| 口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定 |
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| 引用本文： | 李营营,毛箬青,杨帆,曹伟军,郑海学,张淼涛.口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定[J].中国兽医科学,2014(8). |
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| 作者姓名： | 李营营 毛箬青 杨帆 曹伟军 郑海学 张淼涛 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31302118);甘肃省科技重大专项计划项目(1302NDKA027);国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A211-1);甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目(1013JHTA008);中国农业产业体系(CARS-39) |
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| 摘 要： | 为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养。采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoRⅠ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡。结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍。结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础。
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 VP蛋白 犊牛甲状腺初代细胞 细胞凋亡 |
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