| 靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定 |
| |
| 引用本文： | 张宇飞,刘月,张亚坤,刘淑英.靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定[J].中国兽医科学,2013(1):53-59. |
| |
| 作者姓名： | 张宇飞 刘月 张亚坤 刘淑英 |
| |
| 作者单位： | 内蒙古农业大学兽医学院;内蒙古农业大学农业部动物临床诊疗技术重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31160493,30960271);内蒙古科技创新引导基金项目(20101808);教育部博士点基金博导类项目(20111515110008) |
| |
| 摘 要： | 为探讨绵羊内源性反转录病毒(enJSRV)在绵羊胚胎发育过程中的作用,利用脂质体将pEGFP-C1空载体转入绵羊绒毛膜滋养层细胞中,测定其转染效率。同时构建抑制enJSRV env基因的RNA干扰质粒,并将其转染到能稳定表达enJSRV env基因的绵羊绒毛膜滋养层细胞中,通过荧光定量PCR检测其干扰效率。结果显示,重组干扰质粒enJRSV-env-shRNA-1、enJRSV-env-shRNA-2、enJRSV-env-shRNA-3、enJRSV-env-shRNA-4、Negative-shRNA构建成功。Lipofectamine LTX脂质体体积为6.0μL,转染混合物体积为100μL,转染48h组的转染效率最高,为42.37%。与正常对照组细胞的enJSRV-env mRNA表达量相比,转染靶基因干扰质粒的各组绵羊绒毛膜滋养层细胞中enJSRV-env mRNA表达量分别下调了73.56%、66.82%、33.66%和18.16%。筛选出了一个干扰效率最高的RNA干扰质粒enJRSV-env-shR-NA-1,为以后包装慢病毒及进行动物试验来揭示enJSRV的生殖生物学作用奠定了坚实的基础。
|
| 关 键 词： | 滋养层细胞 RNA干扰 转染 实时荧光定量PCR 内源性绵羊肺腺瘤病毒 |
Construction and interference efficiency determination of short hairpin RNA eukaryotic expression plasmids targeting enJSRV env gene |
| |
| ZHANG Yu-feia,LIU Yuea,ZHANG Ya-kuna,LIU Shu-ying.Construction and interference efficiency determination of short hairpin RNA eukaryotic expression plasmids targeting enJSRV env gene[J].Veterinary Science in China,2013(1):53-59. |
| |
| Authors: | ZHANG Yu-feia LIU Yuea ZHANG Ya-kuna LIU Shu-ying |
| |
| Institution: | a,b(a.College of Veterinary Medicine;b.Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease of the Ministry of Agriculture,Inner Mongolia Agricultural University,Huhhot 010018,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
