山羊支原体山羊肺炎亚种TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用 |
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引用本文: | 朱建勋,赵萍,郝华芳,陈胜利,翟肖辉,刘永生,储岳峰.山羊支原体山羊肺炎亚种TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用[J].中国兽医科学,2018(4). |
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作者姓名: | 朱建勋 赵萍 郝华芳 陈胜利 翟肖辉 刘永生 储岳峰 |
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作者单位: | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;甘肃煤田地质局一三三队; |
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摘 要: | 为了快速诊断和定量检测山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp),选择Mccp arc D基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立并优化反应体系,以Mccp和其他支原体及细菌等16种病原体基因组DNA为模板,进行普通PCR和TaqMan探针实时荧光定量PCR特异性检测,并对该方法的敏感性和重复性进行评估。同时利用该方法对68份山羊临床样本进行检测。结果显示,仅Mccp有扩增条带(185 bp)和明显的荧光扩增信号(Ct值为21.93),其余供试菌株没有扩增条带,且表现出微弱的荧光扩增信号(Ct值均大于31)。普通PCR检测的灵敏度为5.96×104copies/L,而TaqMan探针实时荧光定量PCR检测的灵敏度为5.96 copies/L。Ct值在组内和组间重复的变异系数均小于1%。对68份山羊临床样本进行TaqMan探针实时荧光定量PCR检测,结果有2份为Mccp阳性样本,阳性率为2.94%。本研究建立了一种特异、敏感、稳定可靠的Mccp TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,可用于Mccp的快速诊断和定量检测,为山羊传染性胸膜肺炎的防控提供了有效的技术手段。
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