| 中国荷斯坦奶牛MD-2基因在HEK293细胞中的表达及稳定细胞系的构建 |
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| 引用本文： | 焦寒伟,赵宇,帅学宏,伍莉,陈吉轩,王红均,黄庆洲.中国荷斯坦奶牛MD-2基因在HEK293细胞中的表达及稳定细胞系的构建[J].中国兽医科学,2019(4):493-498. |
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| 作者姓名： | 焦寒伟 赵宇 帅学宏 伍莉 陈吉轩 王红均 黄庆洲 |
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| 作者单位： | 西南大学动物科学学院兽医科学工程研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(31802215);重庆市自然科学基金项目(cstc2018jcyjA0807);中央高校基本科研业务费项目(XDJK2019C024;XDJK2019D013);西南大学博士启动基金项目(5360300101;20700505) |
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| 摘 要： | 将中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 (myeloid differentiation protein-2,MD-2) cDNA全长克隆至pEGFP-N1真核表达载体,利用双酶切与测序进行鉴定。经脂质体2000,将pMD-2-EGFP重组质粒转染至HEK293细胞中,应用倒置荧光显微镜、流式细胞术和Western-blot分别检测融合蛋白的表达,利用极限稀释的方法获取单细胞,并利用G418抗性筛选,获取稳定细胞系。结果发现,目的基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码160个氨基酸。双酶切鉴定和测序结果均表明,MD-2基因编码区正确插入pEGFP-N1真核表达载体,读码框架正确,MD-2-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中,能够成功表达;极限稀释获取单细胞,用250?g/mL的G418筛选得到的细胞系,经流式细胞术和Western-blot检测,在pMD-2-EGFP稳定细胞系组,分子质量约为46 ku处,发现了特异性条带,而pEGFP-N1空载稳定细胞组,以及空白的HEK293细胞对照组,均未发现条带。综上所述,本研究成功构建了真核表达载体pMD-2-EGFP,并在HEK293细胞中能够成功表达;经极限稀释,并利用G418抗性筛选,成功获得了pMD-2-EGFP和pEGFP-N1稳定细胞系,这为进一步研究中国荷斯坦奶牛奶牛MD-2基因的生物学功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 中国荷斯坦奶牛 髓样分化蛋白-2 EGFP 真核表达 稳定细胞系 |
Expression of the China Holstein dairy cow MD-2 gene in HEK293 cells and construction of the stable cell lines |
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| JIAO Han-wei,ZHAO Yu,SHUAI Xue-hong,WU Li,CHEN Ji-xuan,WANG Hong-jun,HUANG Qing-zhou.Expression of the China Holstein dairy cow MD-2 gene in HEK293 cells and construction of the stable cell lines[J].Veterinary Science in China,2019(4):493-498. |
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| Authors: | JIAO Han-wei ZHAO Yu SHUAI Xue-hong WU Li CHEN Ji-xuan WANG Hong-jun HUANG Qing-zhou |
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| Institution: | (Veterinary Scientific Engineering Research Center,College of Animal Sciences,Southwestern University,Chongqing 402460,China) |
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| Abstract: | JIAO Han-wei;ZHAO Yu;SHUAI Xue-hong;WU Li;CHEN Ji-xuan;WANG Hong-jun;HUANG Qing-zhou(Veterinary Scientific Engineering Research Center,College of Animal Sciences,Southwestern University,Chongqing 402460,China) |
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| Keywords: | China Holstein dairy cow MD-2 EGFP fusion protein eukaryotic expression the stable cell line |
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