健脾化瘀方通过调节RASSF1A激活p38 MAPK信号通路治疗肝细胞癌的机制研究

目的 探讨健脾化瘀方治疗肝细胞癌的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组,健脾化瘀方含药血清低、中、高剂量组,每组10只;健脾化瘀方低、中、高剂量组大鼠分别灌胃健脾化瘀方4.32、8.64、17.28 g/kg,对照组灌胃等容积生理盐水。观察健脾化瘀方含药血清对肝癌细胞株HepG2和Huh7中Ras相关结构域家族1亚型A（Ras association domain family 1 isoform A, RASSF1A）、p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、细胞凋亡率、细胞增殖相关蛋白（p21、cyclin D1）、细胞凋亡相关蛋白［半胱天冬酶（cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase）-3、caspase-8、caspase-9］的影响。采用RASSF1A小干扰RNA（RASSF1A siRNA）干扰RASSF1A的表达,将细胞分为对照组、阴性血清组、含药血清组、含药血清＋对照siRNA组、含药血清＋RASSF1A siRNA组,通过CCK-8、EdU、TUNEL、Western blot实验验证健脾化瘀方是否通过RASSF1A发挥抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用;采用p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580抑制p38 MAPK信号通路,将细胞分为对照组、阴性血清组、含药血清组、含药血清＋SB203580组,通过CCK8、EdU、TUNEL、Western blot实验验证健脾化瘀方是否通过p38 MAPK信号通路发挥抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。结果 健脾化瘀方含药血清干预48 h后,RASSF1A mRNA和蛋白表达水平随着含药血清浓度的增加而升高,细胞凋亡率及p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与含药血清组比较,含药血清+RASSF1A siRNA组细胞中RASSF1A、p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平和细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与含药血清组比较,含药血清+SB203580组细胞中p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平和细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 健脾化瘀方可通过调节RASSF1A的表达,激活p38 MAPK信号通路抑制肝细胞癌细胞的过度增殖,并促进凋亡。