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携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定
引用本文:梁恩涛,廖晓丹,黄小波,文心田,曹三杰,阳酉萍,段素芬,张丹,张小会.携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定[J].中国兽医科学,2014(3).
作者姓名:梁恩涛  廖晓丹  黄小波  文心田  曹三杰  阳酉萍  段素芬  张丹  张小会
作者单位:四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室;四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心;
基金项目:国家自然科学基金项目(31072144,30901084);国家公益性行业(农业)科研专项(20123056)
摘    要:为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS-7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门菌SL7207(pVAXD-S1),并对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行了鉴定。结果显示,SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定性良好,以每只1×109 CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠回肠末端组织内正常转录及表达。本研究为深入开展减毒沙门菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础。

关 键 词:猪流行性腹泻病毒  S基因  减毒鼠伤寒沙门菌  构建  鉴定
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