| 可控细胞膜孔形成蛋白基因的克隆与表达 |
| |
| 引用本文： | 施伟庆,陈芹,孙怀昌.可控细胞膜孔形成蛋白基因的克隆与表达[J].中国兽医科学,2004,34(7):18-23. |
| |
| 作者姓名： | 施伟庆 陈芹 孙怀昌 |
| |
| 作者单位： | 扬州大学,兽医学院,江苏,扬州,225009 |
| |
| 摘 要： | 根据Wood 4 6株金黄色葡萄球菌α溶血素 (α HL)基因序列设计了引物 ,用高保真PCR从 180 0株金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出了 0 .9kb的α HL基因 ,序列测定结果显示 ,两菌株α HL基因的核苷酸序列有 6个碱基差异 ,但仅引起 1个氨基酸替换。用PCR分段克隆和定点突变技术将大肠埃希氏菌外膜蛋白A信号肽序列与α HL编码区融合 ,并将其第 130～ 134位氨基酸替换为 5个连续的组氨酸 ,获得的融合基因命名为H5基因。将其克隆入 pET 30a质粒 ,用获得的重组质粒pET H5转化感受态大肠埃希氏菌 ,获得分泌性表达H5的重组菌。经IPTG诱导后 ,重组菌表达出分子质量为 35ku的H5蛋白。经镍柱亲和层析纯化的H5对兔红细胞的半数溶血值为 180ng/mL ,能使鼠成纤维细胞PA317获得对台盼蓝和海藻糖的通透性 ,且能被Zn2 抑制。提示 ,表达的H5蛋白为可控细胞膜孔形成蛋白 ,能用作真核细胞内玻璃态保存的渗透剂
|
| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌 α溶血素基因 突变 原核表达 可控膜孔形成蛋白 |
| 文章编号： | 1000-6419(2004)07-0018-06 |
| 修稿时间： | 2004年3月12日 |
Cloning and expression of controllable cell membrane pore-forming protein gene |
| |
| SHI Wei-qing,CHEN Qin,SUN Huai-chang.Cloning and expression of controllable cell membrane pore-forming protein gene[J].Veterinary Science in China,2004,34(7):18-23. |
| |
| Authors: | SHI Wei-qing CHEN Qin SUN Huai-chang |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Staphylococcus aureus alpha-hemolysin gene mutagensis procaryotic expression (controllable) pore-forming protein |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
