| 空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 胡元庆,黄金林,李求春,刘志成,潘志明,焦新安.空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定[J].中国兽医科学,2011(11). |
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| 作者姓名： | 胡元庆 黄金林 李求春 刘志成 潘志明 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31072150); 国家科技支撑计划项目(2009BADB9B01); 教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0978); 江苏高校优势学科建设工程项目 |
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| 摘 要： | 将空肠弯曲菌NCTC11168基因组用Sau3AⅠ部分酶切,回收400～3 000bp的片段。用BamHⅠ酶切原核表达载体pET30a(b,c),用SAP去磷酸化后,切胶回收线性载体片段。将基因组片段与载体按摩尔比例10∶1连接,转化DH5α感受态细胞,PCR分析插入片段大小的分布和插入的正确率。从转化的平板上提取质粒,转化表达宿主菌BL21(DE3),获得基因组表达文库。用IPTG诱导BL21(DE3),SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。提取基因组,以0.5U/μg Sau3AⅠ于37℃部分酶切基因组,回收400～3 000bp片段。载体用2.5U/μg BamHⅠ线性化后,用0.8U/μg SAP将其完全去磷酸化。基因组片段与载体连接转化DH5α感受态细胞,获得了基因组表达文库,库容达52 700个克隆,可以覆盖弯曲菌全基因组4次以上,片段插入正确率为83.3%～91.7%,片段大小为400～3 000bp,且均匀分布,IPTG诱导表达文库后蛋白呈现高效表达,表明成功构建了空肠弯曲菌的基因组表达文库。
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| 关 键 词： | 空肠弯曲菌 基因组表达文库 毒力因子 |
Construction and identification of the genomic expression library from Campylobacter jejuni strain NCTC11168 |
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| HU Yuan-qing,HUANG Jin-lin,LI Qiu-chun,LIU Zhi-cheng,PAN Zhi-ming,JIAO Xin-an.Construction and identification of the genomic expression library from Campylobacter jejuni strain NCTC11168[J].Veterinary Science in China,2011(11). |
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| Authors: | HU Yuan-qing HUANG Jin-lin LI Qiu-chun LIU Zhi-cheng PAN Zhi-ming JIAO Xin-an |
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| Institution: | HU Yuan-qing,HUANG Jin-lin,LI Qiu-chun,LIU Zhi-cheng,PAN Zhi-ming,JIAO Xin-an (Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Campylobacter jejuni genomic expression library virulence factor |
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