| 番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 王安平,吴萌,吴海涛,顾玲玲,朱善元.番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定[J].中国兽医科学,2019(4):468-474. |
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| 作者姓名： | 王安平 吴萌 吴海涛 顾玲玲 朱善元 |
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| 作者单位： | 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31302096);江苏省农业支撑项目(BE2013415) |
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| 摘 要： | 为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定,得到重组Bacmid DNA。将其转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒rBac-VP3,利用SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验对重组蛋白的表达情况进行检测,负染电镜观察病毒样颗粒,并通过Western-blot对病毒样颗粒进行鉴定。SDS-PAGE和Western-blot结果表明重组蛋白大小正确。间接免疫荧光试验结果显示,重组蛋白获得了成功表达。利用负染电镜可观察到直径约20 nm的典型二十面体病毒样颗粒。Western-blot结果显示该病毒样颗粒由VP3蛋白组成。本研究首次成功利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统制备了番鸭细小病毒样颗粒,为番鸭细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 番鸭细小病毒 病毒样颗粒 杆状病毒/昆虫细胞表达系统 制备 鉴定 |
Preparation and identification of Muscovy duck parvovirus-like particles |
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| Institution: | (Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocalional College、Jiangsu Key Laboratory for High-Tech Research and Development of Veterinary Biopharmweuticals,Taizhou 225300,China) |
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| Abstract: | WANG An-ping;WU Meng;WU Hai-tao;GU Ling-ling;ZHU Shan-vuan(Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocalional College、Jiangsu Key Laboratory for High-Tech Research and Development of Veterinary Biopharmweuticals,Taizhou 225300,China) |
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| Keywords: | Muscovy duck parvovirus virus-like particle baculovirus/insect cell expression system preparation identification |
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