可介导多药耐药的cfr基因的原核表达及多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 钟洁,陈乐然,刘洋,吴聪明,左之才.可介导多药耐药的cfr基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J].中国兽医科学,2014(10). |
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作者姓名: | 钟洁 陈乐然 刘洋 吴聪明 左之才 |
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作者单位: | 四川农业大学动物医学院;中国农业大学动物医学院; |
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基金项目: | “十二五”国家科技支撑计划项目(2012BAK01B00) |
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摘 要: | 为建立监测Cfr蛋白的方法奠定基础,采用PCR方法扩增cfr基因,并克隆入pEasy-T载体;测序确认后克隆入pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET-28a-cfr,然后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中并用IPTG诱导表达Cfr蛋白;用纯化的Cfr蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并对抗体进行鉴定。结果显示,成功克隆了全长cfr基因,构建了重组质粒pET-28a-cfr,并诱导了Cfr蛋白表达以及制备了小鼠抗Cfr蛋白的多克隆抗体;Western-blot法鉴定该抗体可特异性识别重组蛋白Cfr;ELISA法测定抗体效价为1∶64 000。结果表明,用大肠杆菌BL21(DE3)能够成功表达Cfr蛋白,并且获得了高特异性、高效价的小鼠抗Cfr蛋白的多克隆抗体。
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关 键 词: | cfr基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体制备 |
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