| A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 李登科,刘新生,方玉珍,潘丽,吕建亮,张中旺,周鹏,蒋守田,张永光,王永录.A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达[J].中国兽医科学,2014(9). |
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| 作者姓名： | 李登科 刘新生 方玉珍 潘丽 吕建亮 张中旺 周鹏 蒋守田 张永光 王永录 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A211);重大动物疫病疫苗临床免疫评价技术研究与示范项目(201203039);甘肃省国际科技合作计划项目(1011WCGA160) |
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| 摘 要： | 为构建A型口蹄疫病毒(FMDV)多抗原表位杆状病毒表达载体,将A型FMDV上5个B细胞表位(VP1140-160aa、VP270-80aa、VP352-67aa、3B29-42aa和3D16-30aa)和4个辅助性T细胞表位(VP1200-213aa、VP420-34aa、3A21-35aa和3D346-370aa)通过人工合成的方法串联起来构建复合多表位基因B。然后将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB。将酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pFastBac HTB-B转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将PCR鉴定正确的重组杆状病毒质粒利用CellfectinⅡReagent转染至Sf9细胞。通过间接免疫荧光试验和Western-blot检测表达情况。结果显示,能够得到与A型FMDV猪抗阳性血清结合的蛋白,大小约为22.3ku,与预期结果相符。结果表明,成功构建了A型FMDV多抗原表位杆状病毒表达载体,并在昆虫细胞中正确表达,为下一步蛋白纯化奠定了基础。
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| 关 键 词： | A型口蹄疫病毒 多抗原表位 Sf细胞 表达 |
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