残缘璃眼蜱subolesin基因的原核表达及表达产物的反应原性分析 |
| |
引用本文: | 王素艳,田占成,谢俊仁,陈泽,任巧云,罗金,王芳芳,袁小松,李凯,陈秋语,殷宏,刘光远.残缘璃眼蜱subolesin基因的原核表达及表达产物的反应原性分析[J].中国兽医科学,2015(4):331-338. |
| |
作者姓名: | 王素艳 田占成 谢俊仁 陈泽 任巧云 罗金 王芳芳 袁小松 李凯 陈秋语 殷宏 刘光远 |
| |
作者单位: | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
| |
基金项目: | 农业科技创新工程项目(ASTIP);国家自然科学基金项目(31201899);国际原子能机构项目(CRP No.16198/R0) |
| |
摘 要: | 为研究残缘璃眼蜱subolesin基因的生物学特性以及寻找新的抗蜱和蜱传病疫苗候选抗原,根据GenBank上登录的小亚璃眼蜱subolesin基因核苷酸序列设计特异性引物,以残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱的饥饿成蜱cDNA为模板,扩增出subolesin基因的完整阅读框(ORF)。将残缘璃眼蜱subolesin基因的PCR产物经EcoRⅠ+NotⅠ双酶切后连接至表达载体pGEX-4T-1,把重组质粒pGEX-4T-1-subolesin导入感受态细胞BL21(DE3)中,在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析subolesin基因的体外表达特征;用Western-blot分析Subolesin蛋白的反应原性。结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱subolesin基因的ORF长度分别为492、492、486bp,分别编码163、163、161个氨基酸。subolesin基因序列和推导的氨基酸序列的比对结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱与参考的小亚璃眼蜱的核苷酸序列同源性分别为98%、98%、89%,氨基酸序列同源性分别为98%、99%、93%。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组残缘璃眼蜱Subolesin蛋白的分子质量为45ku,纯化的subolesin重组抗原可与抗残缘璃眼蜱全蜱血清、残缘璃眼蜱唾液腺、卵巢血清有较强的反应原性。
|
关 键 词: | 残缘璃眼蜱 subolesin基因 原核表达 反应原性 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|