鸡痘病毒282F_4弱毒株基因组BamHⅠ片段的克隆与分析

采用鸟枪法克隆鸡痘病毒（Ｆｏｗｌｐｏｘｖｉｒｕｓ，ＦＰＶ）基因组ＢａｍＨⅠ部分片段，用Ｔｈｇｏｘｉｇｅｎｉｎ一ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｆ_４弱毒株ＢａｍＨⅠ片段探针，点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ_４弱毒抹ＤＮＡ的ＢａｍＨⅠ片段，选取具有代表性的大小不同的６个质粒ｐＵＡ、ｎＵＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＥ、ｐＵＦ。６个质粒插入的片段Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为７．３，４．９．４．２，３．６，３．２，３．０ｋｂ，分别以ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄⅡ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｃⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ进行单酶切，又经适当组合酶切。实验结果表明，在各片段在在的单酶切位点为Ａ：ＥｃｏＲⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｈⅠ位点；Ｂ：ＥｃｏＲⅠ、ＸｈⅠ、ＨｉｎｄⅡ位点；Ｃ：ＣｌａⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ位点；Ｄ：ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ位点；Ｅ：ＥｃｏＲＶ位点；Ｆ：ＥｃｏＲＶ位点。逃出７．３ｋｂ片段，选取片段中单一酶切位点ＢｇｌⅡ，插入痘苗病毒（ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ，ｖｖ）Ｐ_７，５启动于和Ｐ_１１启动子控制下的报告基因ＬａｃＺ，构建成时时表达载体质粒，通过与ＦＰＶ２８２Ｅ_４株转染鸡胚成纤维细胞，一生的重组病毒，可以表