| 非洲猪瘟病毒NP419L基因shRNA表达质粒的构建与筛选 |
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| 引用本文： | 宋红芹,姜翠翠,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌.非洲猪瘟病毒NP419L基因shRNA表达质粒的构建与筛选[J].中国兽医科学,2013(1):9-14. |
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| 作者姓名： | 宋红芹 姜翠翠 张鑫宇 夏晓莉 孙怀昌 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31001052);教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0978);江苏省优势学科建设工程资助项目(2010) |
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| 摘 要： | 为构建非洲猪瘟病毒(ASFV)shRNA表达质粒,以PCR扩增出非洲猪瘟病毒NP419L基因,并插入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒pNP419L-GFP,将其转染NIH-3T3细胞,NP419L-GFP融合基因在细胞中获得表达。针对NP419L基因设计并合成5对干扰序列,将其连接到RNAi表达载体pSuper中,构建干扰质粒pSuper-shNP419L-A,B,C,D,E,将质粒pNP419L-GFP和pSu-per-shNP419L-A,B,C,D,E分别共转染NIH-3T3细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪分析干扰效率。结果显示,5个干扰质粒均能抑制NIH-3T3细胞中NP419L-GFP融合基因的表达,其中pSuper-shNP419L-A,B的抑制效果较好,在87%以上,与pSuper-shNP419L-C,D,E之间均存在显著性差异(P<0.05)。表明,本试验成功构建出针对ASFV NP419L基因的RNA干扰质粒,并筛选出了有效沉默NP419L基因的干扰序列,为进一步体内试验研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 NP419L基因 RNA干扰 筛选 |
Construction and screening of shRNA plasmid targeting on NP419L gene of African swine fever virus |
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| SONG Hong-qin,JIANG Cui-cui,ZHANG Xin-yu,XIA Xiao-li,SUN Huai-chang.Construction and screening of shRNA plasmid targeting on NP419L gene of African swine fever virus[J].Veterinary Science in China,2013(1):9-14. |
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| Authors: | SONG Hong-qin JIANG Cui-cui ZHANG Xin-yu XIA Xiao-li SUN Huai-chang |
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| Institution: | (The Education Ministry Key Laboratory for Avian Preventive Medicine/College of Veterinary Medicine, Yangzhou University,Yangzhou 225009,China) |
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