郑喜邦 李军 |
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| 作者单位： | 广西动物疫病预防控制中心;广西大学动物科学技术学院; |
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| 基金项目： | 广西科学基金项目(桂科青0728047); 广西科技创新能力与条件建设基金项目(08-05-01D) |
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| 摘 要： | 为了建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)的检测方法,根据GenBank中EMCV 3D基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。该方法线性关系好,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数达到0.998;敏感性高,检测下限为10copies/μL,比普通PCR敏感100倍;特异性强,只有EMCV呈阳性,而与猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、BHK-21正常细胞均无交叉反应;重复性好,组内与组间的变异系数均小于1.5%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠的脑、心、脾中的病毒载量进行了检测,同时对临床采集的153份可疑病料进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的检测及定量分析。
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| 关 键 词： | 脑心肌炎病毒 猪 荧光定量反转录聚合酶链反应 TaqMan探针 |
Development and application of a TaqMan real-time RT-PCR assay for the detection of porcine encephalomyocarditis virus |
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| SHI Kai-chuang,CHEN Hong-bei,QIN Fang-yun,LI Xiang-tao,HU Jie,ZHENG Xi-bang,LI Jun.Development and application of a TaqMan real-time RT-PCR assay for the detection of porcine encephalomyocarditis virus[J].Veterinary Science in China,2011(9). |
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| Authors: | SHI Kai-chuang CHEN Hong-bei QIN Fang-yun LI Xiang-tao HU Jie ZHENG Xi-bang LI Jun |
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| Institution: | SHI Kai-chuang1,CHEN Hong-bei2,QIN Fang-yun1,LI Xiang-tao2,HU Jie1,ZHENG Xi-bang2,LI Jun1(1.Guangxi Center for Animal Disease Control and Prevention,Nanning 530001,China,2.College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530005,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | encephalomyocarditis virus(EMCV) pig real-time RT-PCR TaqMan probe |
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