| 产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价 |
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| 引用本文： | 彭国瑞,董令赢,李旭妮,魏津,蒋玉文,彭小兵.产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价[J].中国兽医科学,2019(7):918-923. |
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| 作者姓名： | 彭国瑞 董令赢 李旭妮 魏津 蒋玉文 彭小兵 |
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| 作者单位： | 中国兽医药品监察所 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2017YFD0500905) |
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| 摘 要： | 为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1mL剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8MLD/0.1mL,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45MLD/0.1mL,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5MLD/0.1mL;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。
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| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌 腐败梭菌 Β毒素 ε毒素 Α毒素 共表达 疫苗 |
Preparation and evaluation of immune efficacy of genetic engineering triple vaccine for Clostridium perfringens C,D and Clostridium septicum |
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| PENG Guo-rui,DONG Ling-ying,LI Xu-ni,WEI Jin,JIANG Yu-wen,PENG Xiao-bing.Preparation and evaluation of immune efficacy of genetic engineering triple vaccine for Clostridium perfringens C,D and Clostridium septicum[J].Veterinary Science in China,2019(7):918-923. |
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| Authors: | PENG Guo-rui DONG Ling-ying LI Xu-ni WEI Jin JIANG Yu-wen PENG Xiao-bing |
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| Institution: | (China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,China) |
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| Abstract: | PENG Guo-rui;DONG Ling-ying;LI Xu-ni;WEI Jin;JIANG Yu-wen;PENG Xiao-bing(China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,China) |
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| Keywords: | Clostridium perfringens Clostridium septicum β-toxin ε-toxin α-toxin co-expression vaccine |
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